Notch信號相關通路在乳腺癌和增生性中的表達

張 偉 韓玉貞

（濱州醫(yī)學院 禹城市人民醫(yī)院，山東 禹城，251200）

本研究采用One-step RP-PCR方法對Notch信號中的Notch1及JAG1在乳腺癌和增生性中的表達情況進行檢測，以驗證Notch信號致癌的可能機制和作用，現(xiàn)將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

收集我院2018年2至2019年12月期間50例經(jīng)病理報告確診為乳腺浸潤導管癌的新鮮癌標本，并獲得癌旁正常乳腺組織20例。本組患者均為女性，年齡范圍為35～75歲，平均為（51.2±3.7）歲，均符合WHO關于乳腺癌的相關診斷標準[1]。抗體為Notch1和JAG1，分別來源于鼠抗人和兔抗人，工作濃度分別為 1：50、1：300。

1.2 方法

1.2.1 病理學分析

對病變組（50例）和對照組（20例）病理進行常規(guī)HE染色，結合患者基本情況及免疫組化染色結果，采用One-step RP-PCR方法對病例Notch1及JAG1的表達情況進行檢測，并以SP法對病理樣本進行檢測，根據(jù)腺管和腺體形成、核多形性、核分裂計數(shù)，對乳腺癌進行組織學分級；根據(jù)組織病理學分級標準，明確乳腺增生性病變分期[2]。

1.2.2 一步法RP-PCR和SP法檢測

以Trizol法提取新鮮組織和病理組織標本的RNA，對其產(chǎn)率和純度進行鑒定，以一步法RP-PCR分別擴增Notch1和JAG1基因，二者逆轉錄、PCR起始、循環(huán)等反應條件均相同，分別為50℃（30min）、95℃（15min）、94-60-72℃（30s、45s、60s，共35個循環(huán)），并將所獲PCR產(chǎn)物（2.5μL）置于瓊脂糖凝膠中電泳，電壓設為100V，時間為30min，電泳結束后，采用圖像分析系統(tǒng)對凝膠進行拍照分析。以SP法對Notch1和JAG1蛋白的表達進行檢測，取各標本并對每例連續(xù)切片6張，厚度為5μm，經(jīng)免疫組織學處理置入37℃烘箱內過夜備用；檢測Notch1和JAG1蛋白，以小鼠胰腺、人肺癌和人乳腺癌標本為陽性對照，加Notch1和JAG1第1抗體，于濕盒內4℃冰箱過夜；染色結果判斷參照陽性細胞百分比，以≤10%為無著色，分級為“-”，以11～50%為弱（淡黃），分級為“+”，以51～75%為中（棕黃），分級為“++”，以 76～100%為強（棕褐），分級為“+++”[3]。

1.3 統(tǒng)計學分析

以SPSS12.5軟件包對所獲數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，以百分率（%）表示 Notch1和JAG1蛋白表達，采用檢驗，標準以P＜0.05為差異具有顯著性。

2 結果

研究結果顯示，LN分期N0期Notch1標準化系數(shù)中位數(shù)為0.58，N1期為1.05，比較差異具有顯著性（P＜0.05）；TNM分期Ⅰ期Notch1標準化系數(shù)中位數(shù)為0.57，Ⅱ期為1.05，Ⅲ期為0.59，Ⅰ期與Ⅱ期、Ⅱ期與Ⅲ期的比較差異具有顯著性（P＜0.05），Ⅰ期與Ⅲ期比較差異并不顯著（P＞0.05）；乳腺癌病理學分級Ⅰ期Notch1標準化系數(shù)中位數(shù)為0.55，Ⅱ期為0.83，Ⅲ期為1.05，組間比較差異均具有顯著性（P＜0.05）。Notch1和JAG1表達率與各病理指標的關系如表1。

表1 乳腺癌中Notch1和JAG1表達率與病理指標的關系[n（%）]

3 討論

Notch信號通路由Notch受體、配體及CSA DNA結合蛋白等構成，可在多個物種中表達，其對細胞生長發(fā)育、分化增殖以及凋亡等會產(chǎn)生決定性的影響，相關體外和動物實驗均已證實，活化的Notch信號可促使正常細胞轉化為惡性細胞，這種異常表達情況在乳腺癌、血液系統(tǒng)腫瘤等實體瘤中均有發(fā)現(xiàn)，就乳腺癌而言，相關通路在其形成、發(fā)生和發(fā)展過程中產(chǎn)生重要影響[4]。

本次研究結果顯示，LN分期和乳腺癌病理學分級比較差異均具有顯著性（P＜0.05）；TNM分期中Ⅰ期與Ⅱ期、Ⅱ期與Ⅲ期的比較差異具有顯著性（P＜0.05），Ⅰ期與Ⅲ期比較差異并不顯著（P＞0.05）。結合Notch1、JAG1表達率與各病理指標的關系可以得出，Notch信號相關通路在乳腺癌和增生性中的作用并不相同，Notch1和JAG1的異常表達均與乳腺癌存在內在關聯(lián)，明確Notch信號相關通路的表達情況，有助于進一步探索Notch基因的表達與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的關系。