正交試驗(yàn)法優(yōu)選山麥萊口服液的提取工藝

蒲秀峰，汪霞平，楊勸生

（甘肅天水岐黃藥業(yè)有限責(zé)任公司，甘肅　天水　741018）

正交試驗(yàn)法優(yōu)選山麥萊口服液的提取工藝

蒲秀峰，汪霞平，楊勸生

（甘肅天水岐黃藥業(yè)有限責(zé)任公司，甘肅天水741018）

山麥萊口服液是一種新型保健飲品，具有消食、除積、助消化的多種功能。其主要功效成分為黃酮，研究不同提取條件對山麥萊中總黃酮含量的影響，相同條件下，不同溶劑提取；相同溶劑，不同提取方法提取。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，同樣條件下，超聲波提取方法簡單、得率高、剩余物無有害殘留，可以綜合利用。

正交試驗(yàn)法；山麥萊口服液；黃酮

山麥萊口服液是根據(jù)元代著名醫(yī)家朱丹溪《丹溪心法》之保和丸等醫(yī)家名方，由我國著名老中醫(yī)胡伯虎開發(fā)而成的一種新型保健飲品，具有消食、除積、助消化等多種功能。該飲料的處方為山楂、麥芽、萊菔子、陳皮，其主要功效成分為黃酮。為了使該飲料的提取工藝更加合理可靠，本試驗(yàn)以黃酮含量和出膏率為考察指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計，優(yōu)選其最佳提取工藝。

1　儀器與試劑

JYT—1架盤藥物天平（上海光正醫(yī)療儀器有限公司馬頭牌）；AS系列超聲波清洗機(jī)（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；HH—6型智能數(shù)顯恒溫水浴鍋（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；干燥器（國營上海醫(yī)療廠）；BP211D分析天平（德國賽多利斯公司生產(chǎn)）；UV—5300PC型紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）。

實(shí)驗(yàn)所用藥材均購于天水天森藥業(yè)公司，符合2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）相關(guān)規(guī)定；蘆丁對照品購于中國藥品生物制品檢定所；聚酰胺粉（上海中秦化學(xué)試劑有限公司）；其余試劑為分析純。

2　方法與結(jié)果

山麥萊飲料處方中山楂為君藥，黃酮為主要功效成分，本實(shí)驗(yàn)采用超聲水提取的制備方法，選取提取時間A、提取溫度B和提取次數(shù)C作為提取工藝的3個因素（見表1），進(jìn)行正交試驗(yàn)。

表1　正交試驗(yàn)因素水平表

2.1山麥萊飲料中黃酮的測定

2.1.1試樣處理

稱取10 ml的試樣，加乙醇定容至25 ml，搖勻后，超聲提取20 min，放置，吸取上清液1.0 ml，于蒸發(fā)皿中，加1 g聚酰胺粉吸附，于水浴上揮去乙醇，然后轉(zhuǎn)入層析柱。先用20 ml苯洗，苯液棄去，然后用甲醇洗脫黃酮，定容至25 ml。此液于波長360 nm測定吸收值。同時以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，測定標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程，計算試樣中總黃酮含量。

2.1.2蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線

吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml于10 ml比色管中，加甲醇至刻度，搖勻，于波長360 nm比色。求回歸方程，計算試樣中總黃酮含量。

2.1.3計算和結(jié)果表示：

X=A×V2×100/V1×M×1 000

式中：X—試樣中總黃酮的含量，mg/100 g；

A—由標(biāo)準(zhǔn)曲線算得被測液中黃酮量，μg；

M—試樣質(zhì)量，g；

V1—測定用試樣體積，ml；

V2—試樣定容總體積，ml。

計算結(jié)果保留二位有效數(shù)字。

2.2出膏率的測定

取原藥材的量，共20 g，取9份，按照（L933）正交試驗(yàn)的方法進(jìn)行提取，濾過，濃縮。將濃縮液置于鼓風(fēng)干燥箱中烘干后，精密稱定所得干膏質(zhì)量，計算出膏率。

出膏率=干膏質(zhì)量/原藥材質(zhì)量×100%

2.3試驗(yàn)結(jié)果

（1）正交試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計分析

實(shí)驗(yàn)共有9個觀測值及實(shí)驗(yàn)組（見表2），總變異由A、B、C因素變異及誤差變異四部分組成，分析時平方和與自由度的計算式為：

平方和SST=SSA+SSB+SSC+SSe

自由度dfT=dfA+dfB+dfC+dfe

a=b=c=3表示A、B、C三個因素的水平數(shù)，ka=kb= kc=3表示不同因素對應(yīng)的每個水平的重復(fù)次數(shù)。

表2　山麥萊口服液的正交試驗(yàn)與分析（L933）

（2）下面對出膏率（%）單獨(dú)進(jìn)行各個因素（見表3～表6）觀測值正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析：

表3　C因素對標(biāo)準(zhǔn)觀測值的方差分析表

表4　A因素對標(biāo)準(zhǔn)觀測值的方差分析表

表5　B因素對標(biāo)準(zhǔn)觀測值的方差分析表

表6　　山麥萊口服液的出膏率（%）正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析表

統(tǒng)計結(jié)論：

由于df1=df2=1，查臨界F值表，得F0.05（1，1）=161，F(xiàn)0.0，1（1，1）= 405。FA＜F0.05（1，1）對應(yīng)的概率值pA＞0.05，差異不顯著；F0.05（1，1）＜FB＜F0.0，1（1，1），對應(yīng)概率0.01＜pB＜0.05，差異顯著；

FC＜F0.05（1，1），pA＞0.05，所以差異不顯著。

根據(jù)上述分析，對于出膏率，提取溫度間的差異顯著，即溫度的變化對實(shí)驗(yàn)測量指標(biāo)有影響，而提取時間和次數(shù)對出育率的影響不是很大。

（3）黃酮含量進(jìn)行各個因素觀測值正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析，具體見表7～表10。

表7　A因素對標(biāo)準(zhǔn)觀測值的方差分析表

表8　B因素對標(biāo)準(zhǔn)觀測值的方差分析表

表9　C因素對標(biāo)準(zhǔn)觀測值的方差分析表

表10　山麥萊口服液的黃酮含量正交試驗(yàn)結(jié)果的方差分析表

（4）統(tǒng)計結(jié)論：

由于df1=df2=1，查臨界 F值表，得F0.05（1，1）=161，F(xiàn)0.0，1（1，1）=405。FA＜F0.05（1，1）概率值 pA＞0.05，差異不顯著；FB＜F0.05（1，1），差異不顯著；FC＜F0.05（1，1），差異不顯著。

3　結(jié)束語

由方差分析結(jié)果可以看出：以出膏率為考察指標(biāo)時，因素C的影響比較顯著，且C＞A，因素B的影響不顯著；通過極差大小分析，可以得出結(jié)論，影響水提效果的順序?yàn)镃＞A＞B，因此最佳提取工藝為A1B2C3。以黃酮含量為考察指標(biāo)時，C因素的影響比較顯著，且C＞B＞A，A因素影響不顯著；通過極差大小分析，可以得出結(jié)論，影響水提效果的順序?yàn)镃＞B＞A，因此最佳提取工藝為A1B2C3。因此，可以確定水提取最佳工藝為A1B2C3，即加熱到70℃，提取40 min，提取3次。

［1］ 衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑（第8冊）［S］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：131.

［2］ 趙煥諄，豐寶田.中國果樹志一山楂卷［M］.北京：中國林業(yè)出版社，1996.

［3］ 中華人民共和國藥典委員會編.中華人民共和國藥典2010年版一部［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［4］ 李化，楊濱.山楂的炮制研究［J］.中國中藥雜志.2004，29 （6）：501-504.

［5］ 中國林業(yè)科學(xué)院.中國樹木志（第二卷）［M］.北京：中國林業(yè)出版社.1985.

［6］ 李苑，張敏.中草藥中黃酮類化合物質(zhì)提取工藝的研究［J］.廣東藥學(xué)雜志，1999（2）：4-6.

［7］ 張世潤，王立娟.山楂葉中黃酮類化合物提取工藝條件的篩選［J］.東北林業(yè)大學(xué)報，2001，23（5）：289-291.

［8］ 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司編.保健食品檢驗(yàn)與評價技術(shù)規(guī)范［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2003.

TQ461

A

10.3969/j.issn.1672-6375.2016.04.029

2015-12-15

蒲秀峰（1974-），女，漢族，甘肅天水人，大學(xué)本科，助理工程師，主要從事中草藥的提取研究、制劑工藝與標(biāo)準(zhǔn)研究等工作。