幽門螺桿菌相關(guān)性萎縮性胃炎和胃腺癌的NF-B活性變化的相關(guān)性分析

孟曼 夏云紅 黃震琪 王為民 高明珠★

論著

幽門螺桿菌相關(guān)性萎縮性胃炎和胃腺癌的NF-B活性變化的相關(guān)性分析

孟曼 夏云紅 黃震琪 王為民 高明珠★

目的 探討核因子-B（NF-B）在幽門螺桿菌（Hp）相關(guān)性萎縮性胃炎和胃腺癌中的活性變化以及相關(guān)性。方法 選取2014年6月至2015年1月幽門螺旋桿菌（Hp）相關(guān)性萎縮性胃炎患者67例，胃腺癌患者（Hp陽性）36例，同時選取淺表性胃炎（Hp陰性）患者42例為對照組，檢測各組胃黏膜組織NF-B表達及活性。結(jié)果 所有患者胃黏膜組織標(biāo)本免疫組化染色結(jié)果顯示，NF-B在胃腺癌組織標(biāo)本中表達最強，其次為Hp相關(guān)性萎縮性胃炎，而淺表性胃炎組織標(biāo)本中NF-B表達最弱；胃腺癌組NF-B活性值為（11087.26±974.20），明顯高于萎縮性胃炎組和淺表性胃炎組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；萎縮性胃炎組NF-B活性值為（8734.65±783.19），明顯高于淺表性胃炎組的（56.13±24.09），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；淺表性胃炎、萎縮性胃炎和胃腺癌NF-B表達強度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中胃腺癌NF-B表達強度明顯高于其他淺表性胃炎和萎縮性胃炎。結(jié)論 幽門螺桿菌相關(guān)性萎縮性胃炎和胃腺癌的NF-B活性明顯增強，NF-B信號通路可能參與幽門螺桿菌相關(guān)性胃黏膜癌變過程。

幽門螺旋桿菌 NF-B 萎縮性胃炎 胃腺癌

慢性萎縮性胃炎是以胃黏膜變薄、上皮萎縮、腺體數(shù)目減少及伴有腸化生或幽門化生等為特征的慢性消化系統(tǒng)疾病。胃腺癌是由胃腺體細胞發(fā)生腫瘤惡變所導(dǎo)致，其發(fā)病率占胃惡性腫瘤的95%［1］。幽門螺桿菌（Hp）已被證實是慢性萎縮性胃炎和胃腺癌的主要病因。核因子-B（NF-B）是一種作用于細胞生長、分化以及凋亡等過程的核蛋白因子。NF-B的活化可受到Hp的影響［2］。本文探討NF-B的活性變化與Hp相關(guān)性萎縮性胃炎及胃腺癌的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1　 臨床資料

1.1 一般資料 選取2014年6月至2015年1月本院治療的幽門螺旋桿菌（Hp）相關(guān)性萎縮性胃炎患者67例，其中男47例，女20例，平均年齡（50.47±8.39）歲。胃腺癌患者（Hp陽性）36例，其中男21例，女14例；平均年齡（63.17±5.89）歲。根據(jù)TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，T1+T3浸潤11例、T3+T4浸潤25例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例；高中分化12例、低分化24例。同時選取胃鏡活檢為淺表性胃炎（Hp陰性）患者42例為對照組，其中男31例，女11例；平均年齡（25.49±4.68）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）患者臨床病理資料保存完好。（2）患者入院前＜1個月未服用過抗生素。（3）未接受過抗Hp治療。（4）患者及家屬知情同意，并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：臨床病理資料不完整；入院前1個月曾服用抗生素或接受抗Hp治療。

1.2 Hp檢測 Hp檢測前＜4周要求受檢者未服用鉍劑、抑酸劑及抗生素。采用14C呼氣實驗半定量分析Hp感染情況，14C呼氣卡購自安徽養(yǎng)和醫(yī)療器械設(shè)備有限公司。同時檢測血清Hp抗體，Hp檢測試劑卡購自深圳惠安生物科技有限公司。兩項檢測均為陽性為Hp陽性。

1.3 免疫組化染色 免疫組化采用S-P法染色。NF-B抗原進行微波修復(fù)，石蠟切片脫蠟至水，PBS漂洗，室溫孵育10min，消除內(nèi)源性過氧化物酶活性。蒸餾水漂洗，PBS浸泡5min，抗原微波修復(fù)冷卻后取出切片，PBS浸泡5min。滴加稀釋后一抗，稀釋度為1∶150。PBS漂洗，37℃溫箱中孵育20min，PBS漂洗后應(yīng)用DAB顯色2min，蒸餾水沖洗，蘇木素復(fù)染、鹽酸酒精分化、碳酸鋰反藍，蒸餾水沖洗，酒精脫水，二甲苯透明，樹脂封片。以已知肺癌（NF-B）陽性片作陽性對照，以PBS代替一抗作陰性對照。

1.4 NF-B活性檢測 采用EMSA法檢測NF-B活性，EMSA試劑盒購自Promega公司。先提取并定量NF-B，并用探針標(biāo)記純化，配制4%非變性聚丙烯酰胺凝膠與NF-B發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，于0.5X TBE電泳液中180V恒壓電泳60min，將膠片剝離，并用電燈烘干，采用同位素成像分析灰度值。

1.5 結(jié)果判斷 NF-B表達于細胞核以及胞漿，呈現(xiàn)黃色或棕黃色著色或顆粒，采用半定量積分法判斷結(jié)果：（1）0分：陽性細胞＜5%，1分：6%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分：＞75%。（2）無著色：0分；淺黃色：1分；黃色：2分；棕黃色：3分。評分得分為（1）×（2），陰性：0分；弱陽性：1～4分；陽性：5～8分；強陽性：9～12分。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件。計量資料以（±s）表示，組間比較用單因素方差分析，兩兩比較用LSD檢驗，等級資料采用Kruskal-Wallis檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　 結(jié)果

2.1 免疫組化染色情況 從各患者胃黏膜標(biāo)本免疫組化染色情況可看出，NF-B在胃腺癌組織標(biāo)本中表達最強，其次為Hp相關(guān)性萎縮性胃炎，而淺表性胃炎標(biāo)本中NF-B表達最弱，見圖1。

圖1 免疫組化染色情況

2.2 各組胃黏膜標(biāo)本組織NF-B活性比較 胃腺癌組NF-B活性值為（11087.26±974.20），明顯高于萎縮性胃炎組和淺表性胃炎組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；萎縮性胃炎組NF-B活性值為（8734.65±783.19），明顯高于淺表性胃炎組的（56.13±24.09），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 各組胃黏膜標(biāo)本組織NF-B活性比較（±s）

表1 各組胃黏膜標(biāo)本組織NF-B活性比較（±s）

注：與淺表性胃炎組比較，*P＜0.05；與萎縮性胃炎組比較，#P＜0.05

組別　n　　活性值　F值　P值萎縮性胃炎組　67　8734.65±783.19*胃腺癌組　36　11087.26±974.20*#淺表性胃炎組　42　356.13±24.09　108.463　0.000

2.3 各組胃黏膜組織NF-B表達強度分析 淺表性胃炎、萎縮性胃炎和胃腺癌NF-B表達強度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），其中胃腺癌NF-B表達強度明顯高于其他淺表性胃炎和萎縮性胃炎，而淺表性胃炎NF-B表達強度最弱。見表2。

表2 各組胃黏膜組織NF-B表達強度分析（n）

3　 討論

Hp屬于革蘭陰性彎曲桿菌，可分為兩型［3］。Ⅰ型菌株可分泌空泡細胞毒素VacA、細胞毒素相關(guān)基因CgaA蛋白等毒素，可導(dǎo)致胃黏膜廣泛炎癥及損傷，具有較強的致病性。Ⅱ型菌株由于不產(chǎn)生CgaA蛋白，致病力較弱［4］。Hp可引起胃黏膜組織癌變，被認(rèn)為是I類致癌因素［5］。

由于Hp分泌的CgaA蛋白可使細胞從Gl/S期轉(zhuǎn)化，使Hp對胃黏膜上皮細胞具有雙向調(diào)節(jié)作用，即一方面促進胃黏膜細胞凋亡，另一方面通過活化轉(zhuǎn)錄因子促進胃黏膜細胞增殖。當(dāng)細胞發(fā)生基因突變且無法修復(fù)時，通過細胞凋亡程序可使突變細胞死亡，從而降低腫瘤發(fā)生的風(fēng)險。由于Hp可導(dǎo)致胃黏膜細胞過度凋亡，異常凋亡又可導(dǎo)致局部細胞代償性過度增殖，過度增殖又增加基因突變的風(fēng)險，從而增加胃黏膜細胞不典型增生及癌變的機會。

NF-B是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白，NF-B活化是炎性反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)［6］。NF-B信號通路在Hp相關(guān)性萎縮性胃炎以及胃腺癌的發(fā)病中起著重要作用［7］。研究顯示，Hp可通過釋放炎性因子以及依賴磷脂酰肌醇-3激酶/Akt途徑（PI3K/Akt）和ERK1/2MAPK等多種途徑激活體內(nèi)NF-B信息傳導(dǎo)通路，促進胃黏膜上皮細胞惡變［8］。NF-B是在腫瘤發(fā)生之前活化的，可認(rèn)為NF-B活化是腫瘤發(fā)生的原因之一，且在腫瘤形成早期即起著關(guān)鍵作用［9］。活化的NF-B一方面可調(diào)節(jié)IL-8、單核細胞趨化蛋白（MCP-1）、腫瘤壞死因子等慢性炎性介質(zhì)的釋放，另一方面可調(diào)節(jié)cyclinD1、bcl-xl、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-9）等多種參與胃腺癌發(fā)生的途徑。而大量的炎性介質(zhì)又可進一步促進NF-B活化，形成正反饋調(diào)節(jié)，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)持續(xù)發(fā)生［10］。而根除Hp則可有效抑制NF-B的活性［11］。本資料結(jié)果顯示，從各患者胃黏膜標(biāo)本免疫組化染色情況可看出，NF-B在胃腺癌組織標(biāo)本中表達最強，其次為Hp相關(guān)性萎縮性胃炎，而淺表性胃炎標(biāo)本中NF-B表達最弱。表明NF-B對胃腺癌以及Hp相關(guān)性萎縮性胃炎的發(fā)生具有重要作用。

有研究顯示，NF-B在正常細胞中活化時間短，活化量及活性值小［12］。但在腫瘤細胞中，NF-B活化可持續(xù)存在。本資料結(jié)果顯示，比較各胃黏膜標(biāo)本組織NF-B活性得出，胃腺癌組NF-B活性值（11087.26±974.20）明顯高于萎縮性胃炎組和淺表性胃炎組，萎縮性胃炎組NF-B活性值（8734.65±783.19）明顯高于淺表性胃炎組（56.13±24.09），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。該結(jié)果發(fā)現(xiàn)胃腺癌NF-B表達強度明顯高于淺表性胃炎和萎縮性胃炎，而淺表性胃炎NF-B表達強度最弱，雖然無法確定NF-B活化是否是Hp致病機制之一，但其可能存在一定的關(guān)聯(lián)性，其需以后臨床進一步觀察已經(jīng)進一個實驗研究。

綜上所述，NF-B信號通路可能參與Hp相關(guān)性胃黏膜癌變過程，根除Hp可能有效預(yù)防Hp相關(guān)性萎縮性胃炎和胃腺癌的發(fā)生發(fā)展，降低癌變的風(fēng)險。

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Objective To investigate the activity changes of nuclear factor-B （NF-B） in Helicobacter pylori associated atrophic gastritis and stomach adenocarcinoma and the correlation analysis. Methods From 2014 June to 2015 January 67 cases of helicobacter pylori （Hp）associated atrophic gastritis in our hospital who underwent treatment ，36 cases of them were with stomach adenocarcinoma（Hp positive），and selected the superfi cial gastritis （Hp negative） in 42 patients as the control，the expression of NF-B and activity were detected in gastric mucosa of each group . Results Immunohistochemical staining in each patients gastric mucosa tissue showed that the strongest expression of NF-B in gastric adenocarcinoma tissue，followed by Hp associated atrophic gastritis，while NF- B expression was weak in tissue of superfi cial gastritis； gastric adenocarcinoma group NF- B activity value was（11087.26±974.20），was signifi cantly higher than that in atrophic gastritis group and superfi cial gastritis group，the difference was statistically signifi cant（P＜0.05）； atrophic gastritis group NF-B activity atrophy was （8734.65±783.19），was signifi cantly higher than that in superfi cial gastritis group（56.13±24.09），the difference was statistically signifi cant （P＜0.05）；Superfi cial gastritis，atrophic gastritis and gastric adenocarcinoma NF-B expression intensity difference were statistically signifi cant（P＜0.05）. gastric adenocarcinoma NF-B expression intensity was signifi cantly higher than that in superfi cial gastritis and atrophic gastritis. Conclusions Helicobacter pylori associated atrophic gastritis and gastric adenocarcinoma increase the activity of NF-B，NF-B signaling pathway may be involved in Helicobacter pylori associated gastric mucosal carcinogenesis process.

Helicobacter pylori NF-B Atrophic gastritis Stomach adenocarcinoma

國家自然科學(xué)基金資助項目（81472331）

23000 安徽醫(yī)科大學(xué)附屬合肥醫(yī)院腫瘤內(nèi)科（孟曼夏云紅 王為民）230000安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血液科 （黃震琪）230000 安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院腫瘤科 （高明珠）
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