防御素基因在烏金豬與約大烏豬組織中的表達及東亞飛蝗抗菌活性物質對防御素基因表達的調節作用

李美荃　劉　紅　張春勇　安清聰　駱　雪　陳克嶙　郭榮富

(云南農業大學，云南省動物營養與飼料重點實驗室，昆明650201)

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*同等貢獻作者

防御素基因在烏金豬與約大烏豬組織中的表達及東亞飛蝗抗菌活性物質對防御素基因表達的調節作用

李美荃劉紅*張春勇安清聰駱雪陳克嶙郭榮富**

(云南農業大學，云南省動物營養與飼料重點實驗室，昆明650201)

摘要：本試驗旨在檢測β防御素-1(pBD-1)、β防御素-2(pBD-2)和β防御素-3(pBD-3)基因在烏金豬和具有烏金豬血緣的約大烏豬不同組織中的表達，并探討東亞飛蝗抗菌活性物質(LAAS)對豬胎兒皮膚成纖維細胞(PFSF)免疫應激參數和防御素(pBDs)基因表達的調節作用。采用實時熒光定量PCR方法檢測2月齡烏金豬與約大烏豬心臟、肝臟、肺臟、腎臟、空腸、回腸、十二指腸、皮膚、肌肉、胰腺、睪丸或卵巢這12種組織中pBD-1、pBD-2和pBD-3基因的表達差異；采用培養至第4～5代的PFSF，通過脂多糖(LPS)誘導建立免疫應激模型，在DMEM/F12培養液中添加不同濃度(0、75、150、300、600和1 200 μg/mL)的LAAS，考察LAAS對PFSF免疫應激參數和pBD-1、pBD-2、pBD-3基因表達的影響。結果表明：1)烏金豬血清溶菌酶(LSZ)活性、免疫球蛋白G(IgG)含量顯著高于約大烏豬(P<0.05)，血清一氧化氮(NO)含量極顯著低于約大烏豬(P<0.01)。2)約大烏豬大多數組織中pBD-1、pBD-2和pBD-3基因的表達量高于烏金豬；2個品種豬的pBD-1和pBD-3基因均在皮膚和卵巢中表達量較高，pBD-2基因在肝臟和腎臟中表達量較高。3)300 μg/mL LAAS極顯著降低了培養液中乳酸脫氫酶(LDH)活性(P<0.01)；LAAS極顯著增加了培養液中NO含量(除75 μg/mL組正常細胞外)(P<0.01)，正常細胞和應激細胞均在LAAS濃度為600 μg/mL時達到最高；LAAS濃度為0、75和150 μg/mL時應激細胞一氧化氮合酶(NOS)活性顯著或極顯著高于正常細胞(P<0.05或P<0.01)；添加1 200 μg/mL LAAS可極顯著降低培養液中的LSZ活性(P<0.01)，LAAS濃度為150、300、600和1 200 μg/mL時應激細胞與正常細胞中LSZ活性差異顯著或極顯著(P<0.05或P<0.01)。4)應激細胞pBD-1、pBD-2和pBD-3基因的表達量均高于正常細胞；當LAAS濃度為150 μg/mL時，pBD-1、pBD-2和pBD-3基因的表達量最高。結果提示，烏金豬和約大烏豬防御素基因的表達存在明顯的品種差異性和組織特異性，適宜濃度的LAAS能夠降低PFSF中LDH活性，提高NO含量及NOS、LSZ活性，上調應激細胞與正常細胞防御素的表達量。

關鍵詞：烏金豬；約大烏豬；β-防御素；免疫應激；東亞飛蝗抗菌活性物質

目前豬的疾病越來越趨向于復雜化，尋找新型、安全、高效的抗生素替代品已成為豬營養研究和生豬健康養殖的重要研究課題。動物健康是保障其生存、種屬繁衍和發揮遺傳生產潛力的重要生物學基礎。營養與免疫是動物健康的重要研究課題。抗病基因與動物健康密切相關，營養可通過改善免疫力和影響抗病基因進而提高機體抗病力，從而增強動物健康和改善其生產性能。……