小白菜根腫病接種鑒定研究

索歡++陳龍正++徐海

摘要：為了解十字花科根腫病對小白菜生長的影響，為小白菜根腫病研究提供參考，采用注射法、菌土法和蘸根法進行小白菜根腫菌接種，并使用最佳接種方法在小白菜不同生長期對其接種，進行了小白菜根腫病發病調查時期比較以及小白菜不同濃度根腫菌接種比較等試驗。結果表明：注射法以69.44%的發病率、高達60.71%的病情指數以及操作簡便的特點，更適合大量材料的接種鑒定；小白菜的整個生長期都能感病，且受侵染越早，發病率和病情指數越高；小白菜接種根腫菌30 d時根部能夠觀察到明顯的根腫，且接種時間越久，病情指數越高；根腫菌接種濃度在1×106個/g（干土）時能夠引起小白菜76.67%的發病率，病情指數為55.71%。

關鍵詞：小白菜；根腫病；根腫菌；接種鑒定

中圖分類號： S436.34文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2016）05-0193-03

十字花科作物根腫病作為一種土傳病害[1]，近年來發生危害呈現加重的趨勢。土壤一旦被根腫菌污染很難進行徹底的土壤滅菌，不再適宜十字花科蔬菜生長，影響蔬菜種植基地蔬菜產業的可持續發展。國內根腫病的研究主要集中在大白菜、花菜、甘藍和油菜等作物，對小白菜根腫病的研究目前還不多，小白菜作為十字花科蔬菜最常見的蔬菜品種之一，栽培面積逐漸增加，根腫病已成為小白菜栽培重要危害之一[2]，同時根腫菌對其育種也帶來嚴重的危害[3]。本研究進行了3種接種方法的比較、小白菜不同生長期的接種比較以及小白菜不同發病調查時期比較和不同濃度根腫菌接種小白菜比較等試驗，擬選擇出最佳的小白菜根腫菌接種方法和接種濃度，以及了解根腫病對小白菜生長的影響。

1材料與方法

1.1供試材料

供試作物小白菜，為江蘇省農業科學院蔬菜研究所提供的“上海青”。供試菌株采自云南省農業科學院園藝作物研究所試驗基地的大白菜根腫病發病株腫根，洗凈，-20 ℃冷凍保存。育苗基質為江蘇省農業科學院配制的育苗土，滅菌處理后備用。

1.2接種液的制備

將大白菜根腫病腫根攪碎，加水沒過腫根組織，密封放置24 h促使游動孢子從孢子囊里充分釋放，8層紗布過濾，血紅計數板計數并調整接種液濃度為1×108個/mL，4 ℃保存備用。

1.3小白菜根腫病病情分級

小白菜根腫病病情分級參照前人的方法[4]略有修改。如圖1所示，0級：根部無腫瘤，植株生長正常；1級：側根有腫瘤，主根腫瘤不明顯或者沒有，植株生長正常；3級：主根腫大，其直徑小于2倍莖基部，植株地上部可見生長輕度受阻；5級：主根腫大，其直徑是莖基部2～3倍，側根脫落，植株地上部輕度受阻；7級：主根腫大，其直徑是莖基部3～4倍，側根脫落，植株地上部明顯矮小、萎黃。調查結果按照下面公式計算發病率和病情指數。

發病率=（發病株數/總株數）×100%；

病情指數=∑（發病級代表值×各級病株數）×100/（調查總株數×最高級發病代表值）。

1.4試驗方法

1.4.1不同方法接種比較

1.4.1.1注射法播種時將接種液注射到種子上。具體是采用塑料盒（規格：長32 cm，寬20 cm，高12 cm）裝2 kg無菌基質，澆透水，用直徑1 cm的圓柱體鐵棒按壓出1 cm深的孔，12孔/盒，每孔播2粒種子，用移液器給每孔注射接種液 2 mL，無菌基質覆蓋，子葉展平時間苗，每孔留1株苗，3次重復。苗齡45 d時拔苗調查發病情況。

1.4.1.2菌土法將接種液和無菌基質拌勻制備帶菌基質，種子播到帶菌基質中。具體是采用塑料盒（規格：長32 cm，寬20 cm，高12 cm）裝2 kg無菌基質，澆透水，用移液器注射24 mL接種液并攪拌均勻，用直徑1 cm的圓柱體鐵棒按壓出1 cm深的孔，12孔/盒，每孔播2粒種子，無菌基質覆蓋，后期適當間苗，每孔留1株苗，3次重復。苗齡45 d時拔苗調查發病情況。

1.4.1.3蘸根法將無菌2葉1心苗用流水洗凈根部，紙巾吸干根部水分，根部靜置在接種液中4 h，隨后移栽到無菌基質（處理同上）中，3次重復。苗齡45 d時拔苗調查發病情況。

1.4.2不同生長期接種比較小白菜不同生長期接種根腫菌，成熟期拔苗觀察發病情況，記錄株高、株質量、發病率和病情指數，研究小白菜不同生長期感染根腫菌對其影響。分3個接種時期，播種時接種為第1個接種時期，2葉1心到3葉1心為第2個接種時期，4葉1心后接種為第3個接種時期，統一在苗齡45 d時拔苗調查。本試驗的苗種在規格32 cm×20 cm×12 cm（長×寬×高）的塑料盒中，塑料盒裝2 kg無菌基質，澆透水，用直徑1 cm的圓柱體鐵棒按壓出1 cm深的孔，12孔/盒，每孔播2粒種子，無菌土覆蓋，后期根據生長情況適當間苗，每孔留1株苗。播種時接種，在播種的種子上用移液器注射2 mL的接種液；第2個接種時期和第3個接種時期，分別在苗子根部旁用圓柱體鐵棒按壓出1 cm深的孔，用移液器注射2 mL的接種液，無菌土覆蓋。

1.4.3不同發病時期調查比較采用最佳接種方法接種。分時間段調查小白菜根腫病發病情況。具體是采用注射法接種小白菜，從接種20 d開始拔苗10株調查發病情況，間隔 5 d 調查1次，直到接種45 d時結束，記錄每次的發病率和病情指數，3次重復。

1.4.4不同濃度接種比較設置5種不同的注射濃度梯度：1×103 、1×104、1×105、1×106、1×107個/g（干土）。每個處理10株苗，3次重復，苗齡45 d時調查根部發病情況。

2結果與分析

2.1小白菜不同接種方法比較

從表1可以看出，不同接種方法對小白菜生長勢存在明顯差異，注射法和菌土法接種30 d后都明顯觀察到植株地上部分萎蔫現象。蘸根法的發病率最高，病情指數最低，菌土法居中，注射法病情指數最高。注射法操作最簡單，更適合大量材料接種鑒定。

2.2小白菜不同生長期接種比較

小白菜整個生長期都能感病，受侵染越早發病越重，根部發病情況如圖2所示。表2數據表明，第1接種時期的發病率最高，病情指數也最高，根部發病以主根發病為主，如圖 2-A所示；第2接種時期發病率和病情指數居中，根部發病如圖2-B所示；第3接種時期的發病率和病情指數都最低，可能因為侵染時間晚且侵染時間短，根部發病以圖2-C為主。比較這3個接種時期，3葉1心期前接種都能夠侵染小白菜，且發病率和病情指數都嚴重，這也表明無菌土育苗移栽可以預防和降低根腫病的危害。

2.3小白菜不同發病時期調查比較

從表3數據分析，接種30 d時能夠觀察到明顯的根腫，接種時間越久病情指數越高，發病率變化不明顯，接種30 d可以作為最早的接種鑒定時期。植株發病情況如圖3所示。

2.4小白菜不同濃度接種比較

由表4可見，1×103、1×104個/g（干土）的濃度接種未引起小白菜發病，植株生長與對照相比未見明顯差異。1×107個/g（干土）高濃度接種，能夠導致100%發病，但也能引起46.67%的死苗率，影響試驗數據。1×105個/g（干土）可以誘導植株發病，發病嚴重程度較低，1×106個/g（干土）濃度接種能夠引起76.67%的發病率，病情指數較高。1×105～1×107個/g（干土）之間有很多的濃度梯度，要想選擇濃度最低且能夠達到更高發病率的濃度，可能還需要做進一步的試驗來篩選。

3小結與討論

本試驗比較3種接種方法研究小白菜根腫病的接種效果，結果表明注射法、菌土法和蘸根法都能夠引起小白菜發病，其中注射法病情指數最高，操作簡單，適合大量材料接種鑒定。在小白菜不同生長期接種根腫菌的試驗中，接種結果表明，接種時間越早，發病越明顯，發病率越高，病情指數也越高，根部發病以主根發病和主側根都發病為主，接種時間越

表4不同濃度接種發病結果統計

處理接種時間（d）發病率（%）病情指數1×103個/g（干土）45001×104個/g（干土）45001×105個/g（干土）4533.33b10.48b1×106個/g（干土）4576.67a55.71a

晚，如4葉1心之后，以側根發病為主，發病率和病情指數都較低。小白菜從播種開始接種30 d時，可見明顯的植株根腫，與接種35、40、45 d的相比，病情指數較低，而發病率變化不明顯。在不同濃度接種比較試驗中，1×104個/g（干土）及以下的濃度接種未引起小白菜發病，1×105～1×107個/g（干土）之間的濃度接種，濃度越高發病率和病情指數越高，1×107個/g（干土）的濃度接種能達到100%發病，但引起4667%的死苗率，影響數據分析，1×105～1×107個/g（干土）之間還有許多濃度梯度，可能還需要做進一步的試驗來篩選最低且能夠達到更高發病率的濃度。

參考文獻：

[1]CAB Intemational. Plasmodiophora brassicae（distribution map）：distribution maps of plant diseases[M]. Wallingford，UK：CAB International，1977.

[2]Ludwig-Muller J，Bennett R N，Kiddle G，et al. The host range of Plasmodiophora brassicae and its relationship to endogenous glucosinolate content[J]. New Phytologist，1999，141（3）：443-458.

[3]黃蓉，黃瑞榮，華菊玲，等. 小白菜根腫病的接種方法及條件研究[J]. 中國農學通報，2012，28（31）：252-255.

[4]王靖，黃云，李小蘭，等. 十字花科根腫病研究進展[J]. 植物保護，2011，37（6）：153-158.