高效液相色譜法測定鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍的含量和釋放度

宋新康，曾玉梅

(梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗所化學(xué)室，廣東 梅州　514071)

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高效液相色譜法測定鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍的含量和釋放度

宋新康*，曾玉梅

(梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗所化學(xué)室，廣東 梅州514071)

摘要目的：建立測定鹽酸二甲雙胍緩釋片中鹽酸二甲雙胍含量和釋放度的方法。方法：采用C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：0.05%庚烷磺酸鈉溶液(用10%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.0)-乙腈(V ∶V=84 ∶16)，流速：0.8 ml/min；檢測波長：233 nm；柱溫：35 ℃。結(jié)果：鹽酸二甲雙胍在2.45～98.00 μg/ml(r=1，n=6)呈良好的線性關(guān)系，回收率99.2%，RSD為0.84%。結(jié)論：該方法適用于鹽酸二甲雙胍緩釋片的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞HPLC； 鹽酸二甲雙胍緩釋片； 含量； 釋放度

鹽酸二甲雙胍緩釋片是降糖藥物,通過抑制肝糖原的輸出，增加胰島素敏感性從而達(dá)到降糖目的。臨床上常用于單純飲食控制不滿意的Ⅱ型糖尿病患者，尤其是肥胖和伴高胰島素血癥者，用該藥不但有降血糖作用，還可能有減輕體質(zhì)量和高胰島素血癥的效果[1]。鹽酸二甲雙胍有片劑、膠囊劑、腸溶膠囊和緩釋片等多個劑型，其他品種除腸溶膠囊劑外在《中國藥典》[2]均用紫外分光光度法測定其含量及溶出度或釋放度，唯緩釋制劑收載于《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)》[3]，且自2004年以來有43個批件號和散頁標(biāo)準(zhǔn)[4],均使用紫外-可見分光光度法測定。為了更準(zhǔn)確靈敏的考察該產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，便以臨床用藥的選擇需要，本研究參考多方文獻(xiàn)[5-11]采用高效液相色譜法對釋放度、含量進(jìn)行測定，取得了較好效果。

1材料

1.1儀器

LC-20A高效液相色譜儀，SPD-20A檢測器，LC-20AT泵，Labsolution色譜工作站(日本島津公司)；AUW220D島津電子分析天平(日本島津公司)；MODEL HN1006超聲波清潔器(昆山市超聲儀器有限公司)；RC806-1型溶出試驗儀(天津天大天發(fā)儀器公司)；紫外-可見分光光度計1601(日本島津公司)。

1.2藥品與試劑

鹽酸二甲雙胍緩釋片(A：山西寶芝林藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號為國藥準(zhǔn)字H20060815，批號為131225；B：成都恒瑞制藥有限公司，批準(zhǔn)文號為國藥準(zhǔn)字H20030952，批號為815078；C：山西華元醫(yī)藥生物技術(shù)公司，批準(zhǔn)文號為國藥準(zhǔn)字H20060815，批號為150301)；鹽酸二甲雙胍對照品(批號為100664-201203，含量為100%，由中國食品藥品監(jiān)督研究院提供)；乙腈(河北四友卓越科技有限公司，色譜純)；水為超純水；其他試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適用性

色譜柱：ECOSIL C18色譜柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：0.05%庚烷磺酸鈉溶液(用10%磷酸溶液調(diào)節(jié)pH至4.0)-乙腈(V∶V=84 ∶16)；流速：0.8 ml/min；檢測波長：233 nm；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μl。理論板數(shù)按鹽酸二甲雙胍峰計不小于2 000。色譜圖見圖1。

A.對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性對照溶液A.reference substance solution; B.test sample solution; C.negative control solution圖1　鹽酸二甲雙胍緩釋片HPLC色譜圖Fig 1　HPLC chromatogram of Metformin hydrochloride sustained-release tablets

2.2溶液的制備

2.2.1對照品溶液的制備：精密稱定鹽酸二甲雙胍對照品10 mg，置于100 ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，制成對照品儲備溶液；精密量取對照品儲備溶液5 ml置于25 ml容量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2樣品溶液的制備：取鹽酸二甲雙胍緩釋片(A)20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取鹽酸二甲雙胍50 mg，分別置于200 ml容量瓶中，加緩沖液(0.1 mol/L鹽酸溶液750 ml，加0.2 mol/L磷酸鈉溶液250 ml，混勻，必要時用2 mol/L鹽酸溶液或2 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.8)100 ml，振搖10 min使鹽酸二甲雙胍溶解，用上述緩沖液稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液20 ml，精密量取2 ml，至25 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3陰性溶液的制備：制備不含鹽酸二甲雙胍的陰性對照溶液。

2.3線性關(guān)系

精密量取“2.2.1”項下的對照品儲備溶液5 ml，分別置于200、100、50、25、10、5 ml容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，得到系列濃度的對照品溶液，精密量取上述溶液各20 μl注入色譜儀，記錄色譜圖，以濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積A為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸，得線性方程為：Y=114 228X+18 251；r=1(n=6)。表明鹽酸二甲雙胍在2.45～98.00 μg/ml的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4精密度試驗

精密量取“2.2.1”項下的對照品溶液20 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定峰面積，計算峰面積相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.30%。結(jié)果表明精密度良好，所選定的色譜條件系統(tǒng)穩(wěn)定。

2.5重復(fù)性試驗

取批號為131225同一供試品6份，按“2.2.2”項下的供試品溶液制備方法制備，在相同色譜條件下測定。結(jié)果樣品中鹽酸二甲雙胍平均含量為98.22%，RSD為0.11%。表明用本法測定含量，重復(fù)性較好。

2.6穩(wěn)定性試驗

取“2.2.2”項下同一供試品溶液，分別于配制后0、2、4、8、12 h進(jìn)樣20 μl，測定其峰面積，結(jié)果鹽酸二甲雙胍測得的峰面積的RSD為0.92%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7加樣回收試驗

取9份已知含量的鹽酸二甲雙胍緩釋片(A：山西寶芝林藥業(yè)有限公司，批號為131225)的供試品0.05 g，精密稱定，按低、中、高3個水平分別加入一定量的鹽酸二甲雙胍對照品，按供試品溶液的制備方法制備加樣供試品溶液，測定，計算加樣回收率，見表1。平均回收率為99.82%，RSD為0.84%。表明此方法測定含量，準(zhǔn)確度高。

表1　加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

2.8檢測限與定量限

取“2.4線性關(guān)系考察”項下的已知低濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，精密量取10 μl注入高效液相色譜儀，測出各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)較低濃度下的信噪比S/N，計算出當(dāng)S/N為3時的各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度，以信噪比(S/N=3)時測得鹽酸二甲雙胍的儀器檢出限分別為0.1 ng，以信噪比(S/N=10)時測得儀器定量限分別為0.3 ng。

2.9供試品測定

取不同批號鹽酸二甲雙胍緩釋片各20片，按“2.2.2”項下方法進(jìn)行操作，精密量取20 μl，并按上述色譜條件測定并計算樣品中鹽酸二甲雙胍含量。其他條件保持不變，采用紫外分光光度法測定樣品中鹽酸二甲雙胍含量，與高效液相色譜法進(jìn)行對比，見表2。

表2　樣品含量測定結(jié)果(μg/ml)

2.10釋放度測定

取按原標(biāo)準(zhǔn)[3]中的釋放度測定法第一法溶出度第一法測定，以磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)1 000 ml為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作。分別以1、3、10 h取樣，并用溶出介質(zhì)稀釋成5 μg/ml 的溶液按“2.1”項下方法測定含量。其他條件保持不變，采用紫外分光光度法測定含量，與高效液相色譜法進(jìn)行對比，結(jié)果表明2種方法測定結(jié)果相近，見表3。

表3　釋放度測定結(jié)果(%)

3討論

本研究所用的色譜條件為《中華人民共和國藥典：二部》(2015年版)[2]中鹽酸二甲雙胍腸溶膠囊含量和有關(guān)物質(zhì)測定的色譜條件，該方法分離度好，靈敏度高，故未對其的方法耐用性進(jìn)行考察。

目前，國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中收載了鹽酸二甲雙胍緩釋片，其他劑型在《中華人民共和國藥典》收載，但含量和釋放度的測定方法不統(tǒng)一。本研究為了統(tǒng)一含量和釋放度的測定方法，提高檢驗的效率和準(zhǔn)確度，把原有的紫外分光光度法統(tǒng)一為高效液相色譜法，同時對2種方法進(jìn)行了對比，測定結(jié)果相近，可以推廣。

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Content Determination and Release Rate in Metformin Hydrochloride Sustained-release Tablets by HPLC

SONG Xinkang, ZENG Yumei

(Dept.of Chemical, the Food and Drug Control Institute of Meizhou, Guangdong Meizhou 514071, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a method of content determination and release rate in Metformin hydrochloride sustained-release tablets by HPLC. METHODS: C18chromatographic column (150 mm×4.6 mm，5 μm) was adopted, the mobile phase was 0.05% heptane sodium sulfonate solution (with 10% phosphoric acid solution to adjust pH value to 4.0) -acetonitrile(V ∶V=84 ∶16), with flow rate of 0.8 ml/min. The detection wavelength was 233 nm and the column temperature was 35 ℃. RESULTS: Metformin hydrochloride had good linear relationship in 2.45-98.00 μg/ml (r=1, n=6), The recovery rate was 99.2% and RSD was 0.84%. CONCLUSIONS: The method is suitable for Metformin hydrochloride sustained-release tablets quality control.

KEYWORDSHPLC; Metformin hydrochloride sustained-release tablets; Content; Release rate

中圖分類號R927.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼A

文章編號1672-2124(2016)06-0801-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.06.030

(收稿日期：2016-01-29)

*副主任藥師。研究方向：藥品標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用和研究。E-mail:may011499@163.com

*工程師。研究方向：制劑技術(shù)。E-mail：908552769@qq.com