液相色譜-質(zhì)譜法快速測定小兒清解顆粒中非法添加的氨基比林

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液相色譜-質(zhì)譜法快速測定小兒清解顆粒中非法添加的氨基比林

隋譯*

(雞西市食品藥品檢驗檢測中心食?；?，黑龍江 雞西158100)

摘要目的：建立快速準確鑒定小兒清解顆粒中非法添加氨基比林的方法。方法：用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術對4種不同廠家小兒清解顆粒中非法添加消腫止痛類化學藥品氨基比林進行篩查，與氨基比林對照品的一、二級質(zhì)譜圖進行比較。結果:在樣品質(zhì)譜圖中有3家樣品的圖譜與對照品有不一致的一級質(zhì)譜峰與二級質(zhì)譜峰，1個廠家的樣品圖譜有與對照品有一致的一級質(zhì)譜峰與二級質(zhì)譜峰。結論：應用液相色譜-質(zhì)譜法可快速準確鑒定出中藥制劑中是否含有非法添加的氨基比林，并可以準確計算添加氨基比林的含量。

關鍵詞液相色譜-質(zhì)譜法； 小兒清解顆粒； 氨基比林

小兒清解顆粒為棕褐色的顆粒，氣微香，味甜、微苦。主要成分為：金銀花、連翹、地骨皮、青黛(包煎)、白薇、地黃、廣藿香、石膏，具有除瘟解毒、清熱退燒的功效。臨床多用于小兒外感風熱火時疫感冒引起的高燒不退，汗出熱不解，煩躁口渴、咽喉腫痛，肢酸體倦，尤其對兒童高熱不退效果比較顯著。目前，小兒清解顆粒的檢驗標準執(zhí)行的是《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑》的檢驗標準。目前，較多家長對小兒中藥制劑比較信任，一些非法分子為了牟取暴利，在兒童用藥中非法添加化學藥物。而非法添加的藥物將會給兒童身體健康造成較大影響。液相色譜-質(zhì)譜法(liquid chromatography-mass spectrometry，LC-MS/MS)兼具液相的高分辨率，質(zhì)譜的高靈敏性及專屬性，且樣品用量少，分析速度快，應用范圍廣，是目前鑒別中成藥及保健品非法添加化學藥物最有效的分析方法[2-6]。本研究將對小兒清解顆粒中是否含有氨基比林進行篩查，按照《藥品檢驗補充檢驗方法和檢驗項目批準件》并參考了一些文獻[7-12]，采用LC-MS/MS技術鑒定小兒清解顆粒中非法添加的氨基比林，現(xiàn)報告如下。

1材料

Agilent 6430型三重串聯(lián)四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀(美國安捷倫公司)；甲醇[賽默飛世爾科技(中國)有限公司,批號：154027]，乙酸銨(HNO3優(yōu)級純)、乙酸(H2O2優(yōu)級純)；實驗用水為超純水(屈臣氏蒸餾水)。對照品：氨基比林(中國藥品生物制品檢定所，批號：100503-200301，含量：100%)；分別取4個廠家的的藥品：(1)小兒清解顆粒(北京北衛(wèi)藥業(yè)有限責任公司，批準文號：國藥準字Z11020994，批號：150117)；(2)小兒清解顆粒(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批準文號：國藥準字Z11020222，批號：140107)；(3)小兒清解顆粒(天津中新藥業(yè)集團股份有限公司隆順榕制藥廠，批準文號：國藥準字Z12020656，批號：141009)；(4)小兒清解顆粒(貴州福特加制藥有限公司，批準文號：國藥準字Z20054660，批號：141211)。所用玻璃器皿均以10%硝酸浸泡24 h以上，用水反復沖洗，最后用超純水沖洗干凈，陰干備用。

供試品溶液的制備：取該樣品用研缽研磨樣品后，準確稱樣品適量(約相當于300 mg)置于50 ml容量瓶中，用液相色譜流動相溶液40 ml稀釋后，超聲提取10 min，放冷至室溫(25 ℃)用液相色譜流動相溶液稀釋至刻度，搖勻，待測。

2.2對照品的處理

對照品溶液的制備:精密稱取氨基比林對照品50 mg，置于50 ml容量瓶中，加入流動相35 ml，超聲10 min使溶解放冷至室溫用液相色譜流動相溶液稀釋至刻度，混合均勻，制成儲備液(1 mg/ml)，再用流動相使稀釋成200 ng/ml的對照品溶液搖勻，待測。

2.3儀器工作條件

2.3.1色譜條件：以十八烷基硅烷健合硅膠為填充劑(柱頭加裝相同規(guī)格填料的預色譜柱)；檢測波長為280 nm；以含0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸的水溶液∶甲醇溶液(V∶V=20 ∶80)為流動相。

2.3.2質(zhì)譜的條件:電噴霧離子化源，源電壓5 KV，毛細管溫度275 ℃，鞘氣流速40 arb，正離子檢測方式，掃描方式為全掃描一級質(zhì)譜、全掃描二級質(zhì)譜，掃描范圍100～1 000 amu。

2.4測定法

分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10 μl注入液質(zhì)聯(lián)用儀，記錄液相色譜圖、一級質(zhì)譜圖和二級質(zhì)譜圖。采用比較供試品與對照品的色譜圖、一級質(zhì)譜圖和二級質(zhì)譜圖的方法進行定性分析，確定供試品中添加的化學成分。如果供試品圖譜成陽性結果再與對照品圖譜比較后進行定量分析，見圖1。

圖1　氨基比林一級質(zhì)譜圖和二級質(zhì)譜圖Fig 1　Primary and secondary mass spectrum of amidopyrine

2.5線性關系考察

精密稱取氨基比林對照品溶液(每1 ml含1 μg 的溶液)0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 ml分別置于10 ml容量瓶中以流動相稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度分別為50、100、200、400、800 ng/ml各10 μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以樣量濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，計算回歸方程為Y=1.5E+6X+21 409，r=0.998 5，結果進樣量在0.05～8.00 μg/ml時，峰面積積分值呈良好的線性關系。

2.6靈敏度考察

取對照品溶液“2.2”適量，加流動相逐步稀釋，按“2.3.1”“2.3.2”項下條件測定，上述藥物的待測量在20 ng之間時，選擇離子監(jiān)測質(zhì)譜峰信噪比(S/N)在3左右。

2.7精密度考察

在所選定測試條件下，以濃度為200 ng/ml的氨基比林對照品溶液為考察對象，重復進樣6次進行精密度實驗，測得RSD=0.9%，表明該分析方法精密度良好。

2.8加樣回收率考察

準確稱取樣品小兒清解顆粒(批號為：140107)0.3 g(3份)，按“2.1”項處理后，按“2.3.1”項條件檢測后，然后在樣品中按照低、中、高濃度分別加入標準樣品0.05、0.20、0.80 μg，做回收率試驗。結果表明，樣品小兒清解顆粒加標回收率分別為89.05%、90.10%、89.89%，RSD為0.4%。

2.9測定結果

小兒清解顆粒中非法添加的氨基比林化學成分的測定:分取研磨好的小兒清解顆粒批號為：140107、141009、140107、141211共4份(n=4，按“2.1”“2.2”“2.3.1”“2.3.2”的項下方法，測定編號為樣1，樣2，樣3，樣4的樣品中，結果比較供試品與對照品的色譜圖、一級質(zhì)譜圖和二級質(zhì)譜圖的方法進行定性分析，確定前3個供試品中未添加化學成分氨基比林。后1個樣品中含有氨基比林的含量成陽性，樣品規(guī)格為：1袋10 g，經(jīng)定量分析后測得氨基比林含量為1.38 μg/g，不符合規(guī)定。

3討論

隨著科學技術的進步與發(fā)展，不斷更新的檢測技術將使假劣藥物無藏身之地。多年的檢驗經(jīng)驗證明，正確應用儀器及方法對檢驗摻偽藥物非常重要[13-17]，檢驗人員應熟練掌握檢驗儀器的操作。

該質(zhì)譜檢驗為有對照品的儀器檢驗，在保留時間一致的情況下，且在該陽性樣品圖譜并無雜質(zhì)干擾，則無需查看出峰所對應的棒狀圖。如果該陽性樣品圖譜出峰多，且雜質(zhì)分離不開，打出棒形圖譜能更好的分辨出氨基比林峰。

本研究對原標準[18]使用的流動相進行了相應的調(diào)整。原標準流動相為0.02 mol/L乙酸銨-0.1%乙酸的水溶液∶乙腈(V∶V=30 ∶70)，將乙腈調(diào)整為甲醇。雖然乙腈的洗脫能力強于甲醇，且黏度小、傳質(zhì)快，但是乙腈的價格相對昂貴，毒性也較強。相關資料報道，用甲醇做流動相，紫外波長須設在>230 nm，乙腈則>210 nm。在本試驗中，波長為280 nm，不超限，而且用甲醇替代乙腈后，經(jīng)過更改流動相的比例，峰型效果很好，未影響檢驗結果的準確性。故采用該檢驗方法能更好的應用LC-MS/MS技術鑒定出小兒清解顆粒中非法添加的氨基比林。

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Liquid Chromatogram and Mass-spectrography for Rapid Determination of Illegally Added Amidopyrine in Pediatric Qingjie Particles

SUI Yi

(Food, Supplements and Cosmetics Room, Jixi Food and Drug Testing Center, Heilongjiang Jixi 158100, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a rapid accurate identification method of illegally added amidopyrine in pediatric Qingjie particles. METHODS: Illegally added acetanilide detumescence chemical drug amidopyrine from four different companies were screened by liquid chromatogram(LC) and mass-spectrography(MS), and reference substance of secondary mass spectra were compared. RESULTS: In the sample mass spectrum, there were three samples were not consistent with the reference substance of primary and secondary mass spectrum peak, and a manufacturer of sample pattern was consistent with the reference substance of primary and secondary mass spectrum peak. CONCLUSIONS: Application of LC and MS method can accurately identify whether Chinese medicine preparations contains illegal added amidopyrine, and the content of aminopyrine can be calculated accurately.

KEYWORDSLC and MS; Pediatric Qingjie particles; Amidopyrine

2方法與結果

2.1樣品處理

中圖分類號R985

文獻標志碼A

文章編號1672-2124(2016)06-0798-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.06.029

(收稿日期：2016-01-12)