蜂眠寧膠囊對老年小鼠神經遞質的影響Δ

周從輝，熊義濤，易愛玲

(1.湖北省中醫院藥事部，湖北 武漢　430074； 2.武漢市黃陂區人民醫院藥劑科，湖北 武漢　430300)

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蜂眠寧膠囊對老年小鼠神經遞質的影響Δ

周從輝1*，熊義濤1，易愛玲2#

(1.湖北省中醫院藥事部，湖北 武漢430074； 2.武漢市黃陂區人民醫院藥劑科，湖北 武漢430300)

摘要目的：探討蜂眠寧膠囊對老年小鼠神經遞質的影響。方法：選擇10只青年小鼠設為青年小鼠對照組，50只老年小鼠按隨機數字表法分為老年小鼠對照組、六味地黃濃縮丸組、蜂眠寧膠囊組(高)、蜂眠寧膠囊組(中)、蜂眠寧膠囊組(低)，每組各10只。采用灌胃給藥，1日1次，連續10 d。末次給藥后1 h，各組小鼠立即頸椎脫臼處死，測定乙酰膽堿(Ach)、膽堿酯酶(CHE)、多巴胺(DA)、去甲腎上腺素(NE)、5-羥色胺(5-HT)的活性。結果：與老年小鼠對照組比較，六味地黃濃縮丸組、蜂眠寧膠囊組(高)、蜂眠寧膠囊組(中)的ACH、DA、NE的活性明顯升高，CHE的活性明顯降低，差異有統計學意義(P<0.05)；蜂眠寧膠囊組(高)的作用優于六味地黃濃縮丸組，差異有統計學意義(P<0.05)。結論：蜂眠寧膠囊能通過調節Ach、CHE、NE、DA、5-HT等神經遞質來影響中樞神經系統功能，起到促進學習、改善記憶能力、抗老年癡呆的作用。

關鍵詞蜂眠寧膠囊； 神經遞質； 老年癡呆

蜂眠寧膠囊是由蜂胎凍干粉、黃芪、纈草、酸棗仁制備而成。其中蜂胎凍干粉的含量達70%，由蜜蜂幼蟲通過均漿經冷凍干燥制備而成，向明等[1]研究結果顯示，其可使老齡大鼠記憶功能保持明顯增強，大腦邊緣系統海馬內膽堿能神經纖維積分光密度明顯增加。國家食品藥品監督管理總局批準其保健功能為延緩衰老、改善睡眠。六味地黃丸是傳統中醫滋陰補腎的經典方，研究結果表明，其有明顯的延緩衰老作用。本研究旨在觀察蜂眠寧膠囊對老年齡小鼠神經遞質的影響[2-4]，為其改善老年癡呆患者的記憶提供理論依據。

1材料

1.1儀器

ALCYON300 型全自動生化分析儀(美國雅培)；BS110S 型sartorius 電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)。

1.2藥品與試劑

六味地黃濃縮丸(北京同仁堂,批準文號：國藥準字Z19993068，批號120712)；蜂眠寧膠囊(武漢惠爾生物科技有限公司，批號：20120501)。乙酰膽堿(ACH)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號：20120819)；膽堿酯酶(CHE)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號：20120627)；多巴胺(DA)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號：20120622)；去甲腎上腺素(NE)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號：20120817)；5-羥色胺(5-HT)測試盒(南京建成生物工程研究所，批號：20120620)。

1.3動物

60只健康昆明小鼠，雌雄各半，其中4周齡青年小鼠10只，12月齡老年小鼠50只，購自湖北省實驗動物中心，合格證號：SCXK (鄂)2012-0007。

2方法

2.1動物分組、給藥與取材

昆明種小鼠60只，雌雄各半，其中10只4周齡青年小鼠，體質量18～22 g，作為青年小鼠對照組；50只12月齡老年小鼠，體質量30～35 g，按隨機數字表法分為老年小鼠對照組、六味地黃濃縮丸組、蜂眠寧膠囊組(高)、蜂眠寧膠囊組(中)、蜂眠寧膠囊組(低)，每組10只。青年及老年小鼠對照組均給予等量0.9%氯化鈉注射液；六味地黃濃縮丸組給予六味地黃濃縮丸6 g/kg(相當于臨床人用量的10倍)；蜂眠寧膠囊組(高)給予蜂眠寧膠囊3 g/kg(相當于臨床人用量的30 倍)；蜂眠寧膠囊組(中)給予蜂眠寧膠囊1.5 g/kg(相當于臨床人用量的20倍)；蜂眠寧膠囊組(低)給予蜂眠寧膠囊0.75 g/kg(相當于臨床人用量的10倍)。灌胃給藥，1日1次，連續10 d。

2.2指標檢測

末次給藥后1 h，各組小鼠立即頸椎脫臼處死，冰上取出腦組織，在冰冷的0.9%氯化鈉注射液中漂洗，除去血跡，濾紙拭干，稱質量。然后置玻璃勻漿器中，加入5倍量的0.9%氯化鈉注射液制備腦勻漿，轉速3 000 r/min離心 10 min，取上清液置冰浴中。按試劑盒說明書的方法測定腦組織中ACH、CHE、DA、NE、5-HT的活性[5-7]。其中蛋白含量的測定用BCA法：準確稱取腦組織重量，按質量(g)∶體積(ml)=1∶9的比例，加入9倍體積的0.9%氯化鈉注射液，冰水浴下機械勻漿，2 500 r/min離心10 min，取上清液再用0.9%氯化鈉注射液按1∶9 稀釋成1%的組織勻漿，按試劑盒說明書的方法測定腦組織中總蛋白量。

2.3統計學方法

3結果

3.1蜂眠寧膠囊對老年小鼠腦組織中ACH和CHE影響

與青年小鼠對照組比較，老年小鼠對照組小鼠腦內中樞神經遞質ACH的含量明顯下降(P<0.01)，CHE的含量顯著升高(P<0.01)；六味地黃濃縮丸組、蜂眠寧膠囊組(高)、蜂眠寧膠囊組(中)的ACH含量、CHE含量與老年小鼠對照組比較，差異有極顯著統計學意義(P<0.01)；說明高劑量和中劑量的蜂眠寧膠囊具有升高ACH含量，降低CHE含量，從而促進學習記憶能力的作用，見表1。

Tab 1Effects of Fengmianning capsules on ACH and CHE

組別劑量/(g/kg)ACH/[μg/(mg·prot)]CHE/[U/(mg·prot)]青年小鼠對照組(n=10)—108.13±31.185.21±1.04老年小鼠對照組(n=10)—36.57±11.26**10.39±1.91**六味地黃濃縮丸組(n=10)676.68±24.43##6.53±1.22##蜂眠寧膠囊組(高)(n=10)394.48±16.51##△5.27±1.59##△蜂眠寧膠囊組(中)(n=10)1.568.15±15.47##7.42±1.75##蜂眠寧膠囊組(低)(n=10)0.7547.56±11.128.66±1.68

注：“—”表示未用藥；與青年小鼠組比較，**P<0.01;與老年小鼠對照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與六味地黃濃縮丸組比較，△P<0.05

Note:“—” stands for non-medication, vs. young mice control group，**P<0.01； vs. aged mice control group,*P<0.05，**P<0.01； vs. Liuweidihuang pills group,△P<0.05

3.2蜂眠寧膠囊對老年小鼠腦內單胺類遞質DA、5-HT和NE的影響

與青年小鼠對照組比較，老年小鼠對照組腦內單胺類遞質DA和NE的含量明顯下降(P<0.01)；六味地黃濃縮丸組、蜂眠寧膠囊組(高)的DA含量與老年小鼠對照組比較，差異有極顯著統計學意義(P<0.01)，蜂眠寧膠囊組(中)的DA含量與老年對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；六味地黃濃縮丸組小鼠NE與老年對照組比較，差異有極顯著統計學意義(P<0.01)，蜂眠寧膠囊組(高)、蜂眠寧膠囊組(中)與老年小鼠對照組比較，差異有統計學意義(P<0.05)；5組5-HT的含量差異無統計學差異(P>0.05)；說明蜂眠寧膠囊高、中劑量能通過升高腦內單胺類遞質DA和NE含量，從而起到促進學習記憶能力，見表2。

Tab 2　Effects of Fengmianning capsules on DA, NE and

組別劑量/(g/kg)DA/(ng/L)NE/(ng/L)5-HT/(ng/L)青年對照組(n=10)—487.19±78.21158.46±48.52617.32±154.31老年對照組(n=10)—255.81±70.13**60.22±28.47**663.56±106.76六味地黃濃縮丸組(n=10)6388.51±80.26##90.25±25.23##680.11±131.69蜂眠寧膠囊組(高)(n=10)3427.31±98.79##△117.37±25.49##△591.79±171.06蜂眠寧膠囊組(中)(n=10)1.5377.24±81.85#86.87±24.58#610.31±112.43蜂眠寧膠囊組(低)(n=10)0.75340.14±91.2478.86±25.78562.23±161.32

注：“—”表示未用藥；與青年小鼠組比較，**P<0.01;與老年小鼠對照組比較，#P<0.05，##P<0.01；與六味地黃濃縮丸組比較，△P<0.05

Note: “—” stands for non-medication； vs. young mice control group，**P<0.01； vs. aged mice control group,*P<0.05，**P<0.01； vs. Liuweidihuang pills group,△P<0.05

4討論

老年性癡呆是一種病理及病因改變都比較復雜的綜合性大腦損害疾病，患者的大腦出現了退行性的病變。老年癡呆患者都出現不同程度的神經遞質缺少，進而腦萎縮。ACH是中樞膽堿能系統中重要的神經遞質之一，其主要作用是維持意識的清醒，促進學習和記憶的功能。有研究結果發現，當機體需要對新刺激進行學習記憶等認知活動時，基底前腦膽堿能神經元被激活，腦內ACH的釋放也隨之變化。人腦中乙酰膽堿的含量會隨著年齡增加而出現下降，導致腦神經傳遞功能的異常，從而出現大腦記憶功能的障礙。CHE是一類糖蛋白，一般可以分為真性膽堿酯酶和假性膽堿酯酶。真性膽堿酯酶也稱乙酰膽堿酯酶，主要存在于膽堿能神經末梢突觸間隙，用于水解ACH，常簡稱為膽堿酯酶；假性膽堿酯酶可分解其他膽堿酯類，主要存在于神經膠質細胞、血漿中。乙酰膽堿酯酶是ACH的水解酶，其活性變化可間接反映出腦內ACH含量和代謝的情況。

學習記憶的形成和保持不僅與中樞膽堿能神經系統相關，并且與單胺類神經遞質密切相關[8-10]。單胺類神經遞質主要包括NE、DA、5-HT。研究結果表明，NE和DA的含量與學習記憶的功能有關[11-14]，而5-HT則參與調節情緒。在正常情況下，中樞內神經遞質的分泌保持在一定水平，并且相互協調，從而維持功能的穩定[15-16]；隨著機體的老化，會出現腦內單胺類神經遞質的代謝紊亂，且NE和DA含量的下降，表明衰老過程中腦內單胺類神經遞質的平衡遭到破壞，從而出現學習記憶能力的下降。周坤福等[17]研究結果表明，六味地黃丸有明顯的延緩衰老作用。故本研究選用六味地黃丸作為陽性對照。結果發現，與青年小鼠對照組比較，老年小鼠對照組腦組織內ACH、DA、NE的含量明顯下降，CHE的含量顯著升高，說明老年小鼠對照組小鼠出現了明顯的學習記憶障礙。與老年小鼠對照組比較，蜂眠寧膠囊組(高)、蜂眠寧膠囊組(中)、蜂眠寧膠囊組(低)的小鼠腦內ACH、DA、NE含量升高，CHE含量下降；與六味地黃丸對照組比較，蜂眠寧膠囊組(高)的小鼠腦內ACH、DA、NE含量升高，CHE含量下降，差異有顯著性。說明蜂眠寧膠囊能通過調節中樞神經系統功能，起到促進學習、改善記憶能力，從而達到健腦益智，延緩衰老，抗癡呆的作用。

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Effects of Fengmianning Capsules on Neurotransmitter of Aged MiceΔ

ZHOU Conghui1, XIONG Yitao1, YI Ailing2

(1.Dept.of pharmaceutical affairs, Hubei Provincial Traditional Chinese Medicine Hospital, Hubei 430074, China; 2.Dept.of pharmacy, Wuhan Huangpi District People’s Hospital, Hubei 430300, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To probe into the effects of Fengmianning capsules on neurotransmitter of aged mice. METHODS: 10 young mice were set as the control group, 50 aged mice were selected to be divided into aged mice control group, Liuweidihuang pills group, Fengmianning capsules group(high), Fengmianning capsules group(median) and Fengmianning capsules group(low) via the random number table, with 10 cases in each; administered with intragastric administration, once every day for 10 days. After the last administration of 1h, the mice were killed by cervical dislocation immediately, and the activity of Ach, CHE, DA, NE, 5-HT were determined. RESULTS: Compared with aged mice control group, the activity of Ach, DA, NE in Liuweidihuang pills group, Fengmianning capsules group(high), Fengmianning capsules group(median) significantly increased, yet the activity of CHE decreased, with statistically significant difference(P<0.05). The effects of Fengmianning capsules group(high) were better than that of Liuweidihuang pills, with statistically significant difference(P<0.05). CONCLUSIONS: Fengmianning capsules can affect the function of the central nervous system by regulating Ach, CHE, NE, DA, 5-HT and other neurotransmitters, so as to promote and improve the ability of learning and memory, and achieve the effects of anti senile dementia.

KEYWORDSFengmianning capsules; Neurotransmitter; Senile dementia

中圖分類號R961.1

文獻標志碼A

文章編號1672-2124(2016)06-0731-03

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.06.003

(收稿日期：2016-02-19)