東莞市不孕不育患者細胞遺傳學分析

劉引霞，鄒　莎，李志芳，梁愛芬

(廣東省東莞市康華醫院　523000)

·臨床研究·

東莞市不孕不育患者細胞遺傳學分析

劉引霞，鄒莎，李志芳，梁愛芬

(廣東省東莞市康華醫院523000)

目的探討東莞地區染色體異常與不孕不育的關系。方法對該院625例不孕不育患者進行細胞遺傳學分析，采集外周血，按照常規方法制備染色體標本。G顯帶，進行眾數分析及核型分析。結果共檢出異常核型11例，染色體異常發生率為1.76%，多態型36例，占總數的5.76%。結論染色體異常可導致不孕不育，提示不孕不育與遺傳因素密切相關。

不孕不育；染色體異常；細胞遺傳學

近年來由于環境污染、食品安全、社會壓力等諸多因素影響，不孕不育的患病率呈上升趨勢。女性不孕病因主要有器質性病變(如輸卵管阻塞、盆腔炎、陰道炎等)、排卵障礙(如多囊卵巢綜合征、高泌乳素、卵巢早衰等)；男性不育病因主要以精子少、弱、畸形等情況多見。本研究主要討論遺傳因素對不孕不育造成的影響。

1資料與方法

1.1一般資料2014年8月至2015年2月因不孕不育來本院生殖醫學中心就診的患者共625例，其中男353例，女272例，年齡20～45歲，主要臨床表現為不孕不育、不良妊娠史(反復自然流產、畸胎、胚胎停育)、閉經，小睪丸綜合征、封閉抗體、精液質量異常(弱畸形精子癥)等。

1.2方法無菌條件下，抽取患者外周血10 mL，肝素抗凝，常規進行淋巴細胞培養68 h，收獲前2.5 h加入20 μg/L的秋水仙素2滴，使細胞停滯在分裂中期，再經過低滲、固定等處理后，制備染色體并G顯帶。計數20個中期分裂相，分析3個核型。嵌合病例，計數分析50個中期分裂相，并計算比例。剩余懸液-20 ℃保存備用。

1.3統計學處理采用Excel2007軟件進行數據處理及統計學分析。

2結果

異常核型結果11例，占總數的1.76%，多態型36例，占總數的5.76%。平衡易位7例，性染色體異常2例，1例為月經周期正常的女性不孕患者，1例為男性不育患者；其余2例異常為缺失和不明附加片段。見表1。

表1　不孕不育患者異常核型結果

續表1　不孕不育患者異常核型結果

3討論

X染色體是女性性器官發育的性染色體，X染色體異常與不孕、不育有直接關系。X染色體畸變染色體綜合征中Turner綜合征、Klinefelter綜合征、超X綜合征等都涉及X染色體的異常。女性性染色體異常，常見于Turner綜合征，又稱先天性卵巢發育不全綜合征。其染色體核型包括X單體、嵌合體、等臂X、X 缺失等。這類患者典型臨床表現為身材矮小，原發閉經，不孕，B 超顯示幼稚子宮，卵巢發育不良。45，X 是Turner綜合征最常見的核型，約占全部患者的30%～55%[1]。因來本院檢查不孕不育的患者，全部都成年，臨床沒有典型的表型。所以，檢查出來與不孕不育有關的X染色體異常的患者表型正常，有月經，性腺發育正常，只是長年不孕不育。檢查出1例患者X染色體短臂缺失的核型占多數,Xp短臂遠端含SHOX基因的小片段缺失而XP22.3區帶仍然存在，常表現為矮身材和其他相關的骨骼畸形，但無卵巢衰竭表現，因此Tunner綜合征的特征不明顯。但因為該患者是整個短臂的缺失，不存在XP22.3區帶的存在，在現階段也只是表現出身材矮小，無癥狀癥狀的出現[2]，但如果由于X染色體長臂是性腺發育關鍵區域，變異時容易引起性腺發育異常和生育能力降低[3]。

在不孕不育患者中最容易出現的是Y染色體DNA序列的重復復制、缺失導致Y染色質區域的增長和縮短，引起Y染色體長度變異導致臨床通俗所稱的大Y和小Y。雖然在歸類時，將本院引起Y染色體長度變異的大Y、小Y歸納到了多態性一欄，但是國內大多數文獻報道了不少大Y、小Y的患者也伴有無精少精癥狀的發生。主要是因為無精子癥因子(AZF)定位于Yq11.23區域上，它的缺失或突變可能造成精子生成障礙[4]。因為細胞遺傳學G顯帶方法的局限性，對于小于20 Mb的片段在顯微鏡觀察中很難分辨，所以對于一些無精及少精的患者建議臨床同時行基因芯片技術檢測微缺失、微重復。或者在核型提示大Y、小Y的基礎上，利用多重PCR方法對Y染色體上25個STS位點擴增進行確認，提高檢出率。Y染色體易位或倒位的改變染色體在減數分裂時形成倒位環，分離后的兩種不平衡配子與正常配子結合后，造成遺傳物質不平衡，出現缺失或重復，從而導致流產或不育的發生[5]。

染色體平衡易位是不孕不育患者中最多見的一個原因，平衡易位因為沒有遺傳物質的丟失，所以個體表型正常，但可以遺傳。兩夫妻表型正常，不管是男方或者女方，只要一方出現平衡易位，就很容易導致女方在懷孕早期反復流產。平衡易位患者的胎兒在減數分裂中可產生正常和各種不平衡重排的配子，當與正常配子結合形成正常、平衡易位、部分三體、部分單體4種類型的合子，后3 種合子由于基因量的嚴重失衡，可導致不育、反復流產、死胎或生育染色體異常后代[6]。在臨床實踐中還發現,部分染色體平衡易位個體也有表型的異常表現。對于這一類的患者，現在臨床一般對其采取在輔助生殖技術并行胚胎植入前遺傳學診斷PGD技術，在胚胎培植期通過遺傳檢測技術選擇正常的或沒有發病風險的胚胎，植入孕婦體內，避免孕育有家族遺傳疾病的胎兒，減少反復流產的發生。

隨體增長：13、14、15、21、22號染色體是近端著絲粒染色體。多數學者認為隨體增長，對于不孕不育的結果沒有必然聯系。但也有學者認為這些染色體是隨體增長還是短臂增長，單純的隨體柄或隨體增長，沒有含有基因的多或少的區別，不會對生育功能產生影響；如果是短臂增長，引起部分的rRNA高度重復，可能使染色體不分離，形成了染色體異常的配子或合子，最終導致流產、不孕或生育畸形兒。提到的高度重復是指短臂，有基因編碼的，會有重復或者其他片段插入的可能，患者最好進行基因芯片檢查。

次縊痕變異：次縊痕主要存在于第1、9 和16號染色體及Y染色體的長臂異染色質區，Y染色體次縊痕變異已經討論過，不做贅述。對于常染色體的次縊痕變異，主要考慮異染色質區有沒有高度重復或缺失的DNA序列，即基因，有基因的重復或缺失就會影響細胞分裂，造成同源染色體配對困難，產生不平衡的配子，形成非整倍體的子代，發生流產或不平衡的配子不能受精而死亡，從而造成不孕不育，無基因的缺失和重復就是1種染色體多態性的變化。

[1]李艷娟，王鳳榮．特納綜合征并冠心病1例報告合并文獻復習[J]．中國實用內科雜志，2014，34(4)：403-405．

[2]吳麗萍，章濤．SHOX基因的研究進展[J]．福建醫科大學學報，2012，54(6)：223-226．

[3]張清健，鄭立新，田佩玲，等．367 例不育癥者X 染色體變異臨床分析[J]． 中國計劃生育學雜志，2010，19(6)：369-370．

[4]Pandey LK,Pandey S,Gupta J,et al.Loss of the AZFc region due to a human Y-chromosome microdeletion in infertile male patients[J].Genet Mol Res,2010,9(2):1267-1273.

[5]楊仙榮，王美琴，李少華．人類Y染色體的演化[J]．遺傳，2014，36(9):849-856．

[6]侯紅瑛，李小毛，范建輝，等．習慣性流產的細胞遺傳學分析[J]．中山醫科大學學報，2000，21(5):397-399．

2016-01-21修回日期：2016-03-20)

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.044

A

1673-4130(2016)12-1701-02