GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性與白血病易感性的分析*

李　娟，朱俊芳，張　煒，馬海珍

(蘭州大學第一醫(yī)院：1.中心實驗室；2.血液科　730000)

·論著·

GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性與白血病易感性的分析*

李娟1，朱俊芳1，張煒1，馬海珍2△

(蘭州大學第一醫(yī)院：1.中心實驗室；2.血液科730000)

目的分析GSTM1缺失基因型與白血病遺傳易感性的關系。方法131例白血病患者納入病例組，200例體檢健康者納入對照組。采用巢式PCR檢測GSTM1、GSTT1基因型。應用χ2檢驗和精確概率法比較各基因型頻率在病例組與對照組之間的差異，用比值比(OR)及其95%的可信區(qū)間(CI)表示各基因型發(fā)生白血病的風險度。結果病例組GSTM1缺失基因型頻率與對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P=0.000 1，其OR值為2.152，95%CI為2.301～5.985)；在病例組與對照組中均未檢測到GSTT1缺失基因型；CML、AML與ALL組間進行GSTM1缺失基因型頻率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論GSTM1缺失基因型可能是白血病的重要危險因素。

白血病；GSTM1；GSTT1；谷胱甘肽S-轉移酶

白血病是一類起源于造血干細胞的惡性克隆性疾病，國內外研究表明，遺傳因素、環(huán)境因素交互作用與白血病的發(fā)生及疾病的進展有關。代謝酶遺傳多態(tài)性在對環(huán)境致癌物致突變過程中起著關鍵作用，日益受到學者們的關注。人體的Ⅱ相代謝酶谷胱甘肽 S-轉移酶超家族 (GSTs)可催化異生物素的Ⅰ相代謝產物與谷胱甘肽(GSH)結合，使其毒性降低，且易于排出體外，在細胞代謝解毒過程中起著重要作用[1]。研究證實GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性與肺癌、消化道腫瘤的易感性存在著一定的關系[2-5]。本研究就GSTM1、GSTT1基因多態(tài)性與白血病易感性的關系進行了探討。

1資料與方法

1.1一般資料收集2010 年6月至2012年5月蘭州大學第一醫(yī)院住院初診的131例白血病患者納入病例組，其中男73例，女58例，男女比例為1.26∶1.00。其中慢性髓細胞白血病(CML)組患者32例，男22例，女10例，年齡20～69歲，中位年齡45歲，男女比例為2.2∶1.0；急性髓細胞白血病(AML)組患者70例，男34例，女36例，男女比例為0.94∶1.00；急性淋巴細胞白血病(ALL)組患者29例，男16例，女13例，男女比例為1.23∶1.00。另選擇同期本院體檢中心體檢健康者200例納入對照組，其中男134例，女66例，年齡17～81歲，中位年齡40歲。病例組與對照組性別差異無統(tǒng)計學意義(χ2=3.544,P=0.06),具有可比性。

1.2檢測方法

1.2.1白血病診斷及療效判斷標準白血病診斷及誘導治療后第一療程的完全緩解(CR1)，以《血液病診斷及療效準》作為診斷和療效判斷標準。

1.2.2基因組DNA提取采集白血病患者乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na2)抗凝骨髓2 mL，用常規(guī)酚氯仿法提取骨髓細胞基因組DNA并測定DNA的水平和純度，低溫保存。

1.2.3GSTM1及GSTT1多態(tài)基因型的確定采用巢式PCR檢測GSTM1和GSTT1基因的純合缺失。引物序列參照文獻[6],由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。GSTM1基因上、下游引物序列為：F5′-GAA CTC CCT GAA AAG CTA AAG C-3′；R5′-GTT GGG CTC AAA TAT ACG GTG G-3′。GSTT1基因上、下游引物序列為：F5′-TTC CTT ACT GGT CCT CAC ATC TC-3′；R5′-TCA CCG GAT CAT GGC CAG CA-3′。該反應以-globin為陽性內對照，其上、下游引物序列為：F5′-CAA CTT CAT CCA CGT TCA CC-3′；R5′-GAA GAG CCA AGG ACA GGT AC-3′。PCR反應條件,94 ℃預變性4 min后進入熱循環(huán)，94 ℃ 1 min，55 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min，72 ℃ 10 min，共35個循環(huán)。GSTM1和GSTT1基因型結果分析：GSTM1 PCR產物為219 bp；GSTT1 PCR產物為480 bp；-globin PCR產物為268 bp。2%瓊脂糖凝膠電泳進行結果判讀GSTM1缺失基因型為268、480 bp；GSTT1缺失基因型為268、219 bp；GSTM1及GSTM1聯合缺失基因型為268 bp。

1.3統(tǒng)計學處理采用SPSS16.0軟件進行數據處理及統(tǒng)計學分析，計數資料以例數及百分率表示，采用χ2檢驗和精確概率法比較各基因型頻率在病例組與對照組之間的差異，用比值比(OR)及其95%的置信區(qū)間(CI)表示各基因型發(fā)生白血病的風險度。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1病例組與對照組基因型分布比較對照組中200例健康者中115例(57.5%)為GSTM1未缺失基因型，85例(42.5%)為GSTM1缺失基因型；病例組中131例白血病患者35例(26.7%)為GSTM1未缺失基因型，96例(73.3%)為GSTM1缺失基因型，兩組基因型頻率分布差異有統(tǒng)計學意義(χ2=30.27，P=0.000 1)，兩組GSTM1基因型的分布頻率見表1。

表1　病例組與對照組GSTM1位點基因型分布

2.2各組基因型分布比較70例AML患者20例(28.6%)為GSTM1未缺失基因型，50例(71.4%)為GSTM1缺失基因型，對照組與AML組基因型頻率分布差異有統(tǒng)計學意義(χ2=20.962，P=0.000 1)；29例ALL患者中6例(20.7%)為GSTM1未缺失基因型，23例(79.3%)為GSTM1缺失基因型，對照組與AML組基因型頻率分布差異有統(tǒng)計學意義(χ2=13.771，P=0.000 2)；32例CML患者中9例(28.1%)為GSTM1未缺失基因型，23例(71.9%)為GSTM1缺失基因型，對照組與AML組基因型頻率差異有統(tǒng)計學意義(χ2=9.567，P=0.002 0)。CML、AML、ALL組與對照組中GSTM1基因型的分布頻率見表2。

表2　各組GSTM位點多態(tài)基因型分布頻率比較[n(%)]

2.33類白血病患者基因型分布比較CML組分別與AML、ALL組基因型頻率分布比較，差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.002，P=0.963;χ2=0.454，P=0.500)。

3討論

本研究結果顯示，對照組中GSTM1缺失基因型頻率為42.5%，與國內報道上海地區(qū)健康人群GSTM1的缺失率為49.1%相一致[7]。131例白血病病例中96例(73.3%)為GSTM1缺失基因型，病例組GSTM1缺失基因型明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(χ2=30.27，P=0.000 1，OR=2.152，95%CI：2.301～5.985)，本研究結果也顯示攜帶GSTM1缺失基因型的個體發(fā)生白血病的危險性比攜帶GSTM1未缺失基因型的個體增加2.152倍。對病例組進行了進一步的分層研究，結果顯示AML、ALL、CML組分別與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，OR值分別為3.908、5.186、3.458。表明GSTM1缺失基因型可能是白血病的重要危險因素。國內一項對苯引起的白血病研究結果發(fā)現，苯白血病患者中GSTM1缺失基因型的頻率(73.53%)明顯高于對照組(46.88%)，且是苯白血病的易感因素之一(OR=3.15,95%CI：0.56～17.62)[8]，與本研究結果相一致。本研究將CML組分別與AML、ALL組基因型頻率分布比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，表明GSTM1缺失基因型與白血病分型無相關性。本研究結果與袁慧等[9]報道的谷胱甘肽轉硫酶基因與急性白血病易感性的Meta分析的結果相一致。

谷胱甘肽轉硫酶是重要的Ⅱ相代謝酶，可結合各種親電子化合物，包括環(huán)境致癌物及其中間產物，使其水溶性增加，起到解毒的作用。具有GSTM1缺失基因型的個體體內缺乏酶活性，對外來毒物的解毒功能降低，可能成為白血病的重要遺傳學危險因素之一。由于本研究樣本量較小，不能排除偏倚和混雜因素的影響，期望更多學者關注谷胱甘肽轉硫酶基因與白血病發(fā)病風險的研究，通過大樣本的驗證，為白血病的防治提供科學依據。

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Analysis on the association between leukemia susceptibility and gene polymorphism of GSTM1，GSTT1*

LIJuan1，ZHUJunfang1，ZHANGWei1，MAHaizhen2△

(1.CentreforMolecularBiology；2.DepartmentofHematology，theFristHospitalofLanzhouUniversity，Lanzhou,Gansu730000,China)

ObjectiveTo investigate the relationship between leukemia susceptibility and gene polymorphism of GSTM1，GSTT1.MethodsA total of 131 leukemia patients were recruited into group of patients,and 200 healthy person were recruited into control group.GSTM1 and GSTT1 genotypes were determined by multiplex polymerase chain reaction.Chi-square test and Fisher′s exact test was used to compare the differences between the group of patients and control group.ResultsGSTM1 null genotype frequency in group of patients was slightly higher than that of the control group(P=0.000 1，OR=2.152，95%CI=2.301-5.985),There was no GSTT1 null genotype detected in group of patients and control group.Moreover,GSTM1 null genotype frequency showed a similar trend between CML,AML and ALL.ConclusionGSTM1 null genotype might be a risk factor of leukemia.

leukemia;GSTM1;GSTT1;glutathione S-transferase

2016-01-21修回日期：2016-03-14)

甘肅省蘭州市科技局自然科學基金項目(2011-2-46)。

李娟，女，副主任檢驗師，主要從事罕見病及腫瘤遺傳學的研究。△

，E-mail：mahaizhen-2008@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.12.007

A

1673-4130(2016)12-1610-02