羅庫溴銨注射液有關物質檢查方法篩選

張珊珊

哈藥集團技術中心

羅庫溴銨注射液有關物質檢查方法篩選

張珊珊

哈藥集團技術中心

目的通過方法篩選及優化建立羅庫溴銨注射液的有關物質的檢查方法。方法結果結論所建立有關物質檢查方法可有效分離各雜質，方法可行。

羅庫溴銨；有關物質；有效分離

羅庫溴銨為當下主流的麻醉藥品，在醫院麻醉科的占有率呈現出逐年增加趨勢，現已成為手術麻醉的首選藥物，因其起效快，不良反應小，術后復蘇比較快，越來越受到醫生的青睞，同時也被患者所接受［1］。因為羅庫溴銨合成過程復雜，合成路線長，這樣雜質比較多，如雜質控制不好可能給患者帶來用藥風險，為更好地控制產品質量，我們參照相關文獻并根據羅庫溴銨原料的合成工藝［2-3］，建立羅庫溴銨注射液有關物質檢查方法，所建立的方法應能有效檢出合成過程中的起始物料、中間體及降解產物，相關詳細研究結果如下。

1.實驗材料

儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀（DAD檢測器），XS105型電子天平，pB-10型pH計。

試劑及試藥：羅庫溴銨雜質對照品（A～H），來源為美國藥典委員會；羅庫溴銨對照品來源為中檢院；羅庫溴銨注射液為本公司自制樣品；四甲基氫氧化銨、乙腈及磷酸均為色譜純，水為注射用水。

2.方法與結果

相關文獻、進口注冊標準、《美國藥典》及《歐洲藥典》羅庫溴銨有關物質檢查方法相同，但沒有明確色譜柱，我們檢查方法與上述方法色譜條件相同，流動相為0.05mol/L的四甲基氫氧化銨溶液（用磷酸調pH值至7.4）：乙腈（9∶1），流速為1.0ml/min，色譜柱柱溫為45℃，檢測波長為210nm，進樣量為10ul。

2.1樣品處理色譜柱篩選

取供試品溶液，向其中加入雜質A～H及合成過程中起始物料，按照擬定方法進行篩選，結果供試品因為溶液中含有水，在進樣時容易出現倒峰，通過篩選，表明現將供試品用氮氣吹干后加乙腈稀釋這樣可以避免出現倒峰，通過篩選，表明使用Agela NH2（3.5um，250mm*4.6mm）柱可以保證雜質及起始物料與主峰有效分離，雜質H與主峰的分離度大于1.5，同時溶劑峰不干擾雜質A檢出。

2.2專屬性試驗

羅庫溴銨注射液處方中的輔料為氯化鈉及醋酸鈉，樣品制備時用醋酸調pH值，根據處方用量，我們制備相應的空白輔料溶液，按照確定方法進行考察輔料是否影響雜質測定，實驗結果表明輔料不干擾雜質測定。

2.3耐用性試驗

變換色譜柱柱溫、流速、流動相比例及流動相的pH值，色譜柱柱溫變化為±5℃，流速變化為±0.2ml/min，流動相比例為±5℃，結果表明柱溫變化時雜質與主峰可有效分離，柱溫變化對各雜質檢出無影響；流速變化時導致雜質H與主峰不能有效分離，因此，將流速控制在1.0ml/min；流動相比例變化為±2%時雜質與主峰可有效分離，但當流動相比例變化超過2%時，雜質H與主峰不能有效分離；流動相的pH值變化±0.1時，對雜質檢出及分離無影響，在上述條件變化時通過DAD檢測器監測主峰的峰純度，在進行有關物質檢查時應注意上述條件變化。

2.4專屬性試驗

對供試品進行酸破壞、堿破壞、氧化破壞、強光破壞及高溫破壞，同時向供試品中加入起始物料、中間體及各個已知雜質，通過DAD檢測器監測主峰峰純度，酸破壞為向供試品溶液中加入0.1mol/L鹽酸溶液0.5ml，放置2小時，用堿中和；堿破壞樣品溶液為供試品中加入0.1mol/L的氫氧化鈉溶液0.2ml，放置30min，用酸中和；高溫溶液為取供試品于100℃下放置1小時；強光溶液為取供試品于5000lx條件下放置24小時；氧化破壞為向供試品中加入0.5ml30%的過氧化氫溶液，放置3小時（上述樣品的供試品均為5ml）。同時制備空白輔料的破壞溶液作為空白對照，計算各破壞條件下的回收率。結果各破壞條件下主峰與雜質峰均可有效分離，雜質H與主峰分離度均符合規定，輔料破壞不干擾雜質測定，酸、堿、氧化、高溫及強光條件下的峰純度均符合規定，其回收率分別為98.6%、97.2%、101.5%、98.4%及105.2%。專屬性實驗結果表明在高溫條件下樣品不穩定，產生雜質較多，酸及氧化破壞條件下產生雜質較少，堿破壞條件下雜質明顯增加，光照條件下雜質略有增加。

2.5檢測限與定量限

取羅庫溴銨對照品及雜質A～H，分別制成系列濃度溶液，逐步稀釋，以信噪比為3時為檢測限，結果羅庫溴銨及雜質A～H的檢測限分別為9.2、11.5、10.8、13.6、8.7、11.2、5.6、9.7及4.6ng；定量限信噪比為10，結果羅庫溴銨及雜質A～H的等量限分別為28.4、29.8.5、30.1、42.6、25.1、36.1、16.2、28.4及10.8ng。

2.6相對相應因子測定

為更準確測定各雜質量，測定雜質A～H與羅庫溴銨的相對相應因子，結果表明各個雜質與羅庫溴銨的相對相應因子均在0.9～1.1之間，表明不用加校正因子進行計算。

方法學試驗結果表明所建立的有關物質檢查方法可行，可以有效檢出本品合成過程中起始物料及中間體與降解產物（專屬性）。

2.7供試品檢查

對所制備三批供試品進行有關物質檢查，結果三批供試品中主要雜質為雜質A與H，其雜質量均小于0.1%，三批供試品總雜質均小于0.5%。

3.討論

我們探討羅庫溴銨注射液雜質檢查方法，供試品溶液中含有水對測定有干擾，在測定時應用氮氣吹干在配液進樣，否會影響雜質A的檢查。色譜柱的內徑對雜質檢出特別是雜質H與主峰分離度有較大影響，建議固定內徑，最好是3.5um；因雜質H與主峰不易有效分離，因此有關物質檢查時應將雜質H與主峰的分離作為系統適用性考察指標在有關物質檢查之前先進行評價，待符合要求后方可測定；以上為有關物質檢查注意事項。從方法學試驗結果可知我們所建立的有關物質檢查方法靈敏度高、專屬性強，可作為羅庫溴銨注射液有關物質檢查方法。

［1］吳玉軍.腹部手術患者全麻下持續輸注維庫溴銨或順式阿曲庫銨肌松作用比較.中外醫學研究，2015，13（23）：141-142.

［2］趙凱，侯建平，苑洪忠.羅苦修按有掛物質的合成.中國醫藥工業雜志，2011，42（10）：732-736.

［3］宋更申，姜建國，周麗.HPLC法測定羅庫溴銨注射液的含量及有關物質.中國藥房，2010，21（32）：3060-3063.

張珊珊（1984-），女，山東省龍口市人，碩士研究生，中級，作者單位：哈藥集團技術中心，研究方向：藥物質量研究。