高效液相色譜法測(cè)定氟氧頭孢鈉有關(guān)物質(zhì)

曲學(xué)偉

哈藥集團(tuán)技術(shù)中心

高效液相色譜法測(cè)定氟氧頭孢鈉有關(guān)物質(zhì)

曲學(xué)偉

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目的通過方法篩選，建立注射用氟氧頭孢鈉有關(guān)物質(zhì)檢查方法。方法色譜條件為磷酸鹽緩沖液：甲醇（75：25），調(diào)整流速主峰出峰時(shí)間為9min，系統(tǒng)適用性應(yīng)符合規(guī)定，保留時(shí)間應(yīng)為主峰出峰時(shí)間的7倍。結(jié)果供試品溶液不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)進(jìn)樣；檢測(cè)限為35ng/ml；專屬性降解產(chǎn)物主要為1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5-硫醇。結(jié)論所建立有關(guān)物質(zhì)方法可有效控制產(chǎn)品質(zhì)量，方法可行。

有關(guān)物質(zhì)；檢測(cè)限；氟氧頭孢鈉

氟氧頭孢鈉為白色至淺黃色粉末，主要用于各種感染，在臨床上應(yīng)用比較廣泛，近年來在醫(yī)院占有率逐漸增加，目前已上市的氟氧頭孢鈉注射劑只有一家，為日本鹽野義制藥株式會(huì)社在中國(guó)進(jìn)口的制劑，于2001年進(jìn)口中國(guó)，規(guī)格有0.5g及1.0g，沒有國(guó)內(nèi)廠家上市，主要因?yàn)榉躅^孢鈉原料合成比較困難，制劑在制備過程中質(zhì)量不易控制。注射用氟氧頭孢鈉的進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)2001年批準(zhǔn)，有關(guān)物質(zhì)控制不全面，未對(duì)主要的已知雜質(zhì)進(jìn)行控制，同時(shí)沒有考察相關(guān)雜質(zhì)與主成分的相對(duì)相應(yīng)因子，同時(shí)與日本藥典制劑標(biāo)準(zhǔn)相比，未明確出峰時(shí)間，保留時(shí)間定為主峰的3倍，不同色譜柱導(dǎo)致出峰時(shí)間不相同，可能存在雜質(zhì)不容易檢出情況，參照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)［2-3］，我們對(duì)氟氧頭孢鈉制劑雜質(zhì)進(jìn)行詳細(xì)研究，建立制劑標(biāo)準(zhǔn)。

1.儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀（DAD檢測(cè)器）。

注射用氟氧頭孢鈉樣品，來源：日本鹽野義制藥株式會(huì)社，規(guī)格：0.5g。

氟氧頭孢鈉對(duì)照品及1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5硫醇對(duì)照品，來源為日本藥典委員會(huì)。四甲基氫氧化銨、磷酸氫二鈉及甲醇均為色譜純。

2.方法

2.1方法篩選

對(duì)進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)及《日本藥典》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，可知所用流動(dòng)相相同，均為磷酸鹽緩沖液及甲醇，比例有差異（《日本藥典》為75：25，進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)為40：60），檢測(cè)波長(zhǎng)相同均為246nm，《日本藥典》規(guī)定出峰時(shí)間為9min，而進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)沒有規(guī)定出峰時(shí)間，檢測(cè)波長(zhǎng)均為246nm。

我們按照上述色譜條件對(duì)檢測(cè)色譜條件進(jìn)行優(yōu)化，同時(shí)也對(duì)色譜柱進(jìn)行篩選，通過篩選可知，當(dāng)流動(dòng)相比例為磷酸鹽緩沖液—甲醇（25∶75）時(shí)，且色譜柱為熱電色譜柱（250mm*4.6mm*5um），出峰時(shí)間為9min時(shí)雜質(zhì)檢出最佳，同時(shí)，我們研究發(fā)現(xiàn)需進(jìn)行系統(tǒng)適用性考察，因?yàn)樵诠┰嚻芳尤肓鲃?dòng)相制成0.25mg/ml的溶液后，在60℃下放置1小時(shí)，在主峰之后會(huì)出現(xiàn)5%左右的雜質(zhì)，該雜質(zhì)與主峰比較難分離，只有主峰在9min時(shí)才可有效分離，作為系統(tǒng)適用性檢測(cè)條件，如出峰在10min之后，該雜質(zhì)無法與主峰分離。因此，確定主峰出峰時(shí)間為9min，主峰出峰時(shí)間為9min。

2.2檢測(cè)限

取氟氧頭孢鈉對(duì)照品加水制成不同濃度溶液，洗針進(jìn)樣，以信噪比約為3∶1時(shí)溶液濃度作為檢測(cè)限濃度。結(jié)果本品檢測(cè)限溶液濃度為35ng/ml（信噪比為2.8）。供試品溶液的濃度為0.25mg/ml，供試品溶液與檢測(cè)限的溶液之比約為7100，表明0.015%以上的雜質(zhì)均可有效檢出，證明供試品溶度可行。

2.3耐用性試驗(yàn)

變換柱溫、改變流速、改變流動(dòng)相比例，考察雜質(zhì)檢出情況，結(jié)果各條件變化時(shí)要保證主峰出峰時(shí)間在9min，否則系統(tǒng)適用性不符合規(guī)定，因此，在測(cè)定本品時(shí)主要調(diào)整主峰出峰時(shí)間，使其在9min。

2.4溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0小時(shí)、1小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)測(cè)定，結(jié)果1小時(shí)時(shí)供試品雜質(zhì)明顯增加，說明溶液不穩(wěn)定，應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)進(jìn)。

2.5專屬性試驗(yàn)

考察供試品溶液在酸、堿、氧化、高溫及強(qiáng)光條件下穩(wěn)定性情況，使用DAD檢測(cè)器全波長(zhǎng)監(jiān)測(cè)，對(duì)主峰純度進(jìn)行檢測(cè)，為確定檢測(cè)波長(zhǎng)提供依據(jù)，評(píng)價(jià)在各條件下穩(wěn)定性及判斷制劑可能降解產(chǎn)物。結(jié)果主峰純度均符合要求，破壞時(shí)的主要產(chǎn)物為1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5-硫醇，該雜質(zhì)為合成過程中起始物料，也是制劑主要雜質(zhì)，出峰時(shí)間與主峰保留時(shí)間約為0.45。通過專屬性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)有一個(gè)雜質(zhì)出峰時(shí)間比較晚，該雜質(zhì)含量約為0.5%左右，主峰出峰時(shí)間為9min，該雜質(zhì)出峰時(shí)間約50min。

2.6相對(duì)相應(yīng)因子測(cè)定

采用標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率之比測(cè)定氟氧頭孢鈉與1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5-硫醇得相對(duì)相應(yīng)因子，為準(zhǔn)確測(cè)定該雜質(zhì)量提供依據(jù)。制備不同濃度樣品溶液，進(jìn)樣并取5點(diǎn)繪制線性，結(jié)果氟氧頭孢鈉與該雜質(zhì)的相對(duì)相應(yīng)因子為0.48。

通過上述方法學(xué)驗(yàn)證證明本品所建立的方法可行，保留時(shí)間為主峰7倍，在進(jìn)樣前應(yīng)進(jìn)行系統(tǒng)適用性考察，即取供試品加流動(dòng)相制成0.25mg/ml的溶液后，于60℃下放置1小時(shí)，作為系統(tǒng)適用性溶液

2.7三批供試品檢查

取三批供試品，加水制成濃度為0.25mg/ml的溶液作為供試品溶液，取供試品溶液0.5ml加水50ml作為對(duì)照溶液，取樣進(jìn)樣，已知雜質(zhì)（1-（2-羥乙基）-1氫-四唑-5-硫醇）按照相對(duì)相應(yīng)因子計(jì)算，結(jié)果已知雜質(zhì)均在0.5%左右，50min左右雜質(zhì)為0.6%左右，其它單一未知雜質(zhì)均小于0.1%，三批供試品雜質(zhì)基本一致。

3.討論

方法學(xué)研究結(jié)果表明所建立方法可行，溶液不穩(wěn)定需要現(xiàn)配現(xiàn)進(jìn)，檢測(cè)限為35ng/ml，供試品溶液濃度與檢測(cè)限比值約為7100，說明供試品濃度可行，破壞條件下降解產(chǎn)物主要為已知雜質(zhì)。比較進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)及日本藥典標(biāo)準(zhǔn)可知，9min出峰時(shí)間對(duì)雜質(zhì)有效檢出尤為重要，在新的方法中增加了系統(tǒng)適用性考察，通過破壞樣品，破壞出來的雜質(zhì)峰與主峰應(yīng)有效分離，同時(shí)我們研究發(fā)現(xiàn)，在主峰出峰時(shí)間為9min時(shí)，在50min有一比較大雜質(zhì)峰，同時(shí)我們對(duì)已知雜質(zhì)與氟氧頭孢鈉的相對(duì)相應(yīng)因子進(jìn)行測(cè)定，相對(duì)相應(yīng)因子為0.48，這樣可以更準(zhǔn)確測(cè)定雜質(zhì)量。通過上述研究，可知進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)存在不完善的地方，我們建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)可更有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量。

［1］李波，何洪，陸豫.氟氧頭孢中間體1-羥乙基-5-巰基-1H-四唑的合成進(jìn)展.化學(xué)世界，2014，55（4）∶247-250.

［2］注射用氟氧頭孢鈉日本藥典標(biāo)準(zhǔn)（JP16）.

［3］注射用氟氧頭孢鈉進(jìn)口注冊(cè)標(biāo)準(zhǔn)（X20010221）.

曲學(xué)偉（1983-），女，黑龍江省木蘭縣人，碩士研究生，中級(jí)，作者單位：哈藥集團(tuán)技術(shù)中心，研究方向：藥物質(zhì)量研究。