白術和蒼術的鑒定研究

高 巖王曉羽（ 盤錦檢驗檢測中心理化科，遼寧 盤錦 400； 遼寧漢草堂中藥有限公司質量授權人，遼寧 營口 5004）

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白術和蒼術的鑒定研究

高 巖1王曉羽2
（1 盤錦檢驗檢測中心理化科，遼寧 盤錦 124010；2 遼寧漢草堂中藥有限公司質量授權人，遼寧 營口 115004）

【摘要】目的 探討白術和蒼術的鑒定。方法 本研究采用ITS2序列對藥材白術與蒼術進行DNA條形碼鑒定。結果 白術與蒼術的3個基原物種（蒼術、關蒼術和朝鮮蒼術）ITS2序列均為229 bp。13條白術的序列僅在98 bp處有C-G變異，平均CG含量為69.42%；3條蒼術序列無變異位點；關蒼術與朝鮮蒼術的種內最大K2P距離均為0.013。白術、朝鮮蒼術序列能各自聚為一支，關蒼術與蒼術聚為一支。結論 ITS2序列在藥材白術與蒼術鑒定方具有很好的鑒別效果。

【關鍵詞】白術；蒼術；鑒定

蒼術、白術是臨床上重要的常用中藥。蒼術、白術均為菊科蒼術屬Atractylodes DC.植物，二者的名稱、功效、臨床應用均較相似，極易混淆。白術、蒼術、關蒼術、朝鮮蒼術的來源較多，且較復雜。2010年版《中國藥典》規定，白術、蒼術的藥用植物均為菊科植物，其中蒼術又包含茅蒼術或北蒼術，北蒼術又包括了關蒼術和朝鮮蒼術。四種藥材的藥用部位均是其干燥根莖［1］。

DNA條形碼鑒定技術一提出因其通用、快捷等優勢得到了廣泛的關注。藥材羌活、冬蟲夏草、黨參等藥材及其混偽品的鑒定中DNA條形碼鑒定技術發揮了很大作用。此外DNA條形碼鑒定技術應用在植物的檢驗檢疫、藥材市場監督以及法醫鑒定等諸多方面。為了確保白術與蒼術的用藥質量，運用DNA條形碼技術鑒定白術與蒼術，更好的服務于臨床。

1 材料與方法

1.1 材料：本研究收集大量的基原植物及藥材包括白術、蒼術、關蒼術、朝鮮蒼術。所有樣本鑒定均由權威部門中國醫學科學院的藥用植物研究所執行。白術Atractylodes macrocephala，樣本數13，樣本編號YC0059MT01～YC0059MT13，產地為河北省安國；蒼術A. Lancea，樣本數5，樣品編號YC0161MT01～YC0161MT05，產地河南省洛陽；關蒼術A. Japonica，樣本數4，樣品編號YC0062MT01～YC0062MT04，產地吉林省長白山；朝鮮蒼術A. Coreana，樣本數7，樣品編號YC0061MU01～YC0061MU09，產地遼寧省沈陽。

1.2 方法：將藥材去掉表皮留取中間部分為藥材樣本，取樣本約40～60 mg。然后用高通量組織球磨儀研磨組織2 min，頻率為50 Hz，核分離液洗滌，800微升/次，洗滌3次后，留取沉淀，采用植物組織DNA提取試劑盒提取樣本藥材的DNA。

PCR擴增：ITS2正向引物ITS2F （5'AT-GCGATACTTGGTGTGAAT-3'），反向引物ITS3R （5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'），反應體系25 μL，正反向引物各1 μL，DNA模板2～3 μL，其余體積以ddH2O補充［2］。

2 結 果

2.1 DNA提取及PCR擴增效率：本實驗提取DNA采用的是核分離液洗

組8例有效，2例死于腎功能衰竭，l例死于肝性腦病，l例死于上消化道出血。

滌技術，在試驗過程中存在在細胞核中的多酚、多糖可以被除去，提高DNA純度。29份樣本均成功提取DNA。結果發現引物ITS2F/3 R對本研究中白術、蒼術、關蒼術、朝鮮蒼術4種藥材及基原植物均有較高的擴增效率，通過試驗得到質量較高的ITS2序列。

2.2 種內、種間變異分析：13條白術的序列中，ITS2序列長度為229 bp，僅在98 bp處有C-G變異，平均CG含量在4個物種中最高，為69.42%，種內最大K2P距離為0。藥材蒼術的3個基原物種中，CG含量分別為。4條蒼術序69.00%、68.27%、68.67%。4條蒼術序列在本試驗中未發現變異，種內最大K2P距離為0。見表1。

3 討 論

白術、蒼術是常用的藥材，具有悠久的應用歷史。白、蒼二術，《神農本草經》稱“術”，列為上品，但未有白術和蒼術之分。張建逵等［3］查閱大量本草文獻、充分考證后認為：唐代藺道人明確區別蒼術、白術。找到白術與蒼術的鑒別，更好的控制兩藥的質量。北蒼術是一種較為混雜的物種，在《中國植物志》中就有著明確的記載，其中主要包括蒼術本種，以及一些生長在北方地區的蒼術種類。如：關蒼術組要生長在遼寧以及山東地區，其中朝鮮蒼術也被包括在其中。本研究中關蒼術與蒼術的最小種間K2P距離為0.10，小于關蒼術最大種內K2P距離0.013，該結果與《Flora of China》中的分類一致。通過對蒼術、關蒼術、朝鮮蒼術的ITS2序列特征及種間遺傳距離的比較，表明ITS2序列在蒼術、關蒼術、朝鮮蒼術鑒別中較好。白術與蒼術有多種鑒定方式，近年來隨著薄層色譜的方法的快速發展，傳統的通過觀察二者的性狀、粉末顯微特征的方法逐漸被取代［4］。本研究采用的是近年來新興的方法DNA條形碼鑒定技術。本研究樣本藥材白術和蒼術的鑒定序列均為223～229 bp，ITS2序列較短。本實驗研究的13條白術序列中，所有峰圖在98 bp飾處均為CG套峰狀況，由此推斷，98 bp飾處為白術ITS2序列中的一個SNP位點。綜上所述，ITS2序列在藥材白術、蒼術、關蒼術、朝鮮蒼術鑒定中取得了較好的效果，充分說明DNA條形碼分子鑒定技術在藥物鑒定中的有效應用。研究藥材的鑒定有助于辨別藥材真偽，同時也可指導臨床精確用藥。

表1 白術、蒼術ITS2序列特征及種間遺傳距離

參考文獻

［1］ 中國科學院中國植物志編委會.中國植物志［M］.北京：科學出版社，1987.

［2］ 陳士林.中藥DNA條形碼分子鑒定山［M］北京：人民衛生出版社，2012：22.

［3］ 張建逵，竇德強，王冰，等.白術的本草考證［J］.時珍國醫國藥，2013，24（9）：2222.

［4］ 傅厚道.白術及其偽品的鑒別［J］.中國藥業，2012，21（18） ：92.

3 討 論

肝腎綜合征（HRS）是肝硬化功能性腎損害，腎臟并無解剖和組織學方面的病變［2］。具體發病機制非常復雜，與腎臟神經、體液調節異常、血液循環功能障礙、心臟病變和肝功能損害、門靜脈高壓等多種因素相關［3］，以動脈循環和內源性血管活性系統顯著異常為主要特征的臨床綜合征。腎臟病變主要是腎血管顯著收縮導致的腎小球濾過率低下。

［1］ Shang J，Cao Q.Diagnosis of hepatorenal syndrome［J］.Chin J Hepatol，2011，19（3）：165-166.

［2］ Ruiz del Arhol L，Urman J，Fernand J，et a1.Systemic，renag and hepatic hemodynamie derangement in cirrhotic patientwith spontaneous bacterial peritonitis［J］.Hepatology，2003，38（5）：1210-1218.

［3］ Zhang LL.Pathogenesis of hepatorenal syndrome［J］.Chin J Hepatol，2011，19（3）：163-164.

Study Identification of Rhizoma Atractylodis Macrocephalae and Atractylodes Lancea

GAO Yan1， WANG Xiao-yu2
（1 Department of Physical and Chemical， Panjin Inspection and Testing Center， Panjin 124010， China；2 Quality Authorized Person， Liaoning Hancaotang Chinese Medicine Co. Ltd.， Yingkou 115004， China）

［Abstract］Objective To explore the identifcation of Rhizoma Atractylodis Macrocephalae and Rhizoma atractylodis. Methods This study used ITS2 sequence DNA barcode identifcation of medicinal materials and Atractylodes macrocephala. Results The 3 base Atractylodes Atractylodes and original species （Atractylodes rhizome， Atractylodes lancea and North Korea） ITS2 sequence was 229 bp. 13 Baizhu sequence only in 98 BP with C-G variation，average CG content was 69.42%； 3 Atractylodes rhizome sequences without ectopic； Guan Atractylodes rhizome and Korea Atractylodes in maximum K2P distance were 0.013. Korea Atractylodes Atractylodes， sequence together， Atractylodes Atractylodes lancea and a poly. Conclusion ITS2 sequence has a good effect on the identifcation of medicinal materials and identifcation of Rhizoma Atractylodis macrocephala.

［Key words］Atractylodes； Herb； Appraisal

中圖分類號：R282.710.3

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）17-0030-02