簡單高效獲取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的方法研究

霍永寶 葉子冠 陳瑞林 陶 怡

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科, 廣東 廣州 510260)

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·臨床研究·

簡單高效獲取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的方法研究

霍永寶 葉子冠 陳瑞林 陶 怡*

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院風(fēng)濕免疫科, 廣東 廣州 510260)

目的:探索簡單高效的獲取人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的方法。方法：采用Ⅱ型膠原酶對健康產(chǎn)婦正常分娩的臍帶進行消化，分離出HUVECs，予含10%胎牛血清、1%內(nèi)皮細(xì)胞生長液的PRM 1640培養(yǎng)液，在37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)，分別進行細(xì)胞鑒定及活力檢測。結(jié)果：分離獲取的HUVECs呈典型的“鵝卵石、鋪路石”樣，有特異性vWF抗原表達，細(xì)胞活力好。結(jié)論：Ⅱ型膠原酶對健康產(chǎn)婦正常分娩的臍帶進行消化分離，可獲取大量純度高、細(xì)胞活力好的HUVECs，簡單高效、可行性強。

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)；原代

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)由于其分化潛能和新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的特性，且可通過新生兒臍帶消化所得，獲取容易，已廣泛用于體內(nèi)絕大多數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞功能的研究[1-2]。本研究參考經(jīng)典的HUVECs分離方法[3]，采用新生兒臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞作為細(xì)胞來源，通過膠原酶消化的方法獲得原代內(nèi)皮細(xì)胞，探索一種較為簡單高效、重復(fù)性好的實驗方法。

1 材料與方法

1.1 材料

臍帶由廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院產(chǎn)科提供。無菌條件下取健康產(chǎn)婦分娩后6 h內(nèi)的新生兒臍帶，長10～15 cm，孕產(chǎn)婦無基礎(chǔ)疾病，產(chǎn)前檢查HBsAg、人免疫缺陷病毒及梅毒均陰性。臍帶剪取后立即準(zhǔn)備實驗。

1.2 主要試劑及儀器

PRM 1640培養(yǎng)液(Gibco公司，美國)；Ⅱ型膠原酶(Gibco公司，美國)；胎牛血清(HyClone公司，美國)；……