2 638例細(xì)胞DNA定量分析法篩查宮頸癌的意義

劉國生　王曉亮　鄭建瓊　曾守逵　周維

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2 638例細(xì)胞DNA定量分析法篩查宮頸癌的意義

劉國生王曉亮鄭建瓊曾守逵周維

［摘要］目的通過DNA定量分析法篩查恩施地區(qū)社區(qū)婦女宮頸病變的發(fā)病情況，明確其在篩查及預(yù)防宮頸癌變的作用。方法對2013年12月至2014年11月在湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院自愿免費(fèi)參加宮頸疾病普查的恩施州社區(qū)婦女，采用宮頸刮片采集宮頸脫落細(xì)胞樣本進(jìn)行分析。結(jié)果2 638例普查者中，發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞和異倍體細(xì)胞峰以及細(xì)胞異常增生共131例，占4.97%，經(jīng)病理確診為宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（cervical intraepithelial neoplasias，CIN）45例，細(xì)胞DNA定量分析陽性患病率34.35%。結(jié)論采用細(xì)胞DNA定量分析法能及早發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，通過婦女宮頸癌及癌前病變篩查可提高宮頸病變檢出率。

［關(guān)鍵詞］細(xì)胞DNA定量分析；篩查；宮頸病變

作者單位：湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，湖北，恩施445000

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于乳腺癌［1］。而在我國，其發(fā)生率和病死率明顯高于西方發(fā)達(dá)國家，究其原因，與缺乏對適齡婦女宮頸癌前病變的早期篩查和及時正確的進(jìn)行醫(yī)學(xué)干預(yù)有著十分密切的關(guān)系。原位癌的高發(fā)年齡約為30歲～35歲，浸潤癌約為45歲～55歲，近年來宮頸癌發(fā)病有年輕化的趨勢［2］。大量的研究與實(shí)踐表明，嚴(yán)重危害婦女健康的宮頸癌，是唯一一種可采用醫(yī)學(xué)干預(yù)手段使其發(fā)病率和死亡率下降的人類惡性腫瘤［1-2］。隨著宮頸癌的細(xì)胞學(xué)檢測技術(shù)和方法不斷提高與發(fā)展，宮頸癌檢出率有明顯提高。DNA異倍體細(xì)胞的改變，是診斷宮頸癌及癌前病變的一個客觀、早期、敏感、特異性的指標(biāo)［2］。伴隨著近些年來宮頸細(xì)胞學(xué)篩查的普遍使用，宮頸癌和癌前病變的二級預(yù)防早發(fā)現(xiàn)、早治療落實(shí)得越來越好，宮頸癌的發(fā)病率和死亡率已經(jīng)明顯降低［3］。為探討細(xì)胞DNA含量及特征分析對篩查宮頸病變的價值，本研究選擇2 638例行宮頸癌篩查的受試者，行細(xì)胞DNA倍體分析，并對異常者進(jìn)行病理學(xué)檢測，以期及早發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，提高檢出率。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下：

1　材料與方法

1.1一般資料

1.1.1研究對象

選擇恩施州2013年12月至2014年11月自愿免費(fèi)來湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院參加宮頸疾病篩查的社區(qū)婦女2 638例，年齡20歲～83歲，平均年齡44歲。其中30歲以下169例，平均年齡28.5歲；31歲～40歲854例，平均年齡35.5歲；41歲～50歲918例，平均年齡46.5歲；51歲～60歲629例，平均年齡54歲；61歲及以上者68例，平均年齡63.5歲。

1.1.2儀器與試劑

武漢蘭丁醫(yī)學(xué)高科技有限公司提供的全自動細(xì)胞DNA定量分析儀（蘭丁細(xì)胞CT）、全自動細(xì)胞圖象分析系統(tǒng)、宮頸刷和配套試劑富爾根（Feul?gen）DNA染液。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本采集方法

采用宮頸刷采集宮頸脫落細(xì)胞樣本，將樣本浸泡在樣本收集瓶固定液內(nèi)，旋緊瓶蓋后震蕩搖晃，貼上條碼標(biāo)簽，于常溫及時送醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室。

1.2.2制片與染色

玻片經(jīng)粘附劑處理，取沉渣加懸浮液震蕩混勻，混勻后滴片，制片后用富爾根（Feulgen）DNA染色，然后上機(jī)做細(xì)胞DNA定量分析診斷。

1.2.3細(xì)胞DNA定量分析

所有Feulgen染色片用武漢蘭丁全自動細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行掃描處理，并由定量分析診斷軟件自行進(jìn)行結(jié)果判定。

1.2.4病理學(xué)檢查

篩查中凡細(xì)胞DNA定量分析結(jié)果建議活檢的對象，均進(jìn)行陰道鏡檢查并對可疑部分進(jìn)行4點(diǎn)以上的組織取材，送重慶金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)公司進(jìn)行病理學(xué)檢測。

2　結(jié)果

2.1宮頸上皮細(xì)胞DNA定量分析圖

經(jīng)武漢蘭丁細(xì)胞DNA定量分析系統(tǒng)對2 638例患者標(biāo)本進(jìn)行檢測后，可生成3種不同的細(xì)胞DNA定量分析檢測圖：（1）未見異倍體細(xì)胞、異倍體細(xì)胞峰及異常細(xì)胞增生，大多數(shù)細(xì)胞DNA指數(shù)（DNA index，DI）DI=1，個別細(xì)胞DI=2，且沒有DI〉2.5的細(xì)胞，建議定期進(jìn)行正常篩查（2～3年）（圖1A）。（2）可見個別DNA倍體異常細(xì)胞，即DI〉2.5，或可見少量細(xì)胞增殖比例在5%～10%，但不包括10%，大多數(shù)細(xì)胞DNA指數(shù)依然等于1，建議4～6個月進(jìn)行復(fù)查，以明確原因（圖1B）。（3）可見 3個細(xì)胞DI〉2.5，或可見異常增生細(xì)胞 10%及細(xì)胞異倍體峰，建議行陰道鏡檢查并對可疑組織進(jìn)行取材，行病理學(xué)檢查（圖1C）。

2.22 638例婦女宮頸脫落細(xì)胞DNA倍體篩查結(jié)果

本研究共篩查2 638例，正常結(jié)果2 236例，占84.76%；建議復(fù)查271例，占10.27%；建議活檢131例，占4.97%。具體結(jié)果見表1。

2.3131例婦女宮頸脫落細(xì)胞活檢后病理結(jié)果

在本組篩查數(shù)據(jù)中，共有131例經(jīng)細(xì)胞DNA定量分析呈陽性者，行陰道鏡檢查并對可疑組織進(jìn)行取材，經(jīng)專家切片、病理學(xué)檢測，發(fā)現(xiàn)輕度異型增生（mild cervical intraepithelial neoplasias，CIN?Ⅰ）（圖2B）、中度異型增生（moderate cervical in?traepithelial neoplasias，CIN?Ⅱ）（圖2C）和重度異型增生（severe cervical intraepithelial neoplasias，CIN?Ⅲ）（圖2D）患者共45例，包括癌前病變者42例，鱗狀細(xì)胞癌或腺癌（圖2E）病變者3例，陽性檢出率為34.35%。結(jié)果見表2。

3　討論

表1　2 638例婦女宮頸脫落細(xì)胞DNA倍體篩查結(jié)果（n）Table 1 The DNA ploidy screening results of cervical exfoliated cells in the 2 638 cases（n）

表2　131例婦女宮頸脫落細(xì)胞活檢后病理結(jié)果（n）Table 2 The biopsy pathologic results of cervical exfoliated cells in the 131 cases（n）

宮頸癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，主要是因持續(xù)感染人乳頭瘤狀病毒（human papilloma vi?rus，HPV）引起，最常感染的HPV亞型是HPV6、HPV11和HPV51［4］。宮頸癌是目前惟一病因明確、可以有效篩查阻止其發(fā)生的腫瘤。隨著社會的發(fā)展，人們對宮頸癌二級預(yù)防的意識不斷增強(qiáng)，自行宮頸癌篩查的受試者日益增多［5］。細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查雖是宮頸癌與宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（cervi?cal intraepithelial neoplasias，CIN）篩查的主要方法之一，但因形態(tài)學(xué)檢查所具有的局限性，和長時間閱片導(dǎo)致的視覺疲勞問題，造成敏感性相對較低，重復(fù)性較差以及較多意義不明的判片結(jié)果［6］。細(xì)胞DNA定量分析檢測宮頸癌及癌前病變的診斷在國外有大量的文獻(xiàn)報(bào)道，國內(nèi)使用細(xì)胞DNA定量分析檢測方法和診斷已在開展。DNA異倍體的出現(xiàn)，是染色體異常的表現(xiàn)，也是細(xì)胞癌變和癌前病變的特征指標(biāo)［7-11］。細(xì)胞DNA定量分析檢測是在液基薄層制片的基礎(chǔ)上，進(jìn)行Feulgen染色，通過全自動掃描系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞DNA定量分析，測定細(xì)胞DNA倍體是否異常。因細(xì)胞惡變過程中出現(xiàn)DNA含量的改變較形態(tài)學(xué)改變早，因此細(xì)胞DNA定量分析檢測不僅能識別宮頸脫落細(xì)胞中的DNA異倍體細(xì)胞，還能識別異常增生細(xì)胞。通過DNA定量分析來掌握腫瘤細(xì)胞遺傳基因變異過程，可作為一種評估癌前病變的指標(biāo)［12］。這種方法的敏感性高，能早期檢測到宮頸癌及癌前病變，并且可以檢測到肉眼不能觀察到的細(xì)胞微小的改變，這種改變往往是癌前病變的表現(xiàn)，有利于早期治療。

多項(xiàng)研究和理論都證實(shí)，DNA倍體異常細(xì)胞的出現(xiàn)是細(xì)胞癌變的一個特征［7-11］。在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過程中，細(xì)胞核內(nèi)染色體的異常要早于細(xì)胞形態(tài)上的異常改變，因此采用細(xì)胞核內(nèi)DNA定量分析技術(shù)較常規(guī)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測宮頸癌變更敏感［7-12］。本組篩查數(shù)據(jù)中共發(fā)現(xiàn)131例建議活檢者，經(jīng)重慶金域醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)公司病理學(xué)專家確定為CIN 45例，建議活檢者陽性檢出率為34.35%，篩查后明顯地提高了病變檢出的針對性和有效率。由表2可見，41歲～50歲之間發(fā)病率最高，其次為31歲～40歲和51歲～60歲年齡段，這與郎景和等［13］研究的結(jié)果相一致。宮頸異倍體細(xì)胞和細(xì)胞異常增生的出現(xiàn)象征著細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)和數(shù)量出現(xiàn)異常的變化，最終發(fā)展至浸潤性宮頸癌。目前普遍認(rèn)為宮頸癌是逐漸形成的，從CINⅠ至CINⅡ至CINⅢ，而后進(jìn)展為浸潤性癌，估計(jì)從CIN進(jìn)展為癌大約需要10年以上的時間。傳統(tǒng)上認(rèn)為：更多CINⅠ和CINⅡ會消退，大約10%的CINⅠ、20%的CINⅡ會進(jìn)展為CINⅢ，12%的CINⅢ會進(jìn)展為浸潤性癌［14］。因此，正確及時地進(jìn)行醫(yī)學(xué)干預(yù)，有利于降低宮頸癌的發(fā)病率和死亡率［15-16］。根據(jù)郎景和［13］研究資料顯示，宮頸浸潤癌的好發(fā)年齡在50歲左右，符合從宮頸上皮內(nèi)瘤變到宮頸癌大約10～20年的演變過程，這是一個可以采用醫(yī)學(xué)干預(yù)手段加以阻斷的最好時期，是癌瘤早期防治的重要階段。

本次篩查結(jié)果表明，利用細(xì)胞DNA定量分析的方法能及時發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，對及時采用預(yù)防和治療措施、防止癌變發(fā)生可提供有益指導(dǎo)和方向。這種方法，可明確提高標(biāo)本質(zhì)量，提高癌變檢出率，與病理學(xué)診斷符合率高。黃衛(wèi)彤等［17］報(bào)道，意義未明的不典型鱗狀細(xì)胞（atypicai squa?mous cells of unknown significance，ASCUS）在描述性診斷報(bào)告中很常見，其特點(diǎn)是檢查結(jié)果重復(fù)性差，即可是良性病變，也可是不同級別的CIN，甚至是早期浸潤癌，但宮頸浸潤癌檢出率低，病變轉(zhuǎn)歸差異明顯。細(xì)胞DNA倍體分析可輔助用于ASCUS的分流診斷，對ASCUS患者結(jié)合DNA定量分析進(jìn)行有選擇性的活檢，可明顯提高CIN的檢出率、降低宮頸癌的漏診。陳志香等［18］報(bào)道，在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展過程中，病變細(xì)胞核內(nèi)染色體的異常和DNA含量的改變要明顯早于細(xì)胞形態(tài)學(xué)的異常改變。所以，相比較常規(guī)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測而言，DNA定量分析技術(shù)的敏感度更高，可有效地降低漏診率，提高檢測的陽性率。

綜上所述，通過對細(xì)胞DNA定量分析，進(jìn)行有選擇性的活檢，既可以提高宮頸上皮細(xì)胞癌變和癌前病變的陽性檢出率，又可以避免漏診和資源的浪費(fèi)。尤其是在湖北恩施州地區(qū)經(jīng)濟(jì)發(fā)展相對落后的山區(qū)，使用細(xì)胞DNA定量分析檢測，不僅可以有效地解決經(jīng)濟(jì)落后地區(qū)大規(guī)模婦女宮頸疾病的篩查，還可以有效地解決經(jīng)濟(jì)落后地區(qū)病理學(xué)專家人力資源不足和工作壓力相對過大的局面。該方法敏感性高、成本相對較低、是宮頸疾病篩查和診斷的有效方法。

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論著

The significance of the DNA quantitative analysis in screening of 2 638 cervical cancer patients

LIU Guosheng，WANG Xiaoliang，ZHENG Jianqiong，ZENG Shoukui，ZHOU Wei
（Laboratory Medicine，Affiliated Hospital of Hubei University for Nationalities，Enshi，Hubei，China，445000）

［ABSTRACT］Objective To screen for the incidence of cervical lesions in women in Enshi by DNA quantitative cytology, and to investigateits effects in screening and preventing of cervical lesions. Methods DNA quantitative cytology and pathology were used in the medical examination of women who volunteered in the census of cervical disease in Affiliated Hospital of Hubei University for Nationalities from December, 2013 to November, 2014. Results A total of 131 cases of heteroploid cell, aneuploid peaks and abnormal proliferation were found, with an incidence of 4.97% in 2 638 cases. 45 cases of cervical intraepithelial neoplasias (CIN) were diagnosed by DNA quantitative cytology, with the positive prevalence rate of 34.35%. Conclusion DNA quantitative cytology is an effective way to detect CIN betimes, and cervical cancer and precancerous lesions screening may improve the detection rate of cervical lesions.

［KEY WORDS］DNA quantitative cytology；Screening；Cervical lesions

基金項(xiàng)目：湖北省恩施州農(nóng)業(yè)與社會發(fā)展科技指導(dǎo)性計(jì)劃項(xiàng)目（恩州科業(yè)［2013］9號）

通訊作者：周維，E?mail：zw200811@163.com