何遠景 廖雪青

【摘要】目的：建立HPLC法測定復方雙花顆粒中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的含量。方法：色譜柱為Welch -C18 柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-水（52∶48），流速為1.0ml/min，檢測波長： 穿心蓮內酯為225nm，脫水穿心蓮內酯為254nm。結果：穿心蓮內酯在2.55～51μg范圍內線性關系良好，r=0.9999；脫水穿心蓮內酯在2.662～53.24μg范圍內線性關系良好，r=0.9999。穿心蓮內酯平均回收率分別為97.9%，RSD=1.16%；脫水穿心蓮內酯平均回收率100.13%、RSD= 1.86%。結論：此法重復性好、靈敏度高、定量準確，可作為該復方雙花顆粒質量控制指標之一。

【關鍵詞】復方雙花顆粒；穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯；HPLC

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）09-0030-02

復方雙花顆粒主要由金銀花，板藍根，連翹和穿心蓮四味藥組成，具有清熱解毒，利咽消腫的功效。其中，穿心蓮具有清熱解毒、涼血、消腫功效[1]，主要有效成分為穿心蓮內酯、脫水穿心蓮內酯等二萜內酯類成分。2010年版《中國藥典》一部“穿心蓮”藥材以穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的總量作為質量控制指標。研究復方雙花顆粒中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯兩者總含量的檢測方法，為其質量控制提供實驗基礎。

1儀器與材料

1.1儀器島津 LC-2010CHT高效液相色譜儀（SPD-M20A檢測器，LC-Solution色譜工作站）；Waters 2695型高效液相色譜儀（Waters 2487檢測器，Waters -Solution色譜工作站）；BSA224S型電子分析天平；Sartorius CPA225D電子分析天平；數顯恒溫水浴鍋。

1.2材料穿心蓮內酯（批號：110854-200306）、脫水穿心蓮內酯（批號：110797-200307）購于中國藥品生物制品檢定研究院；復方雙花顆粒 （批號：141201、141202、111102、111101）。

甲醇為色譜純（美國TEDIA公司）；水為超純水；其他所用試劑均為分析純。

2方法和結果

2.1色譜條件色譜柱：Welch-C18柱（250×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-水（52∶48）；流速：1.0ml/min，檢測波長[2]： 穿心蓮內酯為225nm，脫水穿心蓮內酯為254nm；柱溫：25℃；進樣量：20μl。理論塔板數按穿心蓮內酯峰計不低于3000，脫水穿心蓮內酯峰計不低于2500。

2.2供試品溶液的制備取裝量差異下本品研細，取約1.0g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加甲醇25ml，稱定重量，90℃水浴加熱回流30min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10ml，加于中性氧化鋁柱（200～300目，5g，內徑為1.5cm）上，用甲醇30ml洗脫，收集洗脫液，置于50ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3線性關系考察精密稱取穿心蓮內酯對照品適量加甲醇超聲溶解，制成每1ml含2.55、5.1、10.2、12.75、25.5、51μg的系列標準溶液；另精密稱取脫水穿心蓮內酯對照品適量加甲醇超聲溶解，制成每1ml含2.66、5.32、10.64、13.31、26.62、53.24μg的系列標準溶液。分別精密吸取上述系列標準溶液20μl，注入液相色譜儀，以對照品的濃度為橫坐標，測得的峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得穿心蓮內酯回歸方程：Y=43662X+1753.3，r=0.9999，線性范圍為2.55～51μg；脫水穿心蓮內酯回歸方程：Y=28283X-2757.8，r=0.9999，線性范圍為2.66～53.24μg。

2.4精密度試驗精密吸取穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯對照品溶液進樣6次，進樣20μl，測定穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯峰面積，計算其RSD值，分別為0.2%、0.3%，表明儀器精密度良好。

2.5重復性試驗取批號為141201供試品6份，平行制成供試品溶液，測得穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯總含量為1.41 mg/g，RSD為1.50%，表明本方法重復性良好。

2.6回收率試驗取同一批已知含量（批號：141201，穿心蓮內酯含量為0.959 mg/g，脫水穿心蓮內酯含量為0.454 mg/g）樣品粉末0.5g，平行6份，分別精密加入穿心蓮內酯（0.0204mg/g）和脫水穿心蓮內酯（0.0106mg/g）混合對照品溶液25ml，同法制成加樣供試品溶液，測定并計算，穿心蓮內酯平均回收率為97.9%，RSD為 1.16%；脫水穿心蓮內酯平均回收率100.13%、RSD為 1.86%，表明回收率試驗良好。

2.7專屬性取處方中穿心蓮以外的藥材，按處方工藝，制得陰性對照溶液。按“2.1”項下色譜條件測定，結果未見陰性對照溶液對試驗有干擾。

2.8穩定性取同一份供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8、10h進樣測定并記錄其峰面積，結果不同時間點以穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的峰面積總和計，其RSD值為0.32%，表明供試品溶液在室溫放置10h內具有比較好的穩定性。

2.9耐用性分別比較了不同儀器（島津LC-2010CHT 和Waters2695高效液相色譜儀）和不同柱子（A：Welch Ultimate AHP-C18；B：Phenomenex-C18），結果均無統計學差異。

2.10樣品測定精密稱取4批樣品，每批樣品平行制備供試品溶液2份，進行測定，按外標法計算穿心蓮內酯（C20H30O5）和脫水穿心蓮內酯（C20H28O4）總含量，結果四批樣品含量分別為8.53、8.57、4.97、5.05 mg/袋，平均值6.78 mg/袋。

3討論

3.1目前關于復方雙花顆粒的報道不多，且多數為金銀花中綠原酸的定量分析。因此，實驗選取了處方中穿心蓮進行定量分析研究。

3.2樣品處理方法的確定復方雙花顆粒樣品甲醇提取后色譜峰雜質干擾嚴重，為進一步純化，使用中性氧化鋁柱進行處理。結果表明，過中性氧化鋁柱后，穿心蓮內酯峰附近雜質峰明顯減少，分離度更好，脫水穿心蓮內酯峰對稱性更好。

3.3使用中性氧化鋁柱柱處理前，先將柱內的中性氧化鋁填充嚴實。洗脫液加入柱內要使用玻棒引流，速度要慢，以免柱內產生漩渦，影響洗脫劑的洗脫能力。

3.4穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯為結構相近的酯類成分，二者之間容易相互轉化，因此選用雙波長測定，按二者的總含量計。4批樣品以穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯含量總和計，含量在4.97～8.57mg范圍內，按最低含量4.97mg/袋的80%定標準限度為4.0mg/袋。綜上所述，擬規定含量限度為：每袋含穿心蓮以穿心蓮內酯（C20H30O4）和脫水穿心蓮內酯（C20H28O4）的總量計，不得少于4.0mg。

參考文獻

[1]中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志（65卷）[M].北京：科學出版社，1982： 74-75.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010：251-252.

（收稿日期：2016.03.08）