俞偉 楊海玲 周海濱 周燕萍

【摘要】目的：優(yōu)選八珍顆粒的醇沉工藝。方法：以干浸膏得率及白芍中的芍藥苷含量為考察指標，采用正交設(shè)計，考察藥液含醇量、靜置時間、相對密度等對醇沉效果的影響。結(jié)果：最佳醇沉工藝為藥液濃縮至相對密度為1.15，加95%乙醇至含醇量為55%，靜置48h。結(jié)論：優(yōu)化的醇沉工藝簡單易行，適用于實際生產(chǎn)。

【關(guān)鍵詞】八珍顆粒；正交試驗；醇沉工藝；芍藥苷

【中圖分類號】【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）09-0028-02

八珍顆粒由黨參、白芍等八味中藥精制而成，具體補氣益血的功效。臨床常用于氣血兩虧，面色萎黃，食欲不振，四肢乏力，月經(jīng)過多。根據(jù)制劑藥物組成的成分性質(zhì)，對當歸、川芎和白術(shù)用乙醇提取，醇提后藥渣與其他五味藥材用水提取。但在水提過程中，多糖、脂溶性色素等會隨有效成分一起溶出，為保證制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性，需要進行醇沉凈化除雜工藝。試驗以干浸膏得率及白芍中的芍藥苷含量為考察指標，采用正交試驗選擇最佳醇沉工藝。

1儀器與試藥

1.1儀器Agilent HP1100型高效液相色譜儀（四元泵VWD檢測器，真空脫氣機）；梅特勒AE240型電子分析天平；UV-2600型紫外分光光度儀。

1.2材料芍藥苷對照品（批號：110736-200321，中國藥品生物制品檢定所）；八珍顆粒浸膏由寧波立華制藥有限公司制備。乙腈為色譜純，水為重蒸水，其余均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1正交試驗設(shè)計根據(jù)處方中有效成分的性質(zhì)，以醇沉后濾液的干浸膏得率與芍藥苷含量為考察指標，以藥液含醇量、靜置時間、相對密度等3 個因素為主要影響因素，每個因素選擇了3 個水平，按照L9（34） 正交試驗設(shè)計，對處方進行醇沉除雜。因素水平見表1。

2.2試驗樣品的制備及干浸膏收率計算按處方配比稱取炮制合格的黨參、白芍等八味藥材，將處方中的當歸、川芎和白術(shù)先后用95%、50%乙醇分別加熱回流提取2h，濾過，濾液合并，回收乙醇，濾過，濾液備用；藥渣與其余黨參等五味加水煎煮二次，每次1.5h，濾過，濾液合并，加入上述備用濾液， 合并濃縮至一定相對密度，按L9（34） 正交表的條件進行醇沉，醇液濃縮回收乙醇，真空干燥制成干浸膏，稱重。計算干浸膏得率。

2.3芍藥苷的含量測定

2.3.1色譜條件色譜柱：伊力特C18柱（250×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺（13：87：0.04）；流速：1.0ml/min；檢測波長：230nm。柱溫：38℃；進樣量：10μl；

2.3.2對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。

2.3.3供試品溶液的制備取干浸膏供試品粉末約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理（功率120W，頻率59kHz）30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4陰性對照品溶液的制備依據(jù)處方中的比例，按供試品溶液的制備方法制備八珍顆粒缺少白芍的陰性對照品溶液。

2.3.5線性關(guān)系的考察依法制備對照品溶液，精密量取對照品溶液（40.53μg/ml）0.5、1、2、5、10μl，計算進樣量分別為：0.02、0.041、0.081、0.203、0.405μg，精密量取對照品溶液（0.1351mg/ml）5、10、15μl， 計算進樣量分別為：0.676、1.351、2.027μg，分別注入高效液相色譜儀，測定芍藥苷的峰面積，以峰面積為縱坐標（Y），以進樣量為橫坐標（X），繪制標準曲線，計算回歸方程：Y=952.48X+36.033，R2=0.9971（n=8），結(jié)果表明：進樣量在0.023～2.027μg范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2.3.6含量測定精密吸取各供試品溶液10μl注入高效液相色譜儀，按上述色譜條件測定，按外標法以峰面積計算芍藥苷含量。

2.4試驗方案及結(jié)果分析按照L9（34）正交表安排試驗，試驗方案、結(jié)果及方差分析見表2、3。

從表2可知，對干浸膏得率影響因素大小依次為C>A>B，醇沉目的是除雜，以干浸膏得率小為佳，所以最佳醇沉工藝為A2B2C3；而對芍藥苷含量的影響因素大小依次為C>A>B。由表3可知，A、C因素對干浸膏得率有顯著性影響，B因素則無顯著影響；而因素C對芍藥苷含量有顯著影響，因素A、B則無顯著影響。考慮到節(jié)約的因素和生產(chǎn)實際成本，因此工藝條件選擇A2B2C3，即藥液含醇量55%，相對密度1.15，靜置時間4h。

2.5驗證實驗依處方比例稱取藥材3份，提取，濃縮，進行醇沉驗證，用上述方法測定干浸膏得率和芍藥苷的含量，結(jié)果見表4。由結(jié)果可知浸膏得率，芍藥苷含量平均值分別為18.33% （n=3），3.59‰（n=3） ，證明該工藝穩(wěn)定可行。

3討論

3.1八珍顆粒是中藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，除白芍、甘草外，其他藥材尚未建立主要成分的含量；雖甘草中甘草酸含量較高，但組方后，甘草起到調(diào)和諸藥作用，配伍合煎后使甘草酸含量不穩(wěn)定且大幅下降。因此研究選白芍中芍藥苷含量作為指標成分，再配合干浸膏得率篩選八珍顆粒浸膏的最佳醇沉工藝。

3.2色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗參照2010年版《中國藥典》一部八珍顆粒項下芍藥苷含測項下及文獻資料，選用色譜柱：伊力特C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。通過紫外掃描確定檢測波長為230 nm；柱溫為38℃；選用乙腈-0.1%磷酸溶液-三乙胺（13∶87∶0.04）為流動相。經(jīng)試驗，樣品有與對照品芍藥苷相同保留時間的對應(yīng)峰，并分離度良好，陰性對照及試劑無干擾，表明以上色譜條件可行。

3.3本試驗以白芍中的芍藥苷和干浸膏得率為指標，考察八珍顆粒的醇沉工藝。對正交試驗進行方差分析，對因素影響大小的顯著性進行了檢驗，3個因素中，藥液含醇量和靜置時間對干浸膏得率影響均具有顯著性意義，相對密度沒有顯著性意義；靜置時間對芍藥苷的含量影響具有顯著性意義，而藥液含醇量和相對密度沒有顯著性意義。綜合考慮，以干浸膏收率為重點，結(jié)合實際生產(chǎn)的操作性，確定將藥液濃縮至相對密度為1.15，加95%乙醇至含醇量為55%，靜置48h為最佳醇沉工藝。醇沉工藝的確定，保留了有效成分，降低了浸膏中的總固體量，減少了浸膏量，有效解決八珍顆粒的成型難和穩(wěn)定性問題，提高了制劑品質(zhì)。

參考文獻

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（收稿日期：2016.03.03）