李齊激 南瑩 楊艷 王道平 楊小生

【摘要】目的：建立藥食兩用植物刺梨中刺梨苷的含量測定方法。方法：刺梨以75%乙醇水浴回流提取，采用Pntulips TM BP-C18（4.6 mm×250mm，5 μm）色譜柱，乙腈-0.05 %三氟醋酸溶液（27∶73）為流動相，流速1 ml/min，檢測波長208 nm，柱溫30℃，進樣量為10μl。結果：刺梨苷在0.23～2.3μg范圍內具有良好的線性關系，平均回收率為97.82 %，RSD為2.44 %（n=6）。結論：利用HPLC建立了藥食兩用植物刺梨中刺梨苷的含量測定方法，經方法學驗證，該法簡便、準確、穩定，為藥食兩用植物刺梨的合理開發利用提供質量評價依據。

【關鍵詞】刺梨；刺梨苷；HPLC

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2016）09-0022-03

[JP+1]刺梨為薔薇科植物繅絲花Rose roxburghii Tratt的果實，廣泛分布于暖溫帶及亞熱帶地區，在我國主要分布在四川、云南和貴州三省，其中又以貴州野生與栽培資源最為豐富[1-2]。刺梨具有消食健脾，收斂止瀉的功效，主要用于治療積食腹脹，泄瀉等疾病[3]。研究表明，三萜和黃酮類成分為刺梨的主要活性物質，并在增強免疫力、延緩衰老、抗動脈粥樣硬化、健胃消食等方面均具有較好的活性[4-6]。作為藥食兩用植物，1994版、2003版《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》和2004年衛生部食品新資源品種17號公告先后收錄該品種，目前在食品、保健用品、醫藥領域廣泛應用。但其質量控制方法仍處于空白，尤其是在醫藥、保健用品應用領域。課題組結合前期研究發現的活性三萜類成分[7]，選擇其中較具有代表性的活性三萜—刺梨苷進行含量測定，旨在建立藥食兩用植物刺梨的質量控制方法，為該植物藥材及其產品開發提供品質評價與檢測方法參考。[JP]

1儀器與材料

1.1儀器Agilent 1100高效液相色譜（含柱溫箱、可見-紫外檢測器、四元泵、在線脫氣機和自動進樣器，美國安捷倫科技有限公司）；電子天平（Mettler Toledo，26115102-0）；旋轉蒸發儀（瑞士BUCHI公司）；ZK-82A 型真空干燥箱（天津市泰斯特儀器有限公司）。

1.2材料刺梨苷對照品為實驗室自制，經NMR、MS等光譜數據確定其化學結構，通過HPLC純度檢測為98.91%；乙腈為色譜純（天津市科密歐化學試劑有限公司），三氟醋酸為分析純（天津市光復精細化工研究所），水為超純水，其余試劑均為分析純。

1.3藥材刺梨藥材于2014年8月采自貴州龍里縣，經貴州大學安華明教授教授鑒定為薔薇科植物繅絲花Rosa roxburghii Tratt的果實（刺梨），標本憑證（201408003）保存于貴州省中國科學院天然產物化學重點實驗室。

2方法與結果

2.1色譜條件與系統適用性試驗色譜柱：Pntulips TM BP-C18（4.6 mm×250mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.05 %三氟醋酸溶液（27∶[KG-*3/5]73）；柱溫：25 ℃；流速：1 ml/min；檢測波長：208 nm；進樣量：10μl。在此色譜條件下，理論板數按刺梨苷峰計算≥3 000，與其他峰分離度>1.5。色譜圖詳見圖1。

2.2對照品溶液的配置取刺梨苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 ml含0.23 mg的溶液，即得。

2.3供試品溶液的配置取刺梨粗粉（過三號篩）約5 g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，加75 %乙醇100 ml，水浴回流提取3次，每次2 h，濾過，合并濾液，減壓濃縮近干，加適量蒸餾水溶解，再用乙酸乙酯萃取至無色，合并乙酸乙酯萃取層，減壓濃縮近干，立即加甲醇使溶解，轉移至至100 ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4線性關系考察精密吸取2.2項下對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 μl，分別注入高效液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X，mg）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程為Y=270.71X+9.7049，R2=0.9998。結果表明，刺梨苷在0.23～2.3μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

2.5[JP+1]精密度考察精密吸取“2.2”項下對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件重復進樣6次，記錄峰面積。結果峰面積RSD為1.38 % （n=6），表明儀器精密度良好。[JP]

2.6重復性試驗稱取同一批次（20150801）刺梨樣品6份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別進樣，記錄峰面積。結果峰面積RSD為1.91 %（n=6），表明該方法重復性良好。

2.7穩定性考察取同一批次（20150801）刺梨供試品溶液，分別于0、2、4、8、10、12 h時按“2.1”項下色譜條件分別進樣測定。結果峰面積RSD為2.61 %（n=6），表明供試品在12 h內穩定性良好。

2.8加樣回收率試驗稱取已知含量的刺梨樣品（20150801）6份，每份約2.5 g，分別加入刺梨苷4.4 mg，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件分別進樣測定，計算回收率，測定結果見表1。

2.9樣品測定取不同批次刺梨樣品約5g，按“2.3”項下方法平行制備供試品溶液各2份，再按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，計算樣品中刺梨苷的含量，結果3批樣品（20150801、20150802、2015080）中刺梨苷的含量分別為0.176、0.180、0.183 mg/g。

3討論

3.1檢測指標的選擇刺梨總三萜為該植物的主要活性成分，在惡性腫瘤、糖尿病方面效果較好，具有較高的應用價值和良好的應用前景[7-9]。試驗綜合考察了其中3種活

性三萜刺梨苷、野薔薇苷、arjunetin的色譜條件、含量高低和代表性，最終選擇了分離度較好，含量較高，且尤具代表性的刺梨苷作為質量控制的檢測指標。

3.2提取條件的考察通過比較超聲、索氏回流、冷浸及水浴回流提取，結果刺梨苷含量高低依次為水浴回流>索氏回流>冷浸>超聲。其次，還比較了甲醇、乙醇、水作為溶劑的提取效果，結果三者提取含量變化較小，水提取含量稍高但雜質峰較多，且分離度較差，考慮到經濟、環保，確定選擇以乙醇為溶劑，最終通過單因素考察最終確定以75%乙醇進行提取。最后，還比較了乙酸乙酯萃取次數對含量的影響，發現以水-乙酸乙酯體積比為1∶[KG-*3/5]2時重復萃取3次可萃取完全。

參考文獻

[1]中國植物志編輯委員會.中國植物志（37卷）[M].北京：科學出版社，1998：452.

[2]貴州植物志編輯委員會.貴州植物志（7卷）[M].貴陽：貴州人民出版社，1982：223.

[3]貴州省藥品監督管理局.貴州省中藥材、民族藥材質量標準[M].貴陽：貴州科學技術出版社，2003：230

[4]戴支凱，余麗梅，楊小生，等.刺梨三萜化合物CL1體外抗人子宮內膜腺癌作用[J].時珍國醫國藥，2011，22（7）：1656-1658.

[5]秦晶晶，李齊激，薛琰，等.刺梨總三萜提取方法及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[J].食品工業科技，2014，10（33）：186-189.

[6]趙轉地，張愛華，洪峰.刺梨及其產品的營養及保健藥用價值研究進展[J].環境與職業醫學，2007，24（1）：82-84.

[7]楊小生，馬琳，梁冰，等.刺梨果活性提取物及其制備方法、檢測方法和應用[P].中國專利：ZL201110080922，2013-03-20.

[8]南瑩，李齊激，馬琳，等.紫外分光光度法測定刺梨總三萜與總黃酮含量[J].遵義醫學院學報，2012，35（6）：473-476.

[9]秦晶晶，李齊激，薛琰，等.刺梨總三萜提取方法及其α-葡萄糖苷酶抑制活性研究[J].食品工業科技，2014，10（33）：186-189.

（收稿日期：2016.03.21）