劉珊珊 向彬 郭營(yíng)營(yíng) 蔣石 淤澤溥 李秀芳

【摘要】目的：觀察天麻成分對(duì)羥基苯甲醛的抗炎作用，并探討其作用機(jī)制。方法：采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹方法及棉球植入致小鼠肉芽腫模型考察對(duì)羥基苯甲醛的抗炎作用，采用足跖注射花生四烯酸或角叉菜膠致大鼠足爪腫脹模型探討對(duì)羥基苯甲醛的抗炎作用特點(diǎn)。結(jié)果：對(duì)羥基苯甲醛對(duì)二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓炎癥反應(yīng)及棉球植入導(dǎo)致的小鼠肉芽腫形成具有顯著的抑制作用，對(duì)足跖注射花生四烯酸所致大鼠足爪腫脹模型有抑制作用，平均抑制率可達(dá)到31.7%，但對(duì)注射角叉菜膠引起的大鼠足爪腫脹無(wú)明顯作用。結(jié)論：天麻酚性成分對(duì)羥基苯甲醛具有顯著的抗炎作用，對(duì)炎癥急性時(shí)相及慢性增殖時(shí)相均有抑制作用，其抗炎機(jī)制與抑制花生四烯酸代謝的5-脂氧合酶途徑有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】天麻；對(duì)羥基苯甲醛；抗炎

【中圖分類號(hào)】R285.5【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2016）09-0016-03

天麻（Gastrodia elata Blume.）是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥，具有平肝熄風(fēng)的功效，《本草匯言》中記載“天麻主頭風(fēng)，頭痛……一切中風(fēng)，風(fēng)痰”，現(xiàn)代臨床將天麻及其復(fù)方制劑用于高血壓[1-2]、缺血性腦血管疾病[3]的治療，取得了較好的療效。實(shí)驗(yàn)研究表明，天麻及其復(fù)方制劑對(duì)高血壓或缺血性腦血管病的作用機(jī)制涉及了松弛血管平滑肌、抗腦缺血/再灌注損傷等。對(duì)羥基苯甲醛（p- Hydroxybenzaldehyde，PHBA）是天麻腦保護(hù)作用的重要活性成分之一，前期課題組已證實(shí)，PHBA具有抗腦血栓形成及抗血小板聚集[4]等作用。在課題組的進(jìn)一步研究中發(fā)現(xiàn)，PHBA還具有一定的抗炎活性，本文將對(duì)其抗炎作用的研究結(jié)果報(bào)道如下。

1材料

1.1藥物對(duì)羥基苯甲醛（PHBA，L760N29），純度>99%，購(gòu)自北京百靈威科技有限公司；角叉菜膠（117H0151）、阿司匹林（129K5400V）購(gòu)自美國(guó)sigma公司；花生四烯酸（Arachidonic Acid，AA，A0781），購(gòu)自日本TCI公司；地塞米松（SA0419GA13）購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，其它化學(xué)試劑購(gòu)自天津化學(xué)試劑有限公司。

1.2動(dòng)物昆明種小鼠，清潔級(jí)，雌雄各半，體重18～22g，批號(hào)：Dossy-2011-03；雄性（Sprague Dawley， SD）大鼠，清潔級(jí)，體重250～300g，生產(chǎn)批號(hào)：Dossy-2011-01，所有動(dòng)物均由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究院動(dòng)物研究所提供，飼養(yǎng)條件：室溫為（22±2）℃，相對(duì)濕度60%～70%。

1.3細(xì)胞BV-2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞株，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏中心昆明細(xì)胞庫(kù)。細(xì)胞培養(yǎng)于10% 胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，于37℃、5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞單層生長(zhǎng)達(dá)到80%左右時(shí)進(jìn)行傳代。

1.4儀器酶標(biāo)儀（Infinite M200 PRO），瑞士Tecan公司；足趾容積測(cè)量?jī)x（YLS-7A），山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站；電子分析天平（AB204-S），瑞士Mettler toledo公司；CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱，美國(guó)Thermo scientific公司；生物安全柜（BSC-1300II A2），蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；倒置相差顯微鏡（Ti-S），日本尼康。

2方法

2.1天麻成分PHBA對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響取昆明種小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為模型組（1%吐溫-80灌胃），阿司匹林組， PHBA 高、低劑量組，灌胃給藥三天，末次給藥1h后，在小鼠右耳耳廓涂上二甲苯50μl致炎，40min后脫頸椎處死，剪下雙耳，用直徑為8mm的不銹鋼沖子沖下左、右兩耳耳片，分析天平上稱重。腫脹率%=（右耳重量-左耳重量）/右耳重量×100%，腫脹抑制率%=（模型組平均腫脹度-給藥組腫脹度）/模型組平均腫脹度×100%，以腫脹率及腫脹抑制率作為反映藥物的抗炎作用強(qiáng)度的指標(biāo)。

2.2天麻成分PHBA對(duì)棉球植入導(dǎo)致小鼠肉芽腫形成的影響取昆明種小鼠40只，雌雄各半，所有動(dòng)物均以0.3%戊巴比妥鈉30mg·kg-1腹腔注射麻醉，在無(wú)菌條件下，剪開(kāi)腹部皮膚，將（10±2）mg的無(wú)菌棉球植入小鼠右側(cè)腹股溝，縫合，傷口涂抹青霉素，于手術(shù)后第2天，小鼠隨機(jī)分4組，每組10只，分別為溶媒組（1%吐溫-80），陽(yáng)性對(duì)照組（地塞米松），PHBA高、低劑量組，每組動(dòng)物按分組灌胃給予相應(yīng)藥物，1次·d-1，連續(xù)7次，末次給藥后1h，小鼠脫頸椎處死，取出棉球，稱濕重，置于60℃烘箱12h，稱干重，濕重-干重即得含水量，干重-棉球重即得肉芽干重。

2.3天麻成分PHBA對(duì)不同炎癥誘導(dǎo)劑致大鼠足趾腫脹模型的影響取SD大鼠64只，雌雄各半，隨機(jī)分為兩個(gè)大組，即注射AA組和注射角叉菜膠組，每個(gè)大組又分為4個(gè)小組，每小組8只，分別為模型組（1%吐溫-80灌胃），地塞米松組，PHBA高、低劑量組，灌胃給藥2h后大鼠足趾分別注射1mg·ml-1 AA或1%角叉菜膠0.1ml致炎，炎癥反應(yīng)的強(qiáng)度以大鼠足趾腫脹體積作為評(píng)估指標(biāo)，大鼠足趾腫脹體積以左后爪體積減右后爪體積計(jì)算。注射后1h、2h、3h、4h各時(shí)間點(diǎn)將大鼠鼠爪浸入足趾溶劑測(cè)量?jī)x的液體中，保持每次浸入的深度一致。根據(jù)液平面高度的增加值，溶劑測(cè)量?jī)x將其自動(dòng)轉(zhuǎn)化為體積值。不同藥物對(duì)鼠爪水腫的抑制率按下面公式計(jì)算。

抑制率%=模型組鼠爪水腫體積-給藥組鼠爪水腫體積模型組鼠爪水腫體積×100%

3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

研究數(shù)據(jù)均以（x±s）表示，采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用單因素方差分析法。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.1天麻成分PHBA對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響結(jié)果顯示，PHBA高劑量（30mg·kg-1）能顯著的抑制二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓炎癥反應(yīng)，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見(jiàn)表1。

4.2天麻成分PHBA對(duì)棉球植入導(dǎo)致小鼠肉芽腫形成的影響結(jié)果顯示，天麻成分PHBA可顯著抑制棉球植入引起的小鼠肉芽增殖，并減少肉芽組織水分含量，詳見(jiàn)表2。

4.3天麻成分PHBA對(duì)不同炎癥誘導(dǎo)劑致大鼠足趾腫脹模型的影響

4.3.1大鼠足趾注射AA或角叉菜膠致足趾腫脹模型的復(fù)制結(jié)果顯示，大鼠足趾注射AA可誘導(dǎo)強(qiáng)烈持續(xù)的鼠爪水腫，注射后大鼠左后爪比右后爪明顯腫脹，鼠爪皮膚發(fā)紫；大鼠皮下注射角叉菜膠也可導(dǎo)致鼠爪明顯腫脹，左后爪比右后爪顯著腫脹，皮膚顏色基本正常，詳見(jiàn)表3。

4.3.2天麻成分PHBA對(duì)不同炎癥誘導(dǎo)劑致大鼠足趾腫脹模型的影響結(jié)果顯示，大鼠灌胃給予PHBA后2h，足趾注射角叉菜膠，在觀察的4h內(nèi)，PHBA對(duì)大鼠足趾腫脹無(wú)明顯抑制作用；而灌胃給予PHBA后2h，足趾注射AA，PHBA高劑量（20mg/kg）在1h及2h時(shí)可顯著減輕大鼠足趾水腫，與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，詳見(jiàn)表4、5。

5討論

大量研究證據(jù)表明，腦缺血后的神經(jīng)炎癥反應(yīng)是造成繼發(fā)性腦神經(jīng)損傷的重要原因之一[5]，減輕炎癥反應(yīng)可能是擴(kuò)大腦缺血治療時(shí)間窗的有效途徑[6]。有文獻(xiàn)報(bào)道，天麻[7]及其有效成分對(duì)羥基苯甲醇具有減輕炎癥反應(yīng)作用，

而天麻的另一重要活性成分對(duì)羥基苯甲醛（PHBA）的抗炎作用報(bào)道較少。本研究的結(jié)果顯示，PHBA對(duì)炎癥急性期的水腫滲出及慢性期的肉芽組織增殖均有明顯的抑制作用，為初步探討其抗炎作用的途徑，我們復(fù)制了角叉菜膠和花生四烯酸（AA）這兩種炎癥誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)的大鼠足趾腫脹模型，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，這兩種不同的誘導(dǎo)劑對(duì)AA代謝的環(huán)氧合酶（COX）途徑和5-脂氧合酶（5-LO）途徑具有相對(duì)的選擇性，大鼠足趾皮下注射AA主要是通過(guò)5-LO代謝途徑生成LTS導(dǎo)致鼠爪水腫，因此，該動(dòng)物模型對(duì)5-LO的抑制劑具有相對(duì)的選擇性[8]，而皮下注射角叉菜膠則主要是引起COX途徑的激活，局部皮膚中產(chǎn)生大量的前列腺素類物質(zhì)，并與血管活性物質(zhì)和激肽類一起誘導(dǎo)鼠爪水腫，該動(dòng)物模型對(duì)COX的抑制劑具有相對(duì)的選擇性[9]。PHBA對(duì)AA誘導(dǎo)的大鼠足趾腫脹具有顯著的抑制作用，而對(duì)角叉菜膠誘導(dǎo)的足趾腫脹作用不明顯，提示PHBA可能是通過(guò)抑制AA代謝的5-LO途徑發(fā)揮抗炎作用。深入的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2016.03.30）