光動力療法聯合紫杉醇對結直腸癌患者淋巴細胞轉移增殖的影響

何耀明

光動力療法聯合紫杉醇對結直腸癌患者淋巴細胞轉移增殖的影響

何耀明

江門市中心醫院胃腸外科，廣東 江門 529030

[摘要]目的探討光動力療法聯合紫杉醇對結直腸癌患者淋巴細胞轉移增殖的影響。方法連續選取我院2013年1月至2014年1月收治的結直腸癌患者40例，隨機分為對照組和試驗組，每組20例。對照組給予單純的紫杉醇化療，根據癌癥的分級、分期情況合理選擇化療療程；試驗組聯合應用光動力療法和紫杉醇。對比分析兩組患者的T淋巴細胞轉移率、淋巴細胞凋亡率、IFN-γ增殖水平以及淋巴細胞IL-2表達水平和臨床有效率的差異性，同時對兩組治療前后的E-cadherin病理表達情況進行分析。結果試驗組患者的T淋巴細胞轉移率高于對照組，淋巴細胞凋亡率低于對照組，IFN-γ和IL-2的表達水平高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。試驗組患者的總有效率高于對照組，生存時間較對照組延長，住院時間較對照組縮短，差異均有統計學意義(P<0.05)。治療前，試驗組與對照組的E-cadherin陽性表達率分別為10.0%、15.0%，治療后分別為25.0%和60.0%，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論光動力療法聯合紫杉醇治療結直腸癌能較好地抑制患者淋巴細胞的轉移和增殖情況，增強E-cadherin表達，提高有效率。

[關鍵詞]光動力療法；紫杉醇；結直腸癌；淋巴細胞；轉移；增殖

0引言

放化療是目前臨床上用于治療晚期惡性腫瘤的主要手段，化療能很好地殺傷或者抑制結直腸癌腫瘤細胞的擴散和轉移，對預防術后并發癥或者復發有很好的效果[1-3]。同時，相關研究表明，影響結直腸癌預后的主要因素是腫瘤的復發和轉移，發生轉移的結直腸癌患者的近10年預后總生存率增加尚不足2年。在腫瘤發生轉移的機制中，E-鈣粘附分子(E-cadherin)有抑制腫瘤浸潤轉移的功能，其黏附特性的改變也可能導致細胞骨架重排，從而促進腫瘤的浸潤轉移[4-5]。光動力療法(Photodynamic thempy,PDT) 基本原理是光動力激光的光化學原理，通過氧化作用來攻擊結腸癌腫瘤細胞結構，從而使結腸癌腫瘤細胞死亡[6-7]。本文為了探討光動力療效聯合紫杉醇對結直腸癌患者淋巴細胞轉移增殖的影響，選取2013年1月至2014年1月于我院就診的結直腸癌患者共40例作為研究對象，并取得較好的臨床效果。現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料連續選取我院2013年1月至2014年1月收治的結直腸癌患者共40例，排除精神疾病、心腦血管疾病、合并其他嚴重消化道疾病等患者。所有患者經過腸鏡與病理診斷為結直腸癌。將患者隨機分為對照組和試驗組，每組20例。對照組：男11例，女9例，年齡56～70歲，平均年齡(66.5±7.3)歲，病程1～12年，平均病程(8.0±2.0)年，結腸癌9例，直腸癌11例，Dukes分期C期13例、D期7例；試驗組：男10例，女10例，年齡58～71歲，平均年齡(68.0±6.4)歲，病程6個月～10年，平均病程(7.6±2.5)年，結腸癌12例，直腸癌8例，Dukes分期C期10例、D期10例。兩組患者的性別、年齡、平均病程、癌癥類型、Dukes分期比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。全部病例術前均未經化療、放療、生物治療，無長期服用非甾體抗炎藥、皮質激素藥物史。

1.2治療方法對照組患者給予單純紫杉醇化療，根據疾病分級分期情況，Ⅰ級患者每周化療1次，Ⅱ級每周2次，Ⅲ級每周3次。試驗組患者聯合應用光動力療法和紫杉醇，使用Photoffin光敏劑時無需做過敏試驗，靜脈滴注Photoffin光敏劑時，按照Photoffin光敏劑2 mg/kg濃度對50 g/L葡萄糖注射液100 mL進行配置。激光治療機內設的各種類型癌照射劑量大小應根據患者腔內腫瘤長度的不同而定，每次治療照射1～3段，照射時間約12 min，能量密度為200 J/cm。行激光照射治療每段之間應該銜接好，而且須超過腫瘤邊界至少0.5 cm，這樣才能使光照范圍充分覆蓋腫瘤區域。

1.3觀察指標淋巴細胞檢測：在患者接受上述治療后的第3天，采集患者淋巴細胞作為研究樣本，用PBS液洗滌2次，再加入PBS液制成單細胞懸濁液，調整細胞濃度105～106/mL。取樣品懸液500 μL，在低溫條件下加入試劑FITC，均勻攪拌，再加入PI 5 μL，低溫條件下反應0.5 h。應用活淋巴細胞為陰性對照，調整0坐標點，將誤差控制在2%以內，上機檢測細胞轉移增殖情況。記錄兩組T淋巴細胞轉移率、淋巴細胞凋亡率、IFN-γ增殖水平及淋巴細胞IL-2表達水平。

療效判定：結腸癌分級采用世界通用的標準[4]，即完全效應(CR)：結腸癌腫瘤患者檢查時腫瘤應完全消失，在對組織進行病理活檢應為陰性，持續至少1個月；明顯效應(PR)：結腸癌腫瘤患者檢查時，腫瘤最大徑和其垂直徑或腫瘤高度的乘積至少縮小1/2，且持續1個月；稍有效應(MR)：結腸癌腫瘤患者檢查時腫瘤縮小不足1/2，并持續1個月；無效(NR)：結腸癌腫瘤患者檢查時腫瘤無變化或增大。

E-cadherin表達檢測：選擇福州邁新公司的鼠抗人E-cadherin單克隆抗體，治療前后采集所有患者結直腸癌組織，標本離體后置于4%福爾馬林中固定后進行石蠟包埋備用，采用MaxVision法免疫組織化學染色，以已知陽性切片作為陽性對照，陰性對照以PBS替代一抗。病理染色后由2位病理醫師分別雙盲閱片，每張切片按正常染色的百分率進行評定：0～50%為陰性(-)，51%～80%為陽性(+)，81%～100%為強陽性(++)，同時觀察E-cadherin蛋白的定位與分布情況。

2結果

2.1兩組患者淋巴細胞轉移和增殖情況比較試驗組患者的T淋巴細胞轉移率高于對照組，淋巴細胞凋亡率低于對照組，IFN-γ、IL-2的表達水平高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.2E-cadherin表達情況E-cadherin主要表達于正常黏膜上皮的細胞膜上，多呈強陽性表達；在結直腸癌組織中，其表達明顯下降。經過免疫組織化學染色分析，治療前，試驗組與對照組的E-cadherin陽性表達率分別為10.0%、15.0%，治療后分別為25.0%、60.0%，兩組比較差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1　兩組患者淋巴細胞轉移和增殖情況

表2　兩組患者E-cadherin陽性表達情況(例,%)

2.3兩組患者的療效比較試驗組的總有效率高于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。試驗組患者的生存時間較對照組延長，住院時間較對照組縮短，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3　兩組患者臨床效果比較(例)

3討論

結直腸癌是胃腸道中常見的惡性腫瘤之一。近年來我國結直腸癌的發病率及死亡率呈明顯上升趨勢。惡性腫瘤的侵襲轉移是其主要癥狀和致死原因。腫瘤浸潤包括粘附、溶解、移動3個步驟[8]，并且，其進展、侵襲與癌細胞運動性增加及肌動蛋白細胞骨架結構改變密不可分[9]。

紫杉醇是一種新型化療藥物，廣泛應用于結直腸癌、乳腺癌、卵巢癌及非小細胞肺癌等疾病的治療中，其對免疫細胞的影響是重要的研究方向。體外實驗發現，紫杉醇治療可明顯降低患者T淋巴細胞及體內IFN-γ的表達量，并且可以明顯降低正常人和腫瘤患者T細胞的殺傷活性，抑制患者淋巴細胞的轉移、增殖，促進其成熟、分化，其活化之后釋放出的大量細胞因子能促進患者體內CD8細胞及巨噬細胞的活化成長，增強癌癥患者體內CD8 T淋巴細胞和NK細胞的抗腫瘤活性[10]。CD16是NK細胞的表面標志物，是一種淋巴細胞表面具有低親和力的IgG Fe受體，當這種受體導入患者淋巴細胞的ADCC中產生作用時，可以直接殺死癌細胞。郭志琴等[11]報道，紫杉醇作為一種淋巴細胞抑制劑，對癌細胞患者化療后細胞轉移、增殖的控制效果更明顯。該研究表明，紫杉醇作用72 h的淋巴細胞、CD3、CD4、CD8等的相對含量沒有明顯變化，但NK細胞非常敏感，其中CD16的表達率明顯降低。相關實驗表明，紫杉醇作用淋巴細胞的微管系統和微管系統聚集成微管束，能降低淋巴細胞溶解靶細胞的動力學和淋巴細胞的再生能力[12]。

光動力療法的基本原理是光動力激光的光化學原理，采用特定波長的激光來激活腫瘤組織內滯留的光敏劑，使其與腫瘤組織內的氧發生作用，產生單態氧及一些活潑的自由基。通過氧化作用攻擊結腸癌腫瘤細胞結構而使其死亡。如今光動力療法在治療結直腸癌方面已取得較好的效果，已逐漸成為治療結直腸癌的常規手段之一。腫瘤光動力療法的體內外試驗、新型光敏劑的合成及其光動力療法治療腫瘤的作用機制等方面的研究快速進展，使得腫瘤光動力療法取得了較大的進步[13-14]。

E-cadherin是鈣依賴粘附素家族中的重要成員之一，廣泛分布于上皮細胞相連接的細胞膜上，是Wnt傳導通路上重要的組成部分，可以介導并維持上皮細胞之間的緊密連接及正常的細胞形態[15]。E-cadherin主要表達于正常黏膜上皮的細胞膜上，多呈強陽性表達；在結直腸癌組織中，其表達明顯下降。當腫瘤細胞E-cadherin發生基因突變、轉錄抑制時，其功能發生障礙，致腫瘤細胞浸潤性生長[16]。本研究中，治療前試驗組與對照組的E-cadherin陽性表達率分別為10.0%、15.0% (P>0.05)，治療后分別為25.0%、60.0% (P<0.05)，提示E-cadherin可能在腫瘤進展、轉移的發生中共同起作用，能有效反映疾病的預后狀況。

本研究觀察光動力療法和紫杉醇聯合應用對結直腸癌患者淋巴細胞轉移、增殖的影響，結果顯示，與單用紫杉醇組比較，聯合應用光動力療法和紫杉醇的患者，其T淋巴細胞轉移率較高，淋巴細胞凋亡率較低；IFN-γ、IL-2表達水平較高；總有效率較高；生存時間顯著延長，住院時間縮短。表明聯合應用光動力療法和紫杉醇可以更好地增強淋巴細胞的抗腫瘤特性，進而抑制腫瘤細胞的生長，促進其凋亡。

綜上所述，光動力化療和紫杉醇聯合應用于結直腸癌的治療，能抑制淋巴細胞的轉移、增殖，增強E-cadherin表達，值得在臨床推廣。

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Effect of photodynamic therapy combined with paclitaxel on the metastasis and proliferation of lymphocytes in patients with colorectal cancer

HE Yao-ming

(Department of Gastrointestinal Surgery,Jiangmen Central Hospital,Jiangmen 529030,China)

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effect of photodynamic therapy combined with paclitaxel on the metastasis and proliferation of lymphocytes in patients with colorectal cancer.MethodsConsecutive 40 cases diagnosed as colorectal cancer from January 2013 to January 2014 in our hospital were enrolled and divided randomly into control group and experiment group,20 cases in each group.All the patients received standard chemotherapy according to grading and staging of the cancer,and control group was given paclitaxel treatment,while experiment group was given photodynamic combined with paclitaxel.The transferation rate and apoptosis rate of T lymphocyte,proliferation level of IFN-γ,expression level of IL-2 and clinical efficiency of the two groups were compared.The expression of E-cadherin pathology was analyzed before and after treatment.ResultsCompared with control group,the transferation rate of T lymphocyte in experiment group was significantly higher with lower apoptosis rate (P<0.05);the expression levels of IFN-γ and IL-2 in experiment group were higher (P<0.05);the total effective rate in experiment group was higher with longer survival time and shorter in-hospital time (P<0.05).No significant difference was found in the E-cadherin positive expression between experimental group and control group (10.0% vs.15.0%,P>0.05) before treatment,while there was significant difference after treatment (25.0% vs.60.0%,P<0.05).ConclusionPhotodynamic therapy combined with paclitaxel can greatly inhibit the metastasis and proliferation rate of lymphocytes,enhance E-cadherin positive expression,and improve the clinical efficacy in patients with colorectal cancer.

Key words：Photodynamic therapy;Paclitaxel;Colorectal cancer;Lymphocyte;Metastasis;Proliferation

收稿日期：2015-09-07

基金項目：江門市科技計劃項目(2014020)

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201605009