一起豬藍耳病與局部水腫病混合感染病例的綜合診斷與防治

古金元，呂 林，胡東方，陳同煜，劉思當（山東農業大學動物科技學院，山東 泰安 271018）

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一起豬藍耳病與局部水腫病混合感染病例的綜合診斷與防治

古金元，呂 林，胡東方，陳同煜，劉思當*
（山東農業大學動物科技學院，山東 泰安 271018）

摘 要：2015年10月山東省聊城市某個體豬場發生一起以保育豬急性死亡為臨床特征的疫情，病豬皮膚局部水腫、精神沉郁、食欲不振、發燒、氣喘，普通抗生素治療無效。為明確引起此次疫情的致病病原，并制定針對性的防控措施，我們對該病例進行了綜合診斷。根據臨床癥狀、剖檢病變、組織病理學變化、病原學檢測及細菌分離鑒定結果，最終確診此次疫情系豬藍耳病病毒與產志賀毒素大腸桿菌混合感染所致。通過對健康豬群藥物保健，調整豬場的豬藍耳病免疫程序，成功控制了疫情蔓延，減少了經濟損失，同時也為豬藍耳病與局部水腫病混合感染臨床病例的診斷與防控提供了新的經驗。

關鍵詞：豬藍耳病；水腫；混合感染；診斷；防控

豬繁殖與呼吸綜合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由動脈炎病毒科動脈炎病毒屬的豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的一種高度接觸傳染性免疫抑制病，以引起母豬繁殖障礙、仔豬和育成豬呼吸道癥狀及高死亡率為主要特征，并且常常繼發其他病原感染。該病于1987年首次在北美發現，之后在世界范圍內迅速傳播，給養豬業造成了極大的經濟損失。世界動物衛生組織（OIE）將其列為B類傳染病，我國也將其列為二類傳染病。郭保清等（1996） 首次在國內疑似PRRSV感染的豬群中分離出PRRSV，從而證明了該病毒在我國的存在。目前，PRRSV也已成為我國重要豬傳染病病原之一。

豬水腫病又名豬胃腸水腫，是由產志賀毒素大腸桿菌的毒素引起斷奶仔豬的一種急性散發性疾病，以頭部水腫、運動失調、驚厥、麻痹及剖檢時胃壁、腸系膜等水腫為特征，臨床上分為急性型和亞急性型。本病主要見于剛斷奶不久的仔豬，生長快、體況健壯的仔豬最為常見，瘦小仔豬少發生。一般呈散發，有時呈地方性流行，常限于某些豬場和某些窩的仔豬。飼料飼喂方法改變，飼料單一，氣候變化，被污染后的水，環境，用具等均可導致本病的發生幾率增加和癥狀加重。本病一年四季均可發生，但多見于春秋季，發病率一般不高，約為10%～35%，但死亡率可高達90%以上。

現就一豬藍耳病與局部水腫病混合感染的臨床病例進行的綜合診斷，分析報告如下。

1 材料與方法

1.1 病例背景

山東省聊城市某個體自繁自養豬場存欄母豬40余頭，保育豬約350頭。2015年10月7日發現7頭40日齡左右的保育豬出現皮膚局部水腫、精神沉郁、食欲不振、氣喘等癥狀，發病豬體溫升高至40～40.5 ℃且稽留不退；豬場獸醫對病豬注射了青霉素、黃芪多糖注射液，注射后短時間內有效，但病癥很快反復，治療效果差。3 d內病情開始蔓延，并且陸續出現豬只死亡現象；7 d內保育舍發病率達11.14%（39/350），死亡率28.21%（11/39），10月15日上午將病死豬送檢。

表1 PCR/RT-PCR引物序列

1.2 送檢病死豬的臨床檢查

對送檢病死豬進行臨床檢查發現，病死豬主要表現為兩前肢、陰囊鞘及面部水腫明顯。

1.3 樣品采集

剖殺送檢病豬，對組織器官進行病理學檢查，同時采集組織器官病料（腦、脾臟、肝臟、肺臟、腎臟、淋巴結及扁桃體），一份用液氮保存進行分子生物學檢查，另一份用10%福爾馬林溶液固定，進行病理組織學檢查，同時無菌采取組織水腫液進行細菌分離。

1.4 實驗室檢查

1.4.1 組織病理學檢查

將采集的組織病料經10%中性福爾馬林固定后制作常規石蠟切片，經蘇木素-伊紅（HE）染色后光鏡觀察。

1.4.2 病原學檢查

將凍存于液氮中的組織病料解凍后取適量加入滅菌PBS并研磨成勻漿，

10 000 r/min離心5 min后取上清，使用北京全式金EasyPure Viral DNA/ RNA kit（批號：J10204）提取病毒核酸。根據Genbank公布的序列分別設計豬瘟病毒（CSFV）、豬藍耳病病毒（PRRSV）、偽狂犬病病毒（PRV）及豬圓環病毒2型（PCV2）的特異性引物（見表1，經驗證均具有較好的特異性和擴增效率），用PCR/RT-PCR方法擴增后，將擴增產物在1.5%的瓊脂糖凝膠中電泳，紫外凝膠成像儀下根據條帶位置判定病豬的病原感染狀況。

1.4.3 細菌分離培養

無菌取病豬的組織水腫液劃線接種于麥康凱瓊脂平板，37 ℃培養箱中培養24 h后，觀察菌落在培養基中的生長情況，然后挑取典型菌落再劃線麥康凱瓊脂培養基做進一步純化培養，純化的可疑菌落接種于三糖鐵斜面培養基中后置于37 ℃培養24 h，同時挑取典型菌落進行革蘭氏染色。為進一步驗證，對純化好的可疑菌落按照青島海博生物技術公司提供的生化鑒定試劑盒（批號：HB4107）做以下生化實驗：葡萄糖、硫化氫、尿素酶、衛矛醇、甘露醇、枸櫞酸鹽、吲哚、硝酸鹽、甲基紅、氰化鉀（KCN）等。

1.4.4 藥物敏感試驗

用滅菌接種環挑取麥康凱瓊脂平板上的純化菌于另一新鮮麥康凱瓊脂平板，均勻涂布后將藥敏片按照一定間隔貼于該板，置于37 ℃培養箱中培養24 h后觀察結果，并根據抑菌圈直徑（φ）判定細菌對藥物的敏感程度。判定標準：φ＞25 mm為極度敏感；15 mm＜φ＜25 mm為高度敏感；10 mm＜φ＜15 mm為中度敏感；φ ＜10 mm為低度敏感；無抑菌圈則為耐藥。

2 結果與分析

2.1 病理剖檢結果

病豬體表可見兩前肢、面部及陰囊鞘水腫（圖1A）。剖檢病豬發現，皮下有膠凍樣物質附著（圖1B）；并可見彌漫分布的水腫液（圖1C）；下頜淋巴結及腹股溝淋巴結出血腫大，被膜粘連（圖1D）；胸腔積液（圖1E）；肺臟與胸壁粘連（圖1F）；肺水腫（圖1G），心外膜有膠凍樣物質包裹（圖1H）；胃黏膜出血、潰瘍（圖1I）；顱腔內可見漫分布的水腫液（圖1J）。

2.2 病理組織學檢查結果

將采集的組織器官病料經常規石蠟切片、HE染色后鏡檢，可見典型的病毒性腦炎病變，大腦血管周圍有大量淋巴細胞和單核細胞浸潤形成“腦血管袖套現象”（圖2A），神經元變性壞死、被膠質細胞吞噬，出現“噬神經現象”（圖2B）；皮下因水腫組織疏松（圖2C）；肺泡壁毛細血管充血（圖2D）；淋巴結出現壞死性淋巴結炎病變（圖2E），表現淋巴細胞崩解壞死，胞核濃縮深染、崩解破碎、溶解消失；肺水腫，小葉間隙增寬（圖2F）；肝細胞變性、壞死（圖2G）；胃黏膜上皮細胞壞死、脫落（圖2H）。

圖1 病豬的剖檢病變

圖2 病豬的組織病理學變化

2.3 病原學檢查結果

根據流行病學調查、病理剖檢及組織病理學檢查，初步懷疑豬藍耳病病毒感染，對采集的病料進行了豬藍耳病病毒檢測，并對豬瘟病毒、偽狂犬病病毒及豬圓環病毒2型進行了檢測，檢測結果顯示，送檢的病料樣品中僅檢出了豬藍耳病病毒，其他病毒未檢出（圖3）。

2.4 細菌分離培養檢測結果

2.4.1 細菌分離檢測結果

圖3 1.5%瓊脂糖凝膠電泳圖

將無菌采集的病料劃線接種于麥康凱瓊脂培養基后于37 ℃培養箱中培養24 h后發現，優勢菌落明顯，在平板上可見大小一致，直徑0.1～0.3 mm，邊緣光滑，濕潤，透明，黏稠的紅色圓形菌落。挑取菌落涂片后經革蘭氏染色鏡檢后可見兩端鈍圓、無芽孢及莢膜的革蘭氏陰性小桿菌；三糖鐵瓊脂斜面黃色，底層變黃，產氣，不產生H2S。

2.4.2 生化鑒定

根據分離菌形態、培養特征和生化鑒定結果（表2）判定該分離菌為大腸桿菌。

2.4.3 藥物敏感試驗結果

根據藥敏實驗結果（表3）可知對分離出的該大腸桿菌高度敏感的藥物有慶大霉素、鏈霉素、頭孢拉定。試驗結果判定參照NCCLS藥敏試驗標準。

3 防治措施

結合臨床癥狀、病理剖檢及實驗室檢測判定為豬藍耳病病毒和產志賀毒素大腸桿菌的混合感染。根據檢測結果，協助豬場實施以下綜合防控措施。

1）隔離病豬。對保育舍發病豬只立即進行隔離治療，選用對分離出的大腸桿菌高敏的慶大霉素注射治療：每天2次，連用3 d。同時禁止病豬舍飼養人員隨意串舍，進出豬舍必須嚴格消毒。

表2 生化實驗檢測結果

表3 沙門氏菌藥物敏感試驗結果

2）嚴格消毒。發病豬舍立即進行帶豬消毒，使用碘制劑等對豬刺激小但是效果好的消毒劑噴霧消毒，同時對豬圈及飼喂器具進行徹底消毒。

3）調整日糧中蛋白質的比例，應用全價料飼養。避免日糧單一或蛋白質偏高，要適量供給青綠飼料、礦物質和微量元素。

4）加強飼養管理。立即停止豬場豬只的買賣，減少豬群應激反應，保持豬圈干燥，及時清理糞污，加強通風換氣，降低飼養密度。

5）藥物防治。選用對大腸桿菌高敏的慶大霉素拌料治療，連用3～5 d；同時輔以黃芪多糖、維生素C等藥物，以增強病豬機體的抵抗力。

6）防治因豬藍耳病感染造成的繼發感染：針對仔豬氣喘問題，用氟苯尼考、替米考星等藥物拌料治療，連用3～5 d。

通過采取以上防治措施，半月之后回訪得知，發病豬群除個別發病嚴重豬只死亡之外，其余病豬均已逐漸康復，仔豬氣喘癥狀明顯減輕；新進保育舍的仔豬未再出現發病，生長狀況良好，該個體豬場已經基本恢復正常。

作者簡介：古金元（1989-），男，山東泰安人，在讀碩士研究生，研究方向為臨床病理學。Email：gu1220jinyuan@163.com。

*通訊作者：劉思當（1961-），男，山東泰安人，教授，博士生導師，博士。Email：liusid@sdau.edu.cn.

收稿日期：（2016-03-08）