豬病防控中實驗室檢測的應用與注意事項

李天芝，于新友（山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

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豬病防控中實驗室檢測的應用與注意事項

李天芝，于新友
（山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

摘 要：近年來，豬發生的疾病種類不斷增多，病情復雜，死亡率增加，給我國養豬業造成巨大的經濟損失，僅靠流行病學和病理變化等有時很難對病因做出正確的判斷，因此，必須借助實驗室方法對豬病進行診斷，以便做出相應的防控措施，使養殖場的損失降到最低，文內就實驗室開展的檢測工作、檢測對豬病防控的意義、送檢樣品的要求和檢測結果的評價等進行論述，旨在為今后廣大獸醫工作者在豬病防控中能更好的開展實驗室檢測工作提供參考。

關鍵詞：豬病；防控；實驗室檢測

近年來，我國豬病的種類越來越多，老病新發或新的疾病不斷暴發流行［1］，癥狀日益復雜，隱性感染、非典型癥狀和混合感染無處不在［2］，僅靠流行病學、臨床癥狀和病理變化難以確診，不能及時準確制定防控措施，往往貽誤疾病治療的最佳時機，導致豬群大量死亡。因此，采集病豬或死豬相關組織作為病料，進行病原檢測是輔助豬病診斷的重要手段，只有查明病原才能更好地、有針對性地采取相應的防治措施，減少臨床工作的盲目性，以達到預防、控制和撲滅傳染病的目的，從而使養殖場/戶的損失降到最低。另一方面，目前市場上疫苗廠家眾多，疫苗質量參差不齊，疫苗的免疫效果會受到儲存、運輸和免疫等多個環節影響，實驗室可檢測保護性抗體出現時間、維持時間、離散度和最高滴度等指標，評估疫苗免疫效果，為疫苗選擇及制定科學合理免疫程序提供參考。再次，社會上還有人受經濟利益的驅使，對疫苗市場進行炒作，引起廣大百姓的認識誤區［3］。因此，只有開展好實驗室診斷工作，才能更好的為廣大獸醫工作者和養殖場/戶的服務，才能更好的做好規模化豬場疾病綜合防控與凈化工作。而病料采集、保存、送檢的方法是否正確，直接影響到檢驗的結果和防治工作的開展。鑒于部分養殖戶和相關專業技術人員對實驗室檢測及應注意的事項不太清楚或認識上存在誤區，筆者就多年從事實驗室檢測工作的心得體會及注意事項進行論述，以期為廣大基層獸醫工作者提供參考。

1 實驗室檢測工作內容

1.1 抗體檢測

抗體檢測指在體外進行的抗原抗體反應，其基本原理就是利用抗原可與相應的抗體特異性結合的特性，利用已知的抗原來檢查血清或其他樣品中是否含有相應的抗體［4］，目前普遍采用的是ELISA方法，檢測血清中某種病原的抗體含量。該法的優點是操作簡單、時間短、可同時檢測大量樣本，對人員操作水平要求不高。但也存在一些問題，大部分試劑盒不能區分野毒和疫苗毒，有的病原抗體檢測水平與保護力并沒有太大相關性。僅能作為疫苗免疫后產生免疫力的依據或感染發生的依據。實驗室目前主要使用的是已經商品化的試劑盒。目前也有不少企業研發出了豬病抗體膠體金快速檢測卡，也可用于抗體的快速檢測，主要應用于豬場疾病的現場檢測。

1.2 病原檢測

病原檢測分兩種，一種是采用某種方法，如細菌培養、動物接種等直接檢測某種病原微生物是否存在，另一種是采用PCR等方法，檢測樣品中某種病原微生物的核酸是否存在，從而間接反應某種病原微生物是否存在。第1種方法做起來費時費力，第2種方法便利快捷，在較短時間就能得到結果，所以目前病原檢測主要采用的是第2種方法。PCR檢測針對的是病原，針對性強、可確診，可區分野毒與疫苗毒，熒光定量PCR檢測方法可確定病毒載量，確定發病的主要原因，但PCR檢測對人員和儀器有一定的要求，需專業人員操作，專業人員需要有一定的分子生物學基礎。

2 檢測對豬病防控的意義

病原檢測的意義是了解豬群是否感染某種病原，假如感染，陽性率是多少，調查某種疾病的流行情況，根據檢測結果，對豬場開展疾病凈化相關工作，采取相應的措施，隔離或撲殺陽性感染豬，建立陰性種豬群，實行全進全出等措施，從而徹底根除某種疾病在豬場的流行。在疾病初期進行診斷，實現早發現，早治療，用疫苗緊急接種，防控疾病大規模的暴發和流行。

通過抗體檢測可以了解豬群的整體免疫狀況，從而把握整個豬群的健康狀況，弄清楚豬群注射疫苗后是否產生抗體及抗體量的多少，以此判斷疫苗的免疫效果，及早發現問題，及早采取措施，為下一步的疫苗選擇和免疫程序的制定提供依據，

3 送檢樣品的要求

送檢的樣品具有代表性是實驗室能否做出正確檢測結果的前提和基礎，送檢的樣品不合格，可能做出錯誤的檢測結果，造成誤診，耽誤疾病的治療。現簡單介紹一下樣品的采集、保存和運輸途中應注意的一些事項。樣品主要包括血清和病料兩個主要部分，現分別進行闡述。

3.1 抗體檢測樣品

送實驗室檢測血清樣品一般有兩個目的，一是做血清抗體的普查，即檢驗豬只的免疫情況及效價的高低，另一種目的是用于未注射疫苗豬群的疾病監測，如果是以抗體的普查為目的，一定要注意采樣，一定要有統計意義，按照豬場的規模采取一定分布和數量的樣品［5］。對于以疾病監測為目的，一定注意當發現突然死亡或死因不明的病畜尸體，必須先采集耳靜脈等末梢血液，涂片鏡檢，在認定不是炭疽時，才允許解剖和全面采集病料。對血清樣品一般從前腔靜脈或耳緣靜脈采血2～5 mL，盡可能的防止血樣在采集過中被污染，一旦污染細菌可能會影響監測結果的準確性，如果有條件的話最好能將血清分離后，送檢血清，方法為待血液凝固后，將析出的血清轉移至離心管，3 000 r/ min離心10 min，取上清液置于1.5 mL滅菌離心管內，做好標記送檢，也可以直接送采集好的血樣，注意運輸途中要冷藏保存，以防血樣腐敗變質，最好4 ℃，不能凍結，否會造成溶血，影響檢測結果，盡快將血樣送達實驗室，一般不超過24 h。

3.2 病原檢測樣品

采集病料進行病原分離和檢測時，最要保證病料的新鮮，一定要取適宜的病料和病變的典型部位，對檢測細菌樣品的病料最好是沒有經抗生素治療的動物［6］，如果病料取得部位不正確也能造成假陰性的結果，比如豬瘟，以前有送檢人員取的是肝臟，這是錯誤的，采集的病料應盡可能的齊全，混合一起進行檢測，避免漏檢，提高結果的準確性。關于豬的常見病病料應該采集的部位在下面將做詳細論述，采集病料時盡量無菌操作，動作要盡可能快，所用器械、容器都必須消毒滅菌，減少樣品被污染的可能性，要在病豬死亡后6 h內采集病料。要將病料盡快送達實驗室進行檢測，不能送腐敗變質的病料，病料運輸途中一定要保持低溫，防止途中變質，但也要避免病料的反復凍融，最好能在24 h內送達實驗室檢測。

3.2.1 豬病毒性病料應該采集的部位

表1 不同病毒性疾病病料采集部位

3.2.2 豬細菌疾病病料的采集部位

表2 不同細菌性疾病病料采集部位

3.2.3豬寄生蟲性病料應該采集的部位

弓形體病主要采集抗凝血和肺臟，球蟲病主要采集糞便。

4 檢測結果的評價

實驗室不僅要及時、準確的對樣品進行檢測，有時也需要對得到的原始數據進行整理、分析和匯總，否則養殖戶不能準確理解數據的意義，向養殖戶提供準確的建議和報告，如陽性率、陰性率、差異度等，從而更好的指導臨床用藥，對當前的免疫程序、用藥情況、疫苗質量等提出意見和建議。真正的為豬場服務，做到“檢有所值，檢有所用”。并進行可持續的跟蹤服務，將實驗室的作用發揮到最大。

5 小結

獸醫診斷實驗室在豬病防控中起著非常重要的作用，不論是病原檢測還是抗體檢測都應該都應追求高標準、高質量，將檢測結果與臨床診斷結合起來，將檢測與分析統一結合起來，實驗室檢測雖不能解決豬場所有的問題，但可解決部分緊急的問題。降低豬場養殖成本，避免大規模傳染病的發生，尤其是規模較大的豬場，更應該重視實驗室檢測的作用，否則可能造成不可估量的損失，有條件的話最好能建立自己的檢測實驗室或依托可靠的合作單位，如果采取臨時抱佛腳式的檢測，會產生很多時間和信任成本。對豬場疾病的防控應重預防和檢測，檢測可以貫穿于整個生產過程中的疾病防控，實驗室檢測應秉承“專業、高效、及時、準確”的服務宗旨，“客觀、獨立、公正、嚴謹”的原則。提升自身創新力、市場競爭力、打造社會公信力。為規模化養殖場提供及時、準確、權威的檢測報告。同時，檢測中心將“養大于防、防大于治”的養殖理念與養殖體檢結合，實現全方位的養殖防控數據服務體系，從而真正實現養殖效益的最大化。隨著豬病的不斷增多和病情的復雜化，各地“草根實驗室”和各集團公司的中心實驗室紛紛建立，并在豬病防控中發揮了巨大作用。將各種實驗室的作用結合起來，取長補短，才能更好地服務于生產一線［7］。實驗室檢測結果受到樣品、人員、儀器設備、檢測方法、檢測試劑、檢測環境等多種因素的影響，為保障實驗室檢測效果的準確性，應從以下幾個方面進行控制：1）加強對實驗室的管理，制定一系列的規章制度，并嚴格執行；2）采集合適的樣品，并及時正確的送檢；3）加強對實驗室檢測人員的管理，定期開展技能考核，盡量減少由于人的因素造成的試驗結果誤差；4）定期開展培訓，使實驗室人員不斷學習，及時掌握最新、有效的檢測方法，對檢測結果分析要科學、合理和全面，根據試驗數據做出合理的判斷，制定科學的豬病防控措施，相信在不久的將來實驗室檢測會在豬病的防控工作中發揮更加重要的作用。

參考文獻

［1］ 胡長蘭.抗體檢測技術在豬疫病防控中的應用分析［J］.農業與技術，2015（12）：170-171.

［2］ 李龍，章葉恩.用于實驗室診斷的豬病料的采集、保存和運輸方法介紹（1）——疑似病毒性疾病病料的采集、保存和運輸［J］.養豬，2007（3）：75-77.

［3］ 鄧麗琴.豬病診斷方法目前出現的問題和相關的解決措施研究［J］.北京農業，2014（27）：125.

［4］ 蔡麗，祝丹，魏正明，等.血清學檢測在豬病診斷中的作用［J］.養殖與飼料，2010（7）：47-48.

［5］ 劉建杰，方兵兵，吳斌，等. 2002年我室豬病的診斷情況總結及分析［J］.養殖與飼料，2003（8）：42-44.

［6］ 章葉恩，李龍.用于實驗室診斷的豬病料的采集、保存和運輸方法介紹（2）——疑似細菌性疾病病料的采集、保存和運輸［J］.養豬，2007（4）：68-69.

［7］ 勞錦華.豬病復雜催生“草根實驗室”上馬［N］.中國畜牧獸醫報 ，2009-11-29（004）.

基金項目：山東省現代農業產業技術體系生豬產業創新團隊項目（SDAIT-06-022-15）；山東省自然科學基金青年基金項目（ZR2014CQ010）；濱州市科技發展計劃項目（2013GG0304）

作者簡介：李天芝（1985-），女，山東菏澤人，助理研究員，碩士，主要從事動物傳染病診斷與防控研究

收稿日期：（2016-02-19）