白芷總香豆素和揮發(fā)油鎮(zhèn)痛抗炎作用的比較研究

薛艷萍　秦旭華　胡黃婉瑩　許　玲　錢　娜　張?jiān)伱贰√啤√m

成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川　成都　611137

白芷總香豆素和揮發(fā)油鎮(zhèn)痛抗炎作用的比較研究

薛艷萍秦旭華*胡黃婉瑩許玲錢娜張?jiān)伱诽铺m

成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川成都611137

【摘要】目的：研究白芷總香豆素和揮發(fā)油的鎮(zhèn)痛抗炎作用。方法：采用熱板法、醋酸扭體法、甲醛致痛法觀察白芷總香豆素、揮發(fā)油及復(fù)合成分組的鎮(zhèn)痛作用；采用二甲苯致耳腫脹、腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)及棉球肉芽腫3種炎癥模型考察白芷總香豆素、揮發(fā)油及復(fù)合成分組的抗炎作用。結(jié)果：鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：白芷總香豆素、揮發(fā)油對醋酸及甲醛所致小鼠或大鼠的疼痛反應(yīng)具有明顯抑制作用(P<0.05)，復(fù)合成分組對3種疼痛模型均具有抑制效應(yīng)(P<0.05或P<0.01)；抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：白芷總香豆素、揮發(fā)油能明顯減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度、抑制小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)(P<0.05)；而復(fù)合成分組對3種炎癥模型均有明顯抑制作用(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論：白芷總香豆素及揮發(fā)油均具有一定的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，其作用特點(diǎn)和強(qiáng)度差異不明顯，而白芷總香豆素、揮發(fā)油聯(lián)合使用可明顯增強(qiáng)鎮(zhèn)痛抗炎作用，提示白芷總香豆素和揮發(fā)油具有“相須”的抗炎止痛作用。研究提示在中藥新藥的開發(fā)和利用中，從傳統(tǒng)中藥中分離的多種有效成分及有效成分的組合，應(yīng)成為今后中藥新藥開發(fā)考慮的方法和方向。

【關(guān)鍵詞】白芷總香豆素和揮發(fā)油；抗炎；鎮(zhèn)痛；實(shí)驗(yàn)研究

白芷為傘形科植物的根，為中醫(yī)臨床“祛風(fēng)止痛”的常用中藥。既往研究發(fā)現(xiàn)，白芷的鎮(zhèn)痛抗炎成分主要與總香豆素和揮發(fā)油類成分有關(guān)。本研究選擇川產(chǎn)道地藥材白芷(Angelicadahuriea(Fisch. ex Hoffm. ) Benth. et Hook. f. var. formosana(Boiss.)Shan et Yuan)的提取物-總香豆素和揮發(fā)油為研究對象，對其鎮(zhèn)痛抗炎作用進(jìn)行比較研究，為進(jìn)一步開發(fā)和利用白芷資源進(jìn)行有益的探索。

1材料

1.1藥物白芷購于四川遂寧白芷GAP生產(chǎn)基地，白芷總香豆素浸膏及揮發(fā)油(由成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥制劑教研室制備)，復(fù)合組以總香豆素及揮發(fā)油按1∶1比例混合組成，實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水(含0.5%吐溫-80助溶)配成所需濃度的混懸液備用。

1.2試劑曲馬多，石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號012100901；地塞米松：浙江仙居有限公司，批號：111075。

1.3動物昆明種小鼠，雌雄兼用，體重18～22g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供， SD大鼠，雌雄兼用，體重180～220g，由成都中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，合格證號：scxk(川)2008-11。

1.4儀器YLS-6B智能熱板儀，山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站。

2方法

2.1鎮(zhèn)痛作用研究

2.1.1對熱板所致疼痛模型的影響取健康雌性昆明種小鼠80只，放入溫度已控制好的熱板上(55±0.5)℃，立即觸摸“計(jì)時(shí)”按鈕開始計(jì)時(shí)，并蓋上有機(jī)玻璃罩避免小鼠躍出，仔細(xì)觀察，待小鼠舔后足時(shí)馬上再次觸摸“計(jì)時(shí)”按鈕而鎖定時(shí)間，該時(shí)間為小鼠的痛閾值。(凡是在5s內(nèi)出現(xiàn)舔后足及超過30s不舔后足，或逃避跳躍的小鼠棄置不用。)取篩選合格的小鼠(雌性)80只，再次測定痛閾值，以兩次的平均值作為小鼠給藥前的正常痛閾值，按照小鼠的正常痛閾值隨機(jī)分為8組，分別為空白組、曲馬多組、白芷總香豆素、揮發(fā)油及復(fù)合成分高劑量組、低劑量組，每組10只小鼠。實(shí)驗(yàn)各組分別灌胃給予各受試藥物，0.2ml/10g(具體給藥劑量見表1)；空白組給予等量蒸餾水，分別測定給藥后30min、60min、90min、120min時(shí)小鼠的痛閾值。若小鼠放入熱板儀中60s仍無反應(yīng)，應(yīng)將小鼠取出，痛閾值按60s計(jì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1　白芷總香豆素和揮發(fā)油對熱板刺激致小鼠疼痛反應(yīng)的影響　±s,n=10)

注：與空白對照組比較，*P<0.05 ，**P<0.01。

2.1.2對醋酸所致疼痛模型的影響取健康昆明種小鼠80只，雌雄各半，按體重分層隨機(jī)分為8組，分別為空白組、曲馬多組、白芷總香豆素、揮發(fā)油及復(fù)合成分高、低劑量組，每組10只小鼠。實(shí)驗(yàn)各組分別灌胃給予各受試藥物，0.2ml/10g(具體給藥劑量見表2)；空白組給予等量蒸餾水。于末次給藥30min后，每只小鼠腹腔注射0.5%冰醋酸0.1ml/10g，立即將小鼠單只放入小鼠籠內(nèi)，觀察15min內(nèi)各鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期(注射醋酸后至第一次扭體反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間)和扭體次數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2　白芷總香豆素和揮發(fā)油對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響　±s,n=10)

注：與空白對照組比較，*P<0.05 ，**P<0.01。

2.1.3對甲醛所致疼痛模型的影響取健康SD大鼠80只，雌雄各半，稱重，按體重分層隨機(jī)分為8組，分別為空白組、曲馬多組、白芷總香豆素、揮發(fā)油及復(fù)合成分高、低劑量組，每組10只大鼠。實(shí)驗(yàn)各組分別灌胃給予各受試藥物，0.2ml/10g(具體給藥劑量見表3)；空白組給予等量蒸餾水。于末次給藥30min后，每只大鼠左側(cè)足跖處注射2%甲醛100μl/只，立即觀察大鼠0～5min內(nèi)的舔足次數(shù)、15～30min的舔足次數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3　白芷總香豆素和揮發(fā)油對甲醛致大鼠疼痛反應(yīng)的影響　±s,n=10)

注：與空白對照組比較，*P<0.05 ，**P<0.01。

2.2抗炎作用研究

2.2.1對二甲苯所致炎癥模型的影響取健康雄性昆明種小鼠80只，稱重，按體重分層隨機(jī)分為8組，分別為空白組、地塞米松組、白芷總香豆素、揮發(fā)油及復(fù)合成分高、低劑量組，每組10只小鼠。實(shí)驗(yàn)各組分別灌胃給予各受試藥物，0.2ml/10g(具體給藥劑量見表4)；空白組給予等量蒸餾水。給藥后30min將30μl二甲苯均勻涂抹于每只小鼠的右耳兩面。致炎60min后，小鼠脫頸椎處死，分別剪下左右耳片，打孔器取相同部位打孔，電子天平稱量。

耳腫脹度的計(jì)算公式為：腫脹度(mg) = 腫脹耳片質(zhì)量-未腫脹耳片質(zhì)量

腫脹抑制率計(jì)算：空白對照組平均腫脹度與用藥組平均腫脹度的差值除以空白對照組平均腫脹度，再乘以100%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4　白芷總香豆素和揮發(fā)油對二甲苯小鼠耳腫脹的影響　±s,n=10)

注：與空白對照組比較，*P<0.05 ，**P<0.01。

2.2.2對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)的影響取健康雄性昆明種小鼠80只，按體重隨機(jī)分成8組，分別為空白組、地塞米松組、白芷總香豆素、揮發(fā)油及復(fù)合成分高、低劑量組，每組10只小鼠。各組動物每日灌胃給藥一次，每次0.2ml/10g(具體給藥劑量見表5)，模型對照組給相同體積的0.5%吐溫溶液)，連續(xù)灌胃3d，地塞米松組實(shí)驗(yàn)當(dāng)天腹腔注射給藥1次。末次給藥后1h，各組動物尾靜脈注射1%伊文思藍(lán)0.1ml/10g體重，同時(shí)腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2ml/只，20min后處死小鼠，用5ml蒸餾水沖洗腹腔，收集沖洗液，離心，取上清液于分光光度計(jì)590nm處比色，以吸光度(OD)值表示小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性。結(jié)果見表5。

表5對小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)的影響

組別給藥量/mg/kgOD值空白對照組—0.768±0.353地塞米松組50.417±0.267*揮發(fā)油高劑量組3600.381±0.171*揮發(fā)油低劑量組1800.499±0.215總香豆素高劑量組3600.409±0.311*總香豆素低劑量組1800.633±0.304復(fù)合高劑量組3600.356±0.188**復(fù)合低劑量組1800.421±0.292*

注：與空白對照組比較，*P<0.05 ，**P<0.01。

2.2.3對小鼠棉球肉芽腫的影響取健康雄性昆明種小鼠80只，按體重隨機(jī)分成8組，每組10只。分組見表6。實(shí)驗(yàn)時(shí)各動物于右腹部消毒后剪開1cm長小口，以血管鉗擴(kuò)松皮下組織，用鑷子將重量為10mg的滅菌干棉球植入腋部皮下，切口涂紅霉素軟膏，手術(shù)后2天每天注射硫酸慶大霉素0.05ml/只以防感染。由手術(shù)當(dāng)天起每日灌胃給藥一次，每次0.2ml/10g(具體給藥劑量見表6)；空白組給予等量蒸餾水，連續(xù)灌胃7d。第8天處死小鼠，打開原切口，將棉球連同周圍結(jié)締組織一起取出，剔除脂肪組織，放烘箱60℃6h烘干稱重，減去原棉球重量即為肉芽腫干重。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。

表6白芷總香豆素和揮發(fā)油對小鼠棉球肉芽腫的影響

組別給藥量/mg/kg棉球肉芽腫干重/mg空白對照組—16.1±6.4地塞米松組58.1±3.0**揮發(fā)油高劑量組36012.1±4.4揮發(fā)油低劑量組18013.4±6.5總香豆素高劑量組36014.2±4.7總香豆素低劑量組18012.4±3.3復(fù)合高劑量組36010.70±2.6*復(fù)合低劑量組18011.10±4.9*

注：與空白對照組比較，*P<0.05 ，**P<0.01。

3結(jié)果

鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：白芷總香豆素和揮發(fā)油能明顯延長醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的潛伏期，減少其扭體反應(yīng)次數(shù)，并抑制甲醛致大鼠的疼痛反應(yīng)(P<0.05)，但對熱板致小鼠疼痛反應(yīng)則無明顯影響(P>0.05)；而其復(fù)合成分組對三種疼痛模型均表現(xiàn)出明顯抑制作用(P<0.05或P<0.01)?？寡讓?shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：白芷總香豆素和揮發(fā)油能明顯減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度，抑制小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)(P<0.05)，但對小鼠棉球肉芽腫干重則無明顯抑制效果(P>0.05)；而復(fù)合成分組不僅對二甲苯致炎癥模型和小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)表現(xiàn)出明顯抑制(P<0.05或P<0.01)，還能明顯減輕小鼠棉球肉芽腫干重(P<0.05)。

4討論

白芷藥用始載于我國現(xiàn)存最古的醫(yī)學(xué)方書《五十二病方》，至今已有2000余年藥用歷史。白芷為中醫(yī)臨床常用止痛藥物，常用于頭痛，牙痛，風(fēng)濕痹痛等多種疼痛病癥[1]。同時(shí)，我國作為白芷的主產(chǎn)地，白芷產(chǎn)量占世界總產(chǎn)量的95%以上，藥材資源得天獨(dú)厚。目前我國的商品白芷主要有川、杭、祁、禹四種，川產(chǎn)白芷是著名的道地藥材，產(chǎn)量約占全國商品白芷的70%。如何開發(fā)和利用豐富的白芷資源，是我們當(dāng)前中醫(yī)藥研究者的重要課題。有文獻(xiàn)研究顯示白芷中的揮發(fā)油及香豆素類物質(zhì)均為其抗炎、鎮(zhèn)痛的活性成分[2-4]，但揮發(fā)油和香豆素在抗炎和鎮(zhèn)痛作用上有何特點(diǎn)，是否具有協(xié)同作用，未見文獻(xiàn)報(bào)道。本課題正是基于此，以白芷揮發(fā)油、總香豆素以及兩者按1∶1比例的復(fù)合物為研究對象，采用多種炎癥和疼痛動物模型較為系統(tǒng)的對比研究，以期為白芷抗炎鎮(zhèn)痛類新型藥物的開發(fā)提供一定的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

本次實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示：白芷總香豆素、揮發(fā)油對醋酸及甲醛所致小鼠疼痛反應(yīng)具有明顯抑制作用(P<0.05)，但對熱板所致小鼠的疼痛反應(yīng)無明顯影響；白芷總香豆素、揮發(fā)油能明顯減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度、抑制小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性亢進(jìn)(P<0.05)，但對小鼠棉球肉芽腫干重?zé)o明顯抑制作用；而白芷總香豆素、揮發(fā)油復(fù)合成分高低劑量組對實(shí)驗(yàn)中采用的3種動物疼痛模型和3種炎癥動物模型均有明顯抑制作用(P<0.05或P<0.01)，兩成分表現(xiàn)出明顯協(xié)同增效的結(jié)果。研究表明：白芷總香豆素、揮發(fā)油均具有一定的鎮(zhèn)痛和抗炎作用，同時(shí)白芷總香豆素、揮發(fā)油聯(lián)合使用可明顯增強(qiáng)鎮(zhèn)痛抗炎作用，白芷總香豆素和揮發(fā)油可能具有協(xié)同增效作用。綜上，本次研究結(jié)果提示白芷中的香豆素和揮發(fā)油均為白芷傳統(tǒng)“祛風(fēng)止痛”作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，其抗炎鎮(zhèn)痛作用特點(diǎn)和強(qiáng)度差異不明顯，仍需進(jìn)一步研究，而白芷總香豆素、揮發(fā)油聯(lián)合使用可明顯增強(qiáng)鎮(zhèn)痛抗炎效果，兩種成分可能具有“相須”的作用。研究再次提示在中藥新藥的開發(fā)和利用中，從傳統(tǒng)中藥中分離的多種有效成分及有效成分的組合，可能是今后中藥新藥開發(fā)應(yīng)考慮的方法和方向。

參考文獻(xiàn)

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Comparative Study of Analgesic and Anti-inflammatory Effects of Total Coumarin and Volatile Oil of Radix Angelicae Dahuricae

XUE YanpingQIN XuhuaHU HuangwanyingXU LingQIAN NaZHANG YongmeiTANG Lan

Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075, China

Abstract:Objective To compare analgesic and anti-inflammatory effects of total coumarin and volatile oil of radix angelicae dahuricae. Methods The pain animal models induced by temperature and acetic acid and formaldehyde were adopted in the research of analgesic effect, and the degrees of the swelling of ears and the weight of cotton ball granuloma and the capillary permeability of abdominal cavity on the inflammation animal models were observed in the study of anti-inflammatory effect. Results The experiments of analgesic effect showed that the total coumarin and volatile oil of radix angelice dahuricae had an obvious analgesic effect on the pain animal models induced by acetic acid and formaldehyde(P<0.05).but the composite component had an obvious analgesic effect on the 3 kinds of pain animal models(P<0.05;P<0.01);The experiments of anti-inflammatory effect showed that the total coumarin and volatile oil of radix angelice dahuricae had an obvious anti-inflammatory effect, reducing the degree of swelling ear and the capillary permeability of abdominal cavity on the inflammation animal models(P<0.05).but the composite component had an obvious anti-inflammatory effect on the 3 kinds of inflammation animal models(P<0.05;P<0.01).Conclusion Both the total coumarin and volatile oil of Radix Angelicae dahuricae have obvious analgesic and anti-inflammatory effects, and there are no significant difference between them, but the total coumarin combining with volatile oil shows more analgesic and anti-inflammatory effects,the means that the total coumarin maybe has synergistic effect with volatile oil on analgesic and anti-inflammatory effects. In the same time, the researchers of developing new medicine from traditional herbs maybe consider more about the composite component of herbs in the future.

Key words:Total Coumarin and Volatile oil of Radix Angelicae Dahuricae；Anti-inflammatory； Analgesic；Experimental Study

基金項(xiàng)目：四川省教育廳重大培育項(xiàng)目(09ZZ006)。

通信作者：秦旭華(1972-)，女，漢族，江蘇無錫人，副教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事中藥基礎(chǔ)理論及應(yīng)用研究。E-mail:1978537820@qq.com

【中圖分類號】R285.5

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)08-0020-03

(收稿日期：2016.03.01)