596例HBsAg低值血清樣本確診試驗的結(jié)果分析*

鄧安彥，蔡艷娟，王東生，王　強，汪光蓉，劉　敏，劉　萍，張國元△

(1.南充市中心醫(yī)院輸血科，四川南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科，四川南充 637000；3.博奧賽斯天津生物科技有限公司，天津 300300)

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596例HBsAg低值血清樣本確診試驗的結(jié)果分析*

鄧安彥1，蔡艷娟2，王東生2，王強2，汪光蓉2，劉敏1，劉萍3，張國元2△

(1.南充市中心醫(yī)院輸血科，四川南充 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科，四川南充 637000；3.博奧賽斯天津生物科技有限公司，天津 300300)

[摘要]目的通過對HBsAg低值血清樣本確診試驗的結(jié)果分析，為臨床合理評價和解釋HBsAg低值結(jié)果提供依據(jù)。方法對2014年川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院HBsAg陽性結(jié)果進行回顧性分析，收集化學(xué)發(fā)光法(CMIA)檢測HBsAg結(jié)果為0.05～1.00 IU/mL的低值血清樣本596份，采用雅培Architect HBsAg確診試劑盒對其進行檢測。結(jié)果HBsAg低值樣本占HBsAg陽性樣本的12.59%。雅培HBsAg確診試驗的總陽性率為72.15%，其中0.05～0.10、>0.10～0.20、>0.20～1.00 IU/mL的確診陽性率分別為11.25%、88.35%、100.00%，各水平確診陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=410.98，P<0.01)。CLIA方法檢測HBsAg血清樣本的“可疑區(qū)間”為0.08～0.14 IU/mL。在不同年齡階段的HBsAg陽性樣本中，<1歲年齡階段人群在0.05～0.14 IU/mL的檢出率最高，達90.60%(135/149)。結(jié)論CLIA方法檢測HBsAg時存在一定的假陽性，尤其應(yīng)注意小于1歲年齡階段人群的HBsAg的低值結(jié)果的評價和解釋。

[關(guān)鍵詞]化學(xué)發(fā)光測定法；肝炎表面抗原，乙型；低值；確診試驗

乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen，HBsAg)是用來評價乙型肝炎病毒(HBV)感染與否的非常重要的血清標志物。通過對HBsAg的定量檢測，了解HBsAg血清水平的變化情況，可用于評估HBV感染的治療效果，及時調(diào)整用藥方案[1-3]。目前，用于HBsAg定量檢測的方法主要采用化學(xué)發(fā)光測定法(CMIA)[4-6]，該法具有靈敏度高、精密度好的優(yōu)點。其中非常具有代表性的檢測系統(tǒng)為ABBOTT Architect i2000[7-11]。然而在HBsAg的檢測過程中，常會出現(xiàn)一些低值結(jié)果，造成實驗室工作人員和臨床醫(yī)生在評價和解釋結(jié)果時出現(xiàn)“有或無”的困惑。為解決上述的困惑，作者對596份HBsAg低值血清樣本進行了確診試驗，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2013年3月至2014年9月川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院門診和住院人群進行HBsAg檢測陽性標本4 734份，其中結(jié)果為0.05～1.00 IU/mL的血清樣本596份，其中男327份，女269份，平均年齡38歲。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑Abbott Architect i2000全自動免疫分析儀及配套的HBsAg試劑盒(Lot：34391LF00，43417LF00)和HBsAg確診試劑盒(Lot：27427LF00)，美國雅培公司生產(chǎn)。

1.2.2檢測方法對當天所有HBsAg定量檢測結(jié)果為0.05～1.00 IU/mL的樣本重復(fù)檢測，當兩次檢測結(jié)果差異小于20%時，計算兩次結(jié)果的平均值為HBsAg最終定量結(jié)果；若兩次檢測結(jié)果差異大于20%時，則再次進行HBsAg檢測，HBsAg最終定量結(jié)果以最接近的兩次結(jié)果的平均值為準。同時對當天所有HBsAg最終定量結(jié)果為0.05～1.00 IU/mL的血清樣本進行HBsAg確診試驗。HBsAg初篩陽性和確診試驗陽性的判斷標準嚴格參照試劑盒說明書：以HBsAg定量檢測結(jié)果大于或等于0.05 IU/mL判斷為HBsAg初篩陽性；HBsAg RLU2>1.00 S/CO，且HBsAg RLU2/HBsAg RLU1>2.00時判斷為HBsAg確診試驗陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1HBsAg低值樣本的分布特征HBsAg定量結(jié)果為0.05～1.00 IU/mL的血清樣本數(shù)占HBsAg總陽性數(shù)的12.59%(596/4 734)。

2.2HBsAg不同低值水平的確診陽性率比較運用HBsAg確診試劑盒檢測低值樣本的總陽性率為72.15%(430/596)，HBsAg 0.05～0.10、>0.10～0.20、>0.20～1.00 IU/mL的確診陽性率分別為11.25%(18/160)、88.35%(182/206)、100.00%(230/230)，3組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=410.98，P<0.01)。

2.3HBsAg “可疑區(qū)間”的建立本試驗中，HBsAg “可疑區(qū)間”定義為HBsAg定量結(jié)果確診陽性率大于5.00%的下限值與確診陽性率小于95.00%的上限值的區(qū)間。HBsAg的“可疑區(qū)間”為0.08～0.14 IU/mL，見表2。

表2　HBsAg不同低值水平的確診陽性率比較

2.4不同年齡0.05～0.14 IU/mL的檢出率和確診陽性率比較不同年齡階段人群的HBsAg陽性樣本中，以小于1歲年齡階段人群在0.05～0.14 IU/mL的檢出率最高，達90.60%(135/149)；確診陽性率最低，為18.06%(13/72)，見圖1。

A：檢出率；B：確診陽性率；1:<1歲;2:1～10歲；3：>10～20歲；4:>20～50歲；5:>50歲；a:P<0.01，b:P<0.05，與小于1歲比較。

圖1不同年齡0.05～0.14 IU/mL的檢出率和確診陽性率比較

3討論

HBsAg定量檢測由于具有高效的治療效果預(yù)測價值而被廣泛關(guān)注。目前，應(yīng)用最為廣泛的HBsAg定量檢測平臺為Abbott Architect檢測系統(tǒng)[12-14]。而在臨床檢測過程中，實驗室工作人員在運用該檢測系統(tǒng)時經(jīng)常會遇到一些HBsAg低值結(jié)果，針對該類結(jié)果的評價和解釋方面給臨床醫(yī)生和實驗室工作人員帶來較大的困擾，尤其在HBsAg單獨陽性，而其他乙肝血清學(xué)標志物為陰性的情況下。因此，為了能合理評價和解釋HBsAg低值結(jié)果提供數(shù)據(jù)支持，作者進行了本次實驗。

在本次實驗中，按照雅培試劑盒說明書給定的HBsAg陽性判斷標準為大于或等于0.05 IU/mL，同時ELISA和CMIA兩種方法檢測HBsAg結(jié)果不一致情況主要集中在0.05～1.00 IU/mL[15]，因此本研究設(shè)定HBsAg檢測結(jié)果在0.05～1.00 IU/mL的樣本為低值樣本。在對該區(qū)間的樣本進行確認試驗后發(fā)現(xiàn)，隨著HBsAg定量結(jié)果的增高，其確診陽性率也逐漸增高，表明HBsAg真陽性的概率與HBsAg定量結(jié)果呈正相關(guān)。對HBsAg定量結(jié)果進行回顧性分析發(fā)現(xiàn)HBsAg低值樣本在HBsAg陽性樣本中占有相當大的比例，根據(jù)在該低值區(qū)間不同水平確診陽性的比例，這可能是由于低水平定量結(jié)果造成。同時，本研究為更好地對低值樣本的臨床意義作出合理的評價和解釋，設(shè)定了“可疑區(qū)間”的概念。在假設(shè)檢驗中，以犯Ⅰ類錯誤小于5.00%的原則下對“可疑區(qū)間”進行定義，即HBsAg定量結(jié)果確診陽性率大于5.00%的下限值與確診陽性率小于95.00%的上限值之間。經(jīng)對低值樣本不同定量結(jié)果的確診陽性率進行統(tǒng)計，表明采用Abbott Architect檢測系統(tǒng)，HBsAg的“可疑區(qū)間”設(shè)定為0.08～0.14 IU/mL。在該區(qū)間內(nèi)，臨床醫(yī)生或?qū)嶒炇夜ぷ魅藛T應(yīng)告知受檢者該檢測結(jié)果所代表的不確定性，應(yīng)建議受檢者注意隨訪或直接做HBsAg確診試驗。同時也應(yīng)注意到，該“可疑區(qū)間”是在本實驗室的工作條件下通過小樣本獲得，可能與真實的“可疑區(qū)間”有一定出入，不同實驗室應(yīng)根據(jù)自身條件進行設(shè)定或?qū)υ搮^(qū)間進行驗證。在對不同年齡階段人群的HBsAg陽性樣本中，0.05～0.14 IU/mL的檢出率進行比較，發(fā)現(xiàn)以小于1歲年齡階段人群的檢出率最高，懷疑可能有以下兩方面的原因：(1)嬰幼兒在采血過程中容易溶血，而溶血原因可能造成一定的非特異性的吸附，或本來由于吖啶酯是辣根過氧化物酶的作用底物，溶血釋放亞鐵血紅素，因其具有過氧化物酶樣作用，可能引起的非特異性吸附造成發(fā)光值本底的增高，引起弱陽性反應(yīng)；(2)可能由于嬰幼兒時期注射乙肝疫苗而造成檢測結(jié)果的升高。因此，在對該年齡階段人群HBsAg低值結(jié)果進行評價和解釋時，應(yīng)了解受檢樣本的狀態(tài)、母親相應(yīng)檢測結(jié)果及其他HBV標志物檢測情況作出評估。

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Analysis on confirmatory test results of 596 cases of HBsAg low value serum samples*

DengAnyan1,CaiYanjuan2,WangDongsheng2,WangQiang2,WangGuangrong2,LiuMin1,LiuPing3,ZhangGuoyuan2△

(1.DepartmentofBloodTransfusion,NanchongMunicipalCentralHospital,Nanchong,Sichuan637000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofNorthSichuanMedicalCollege,Nanchong,Sichuan637000,China;3.Bioscience(Tianjin)BiotechnologyCo.,Ltd.,Tianjin300300,China)

[Abstract]ObjectiveTo analyze the confirmatory test results of low HBsAg value serum samples to provide the basis for clinical rational evaluation and explanation of low HBsAg value results.MethodsThe HBsAg positive results in the Affiliated Hospital of North Sichuan Medical College during 2014 were performed the retrospective analysis.596 serum samples with the HBsAg results of 0.05-1.00 IU/mL by the chemiluminiscence immunoassay(CLIA) were collected and then detected by the Abbott Architect HBsAg confirmatory kit.ResultsThe low HBsAg value samples accounted for 12.59% of HBsAg positive samples.The total positive rate of Abbott Architect HBsAg confirmatory test was 72.15%,in which the positive rates of 0.05-0.10 IU/mL,>0.10-0.20 IU/mL and >0.20-1.00 IU/mL were 11.25%,88.35% and 100.00%,respectively,the differences among different levels were statistically significant(χ2=410.98,P<0.01).The suspicious range of HBsAg detected by CLIA was 0.08-0.14 IU/mL.In different ages of the HBsAg positive samples,the detection rate of 0.05-0.14 IU/mL in the <1 year old group was highest and reached 90.60%(135/149).ConclusionCertain false positive exists in CLIA for detecting HBsAg,especially the evaluation and explanation of HBsAg low value results in the age group of <1 year old should be paid attention to.

[Key words]chemiluminescent assay;hepatitis B surface antigens;low value;confirmatory test

doi:·論著·10.3969/j.issn.1671-8348.2016.04.004

*基金項目：國際科技合作專項項目(2015DFA30420)。

作者簡介：鄧安彥(1972-)，副主任技師，大學(xué)本科，主要從事臨床免疫學(xué)檢驗與研究。△通訊作者，Tel：13508099826；E-mail：13508099826@163.com。

[中圖分類號]R446.6

[文獻標識碼]A

[文章編號]1671-8348(2016)04-0442-03

(收稿日期：2015-07-08修回日期：2015-10-16)