高效液相色譜法同時測定利膽寬腸顆粒中梔子苷和芍藥苷含量

趙　劍，李　靜，蒲清榮，黃　銳，任桂林，羅　群

（瀘州醫學院附屬中醫醫院，四川瀘州　646000）

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高效液相色譜法同時測定利膽寬腸顆粒中梔子苷和芍藥苷含量

趙劍，李靜，蒲清榮，黃銳，任桂林，羅群

（瀘州醫學院附屬中醫醫院，四川瀘州646000）

摘要：目的建立同時測定利膽寬腸顆粒中梔子苷和芍藥苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱為Inertsil ODS-SP C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-0.1%磷酸水溶液（15∶85），等度洗脫，流速1 mL/min，檢測波長230 nm，柱溫40℃。結果芍藥苷和梔子苷進樣量分別在0.494～3.950 μg和0.684～5.470 μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r=0.999 7），平均加樣回收率分別為97.67%和98.83%，RSD分別為0.73%和1.16%（n=6）。結論該法準確可靠、專屬性強、重復性好，可作為測定利膽寬腸顆粒中梔子苷和芍藥苷含量的可靠方法。

關鍵詞：利膽寬腸顆粒；高效液相色譜法；芍藥苷；梔子苷中圖分類號：R284.1；R286.0

文獻標識碼：A

文章編號：1006-4931（2016）05-0054-03

利膽寬腸顆粒是瀘州醫學院附屬中醫醫院院內制劑，主要由白芍、梔子、黃芩、厚樸、大黃、青皮等多味中藥組方，具有清熱利膽、寬腸理氣的功效，用于清除腸道積滯以及膽道手術前準備，經臨床應用多年，療效顯著。為了更好地控制其質量，根據處方中藥材所含化學成分及其理化性質，結合中醫藥理論，按照《醫療機構制劑注冊管理辦法》的要求，采用高效液相色譜（HPLC）法同時測定方中主藥白芍中芍藥苷和梔子中梔子苷的含量［1-2］，為建立完善的質量標準提供參考依據。

1　儀器與試藥

SPD-20A型高效液相色譜儀（美國科學系統公司）；JPGT0328型超聲提取器（武漢嘉鵬電子有限公司）；NRB17S3W型電冰箱（日本松下公司），ZK072型電熱真空干燥箱（上海實驗儀器廠）；JA203H型電子天平（常州幸運電子設備有限公司）。

芍藥苷對照品（批號為110736-201337），梔子苷對照品（批號為110749-201115），均購于中國食品藥品檢定研究院；白芍、梔子、黃芩、厚樸、大黃、青皮等購于瀘州市寶光中藥飲片公司，經瀘州市藥檢所中藥室袁常珍主任鑒定，均符合2010年版《中國藥典（一部）》項下規定；利膽寬腸顆粒（瀘州醫學院附屬中醫醫院，批號為20140617，20140618，20140619）；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑為分析純，水為娃哈哈純凈水。

2　含量測定

2.1色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Inertsil ODS-SP C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸水（15∶85），等度洗脫；流速：1 mL/min；檢測波長：230 nm；柱溫：40℃。理論板數按芍藥苷峰計算應不低于4 000［3-5］。在此色譜條件下，色譜圖見圖1。

2.2溶液制備

稱取芍藥苷、梔子苷對照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1 mL含芍藥苷0.208 mg、梔子苷0.274 mg的混合對照品溶液。取本品2 g，精密稱定，加稀乙醇25 mL，超聲處理30 min，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得供試品溶液。按處方量并以相同的工藝制備不含白芍和梔子的陰性對照樣品，按供試品溶液的制備方法處理，得陰性對照品溶液。

2.3方法學考察

線性關系考察：分別精密吸取上述對照品溶液2.5，5，10，15，20 μL，注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定，將峰面積（A）與進樣量（C）進行線性回歸，得芍藥苷和梔子苷的回歸方程為A=1×106C-48 034，r=0.999 7（n=5）；A=1×106C-110 560，r=0.999 7 （n=5）。結果表明，芍藥苷和梔子苷對照品進樣量在0.494～3.950 μg和0.684～5.470 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

圖1　高效液相色譜圖

專屬性試驗：精密吸取對照品、供試品及陰性對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀進行測定。結果陰性對照品溶液色譜中，在與對照品及供試品溶液色譜對應保留時間處無相應色譜峰，表明其他組分對測定芍藥苷、梔子苷無干擾，色譜圖見圖1。

精密度試驗：精密吸取同一對照品溶液，連續重復進樣5次，每次進樣10 μL，測定峰面積。結果芍藥苷和梔子苷峰面積的RSD分別為1.20%和1.13%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：取同一供試品溶液，于0，2，4，6，8，12 h時分別進樣10 μL，測定峰面積。結果芍藥苷和梔子苷峰面積的RSD分別為1.06%和1.15%（n=6），表明供試品溶液在12 h內穩定。

重復性試驗：取同一批樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液，以擬訂色譜條件測定每份樣品中芍藥苷和梔子苷的含量。結果芍藥苷的平均質量分數為2.425 mg/g，RSD為1.02%（n=6），梔子苷的平均質量分數為4.365 mg/g，RSD為1.16%（n=6），表明該方法重復性良好。

加樣回收試驗［6］：精密稱取已測定含量（芍藥苷為2.427 mg/g，梔子苷為4.363 mg/g）的利膽寬腸顆粒6份，每份約0.5 g，分別精密加入一定質量濃度的混合對照溶液，按供試品溶液制備方法制備溶液，按擬訂色譜條件分別進樣測定，計算回收率。結果見表1。

表1　芍藥苷和梔子苷加樣回收試驗結果（n=6）

2.4樣品含量測定

取利膽寬腸顆粒3批（批號為20130217，20130218，20130219），精密稱定，依法制成供試品溶液，利用外標兩點法測定，計算芍藥苷和梔子苷含量。結果見表2。

表2　3批樣品中芍藥苷和梔子苷含量測定結果

3　討論

關于流動相的選擇，文獻［7-8］采用梯度洗脫方式獲得了理想的分離度。本試驗中先后用不同比例的乙腈-0.1%磷酸水溶液為流動相，結果表明，以乙腈-0.1%磷酸（15∶85）等度洗脫芍藥苷峰已達到基線分離，理論板數按芍藥苷峰計算不少于4 000，峰形對稱，既節省時間，又得到好的分離效果，故選其為本試驗流動相。

本試驗中所建立的方法靈敏度高、重復性好、專屬性強，可用于控制利膽寬腸顆內在質量。

參考文獻：

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［2］李娟，趙迪，周悌強，等.HPLC法同時測定補肺益腎顆粒中淫羊藿苷、橙皮苷、芍藥苷［J］.中成藥，2012，34（12）：2 335.

［3］吳靜，陸紅.舒膽通顆粒的質量標準研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19（7）：89.

［4］程巧鴛，陳碧蓮.明目地黃丸（濃縮丸）質量標準研究［J］.中成藥，2012，34（6）：1 090.

［5］李中娥.HPLC法同時測定婦科分清丸中阿魏酸和芍藥苷［J］.中成藥，2012，34（3）：487.

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［7］馮發青，王恩源，伍慶，等.HPLC法同時測定麥味地黃膠囊中馬錢苷、芍藥苷和丹皮酚［J］.中成藥，2012，34（12）：2 239.

［8］陳紹成，石燕紅，楊娜，等.重慶后山梔子和國內其他產區梔子主要藥效成分含量對比［J］.中國實驗方劑學雜志，2012，18（22）：131.

Simultaneous Content Determination of Paeoniflorin and Geniposide in Lidan Kuanchang Granules by HPLC

Zhao Jian，Li Jing，Pu Qingrong，Huang Rui，Ren Guilin，Luo Qun
（Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital of Luzhou Medical College，Luzhou，Sichuan，China 646000）

Abstract：Objective To establish a method for determination of paeoniflorin and geniposide in Lidan Kuanchang Granules.Methods The column was Inertsil ODS-SP C18column（250 mm×4.6 mm，5 μm）；mobile phase of acetonitrile and 0.1%aqueous phosphoric acid（15∶85），isocratic flow rate of 1 mL/min；detection wavelength was 230 nm，column temperature was 40℃.Results The linear range of peoniflorin was 0.494-3.950 μg（r=0.999 8），with the average recovery of 97.67%，RSD=0.73%（n=6）；The linear range of geniposide was 0.684-5.470 μg（r=0.999 8），with the average recovery of 98.83%，RSD=1.16%（n=6）.Consclusion The method is accurate，reliable，specific and reproducible，and can be used for the quality control of Lidan Kuanchang Granules.

Key words：Lidan Kuanchang Granules；HPLC；peoniflorin；geniposide

作者簡介：趙劍（1975-），男，漢族，副主任中藥師，主要從事中藥制劑及質量標準研究，（電話）0830-3162253（電子信箱）562701410@qq.com。

收稿日期：（2015-07-28）