動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫技術(shù)提取金蕎麥總多酚工藝優(yōu)化研究

呂　艷，袁建平，崔秀麗，李莉美

（1.云南省曲靖市第一人民醫(yī)院，云南曲靖　655000；2.云南曲靖格力康生物科技發(fā)展有限公司，云南曲靖　655000）

?

動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫技術(shù)提取金蕎麥總多酚工藝優(yōu)化研究

呂艷1，袁建平1，崔秀麗2，李莉美2

（1.云南省曲靖市第一人民醫(yī)院，云南曲靖655000；2.云南曲靖格力康生物科技發(fā)展有限公司，云南曲靖655000）

摘要：目的研究金蕎麥動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫提取工藝。方法以金蕎麥總多酚、出膏率為指標(biāo)，采用L9（34）正交試驗(yàn)法考察了料液比、提取溫度、提取時(shí)間、溶劑濃度對(duì)金蕎麥總多酚含量及出膏率的影響。結(jié)果影響金蕎麥總多酚得率的主次因素為料液比、提取溫度、提取時(shí)間、溶劑濃度。最佳工藝條件為3倍藥材量的50%乙醇溶液動(dòng)態(tài)循環(huán)提取，提取溫度50℃，提取時(shí)間為2 h。結(jié)論在此最佳工藝條件下，金蕎麥總多酚含量為48.1%，比傳統(tǒng)滲漉法和回流提取法效率高。

關(guān)鍵詞：金蕎麥；總多酚；動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫

金蕎麥為蓼科植物Fagopyrum dibotrys（D.Don）Hara.的干燥根莖，性涼，味微辛、澀，具有清熱解毒、排膿祛瘀之功效，臨床主要用于治療肺膿瘍、肺炎、扁桃體周圍膿腫［1-2］。近年來，許多學(xué)者對(duì)其有效成分進(jìn)行的研究表明，金蕎麥的主要含有多酚類、甾體類、三萜類、苷類等多種化學(xué)成分，其中多酚類是最重要的活性成分，為一類原花色素縮合性單寧混合物［3-5］。中藥動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫提取技術(shù)是在增加藥材比表面積的情況下，利用機(jī)械手段，采用強(qiáng)制循環(huán)方式增加固-液相接觸，從而提高提取效率和提取質(zhì)量，有助于改善工作環(huán)境、節(jié)約能源［6］。本研究中采用動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫提取新技術(shù)對(duì)金蕎麥提取工藝進(jìn)行了系統(tǒng)研究，并與普通滲漉法和回流提取法進(jìn)行了比較，確定了金蕎麥動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫提取的工藝條件。現(xiàn)報(bào)道如下。

1　儀器與試藥

1.1儀器

TQM-V3型動(dòng)態(tài)多功能提取、濃縮、蒸餾設(shè)備生產(chǎn)線（溫州天龍輕工設(shè)備有限公司）；WBZ-6型微波真空干燥機(jī)（貴陽新奇微波工業(yè)有限責(zé)任公司）；TU-1901型紫外-可見分光光度儀（北京普析通用儀器有限公司）；XK3126型電子天平（梅特勒-托利多儀器＜上海>有限公司）。

1.2試藥

純化水；分析純乙醇；金蕎麥（野生）；沒食子酸對(duì)照品（供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110721-200512）；Folin-Ciocalteu試劑（上海尚誼化工科技有限公司）。

2　方法與結(jié)果

2.1金蕎麥總多酚含量測(cè)定

2.1.1溶液制備

稱取沒食子酸對(duì)照品適量，精密稱定，加水制成每1 mL含沒食子酸0.25 mg的溶液，作為對(duì)照品貯備液。取金蕎麥總多酚提取物40 mg，精密稱定，置100 mL棕色容量瓶中，加水50 mL，超聲處理（功率250 W，頻率33 kHz）10 min，冷卻至室溫，加水至刻度，搖勻，濾過，得供試品溶液。

2.1.2方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：分別精密量取對(duì)照品溶液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，置100 mL棕色容量瓶中，加水50 mL與5 mL Folin-Ciocalteu試劑，精密量取20%碳酸鈉溶液15 mL，加水稀釋至刻度，搖勻，室溫放置2 h。以相應(yīng)試劑為空白，于760 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），吸光度為縱坐標(biāo)（Y）進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=10.64 X-0.181，r=0.999 4（n=6）。結(jié)果表明，沒食子酸質(zhì)量濃度在1.355～8.130 μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液2.0 mL，置100 mL棕色容量瓶中，依法測(cè)定含量，平行測(cè)定5次。結(jié)果的RSD為1.23%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：于溶液制備后0，1，2，4，6 h時(shí)檢測(cè)同一供試品溶液的吸光度。結(jié)果的RSD為1.87%（n=5），表明供試品溶液在6 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批金蕎麥樣品，制備5份供試品溶液，依法測(cè)定。結(jié)果的RSD為1.09%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取已知含量的同一批樣品6份，分別加入沒食子酸對(duì)照品適量，依法測(cè)定，計(jì)算總多酚含量。結(jié)果平均回收率為101.44%，RSD為2.10%（n=6）。見表1。

表1　總多酚加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.1.3含量測(cè)定方法

精密吸取供試品溶液2.0 mL，置100 mL棕色容量瓶中，照線性關(guān)系考察項(xiàng)下方法，自“加水5 mL與5 mL Folin Ciocalteu試劑”起，依法測(cè)定吸光度，代入回歸方程計(jì)算含量，即得。紫外吸收光譜圖見圖1。

圖1　紫外吸收光譜圖

2.2金蕎麥總多酚提取條件優(yōu)選

2.2.1提取方法篩選

稱取金蕎麥100 g，粉碎，分別用滲漉法、乙醇回流提取法、乙醇動(dòng)態(tài)循環(huán)提取法，提取時(shí)間均為1 h，濾過，合并濾液，濃縮，干燥。依法測(cè)定總多酚含量和出膏率，結(jié)果見表2。

表2　3種提取方法的出膏率和總多酚含量比較

2.2.2正交試驗(yàn)優(yōu)提取工藝

因素水平設(shè)計(jì)：根據(jù)金蕎麥特性，采用乙醇動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫提取，其影響因素主要有料液比（因素A）、提取溫度（因素B，℃）、提取時(shí)間（因素C，h）、溶劑濃度（因素D，%）。采用L9（34）正交表優(yōu)化提取條件，重點(diǎn)考察上述因素，以總多酚含量和出膏率為考察指標(biāo)，見表3。

表3　提取工藝優(yōu)選因素水平表

正交試驗(yàn)：分別取金蕎麥300 g，共9份，按L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，所得提取液回收乙醇，濃縮，干燥，即得，見表4。

表4　提取工藝優(yōu)選L9（34）正交表

結(jié)果分析：以出膏率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，由直觀分析可知，影響金蕎麥出膏率提取效果的因素順序?yàn)樘崛囟?料液比>提取時(shí)間>溶劑濃度；經(jīng)方差分析，提取溫度濃度對(duì)提取效果有顯著影響，見表5。故最佳工藝為A1B3C2D1。以總多酚含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，由直觀分析可知，影響金蕎麥總多酚提取效果的因素順序?yàn)樘崛r(shí)間>提取溫度>料液比>溶劑濃度；經(jīng)方差分析，提取時(shí)間對(duì)提取效果有顯著影響，見表6。故最佳工藝為A1B2C3D1。綜合金蕎麥中總多酚含量、出膏率正交提取結(jié)果的直觀分析、方差分析，結(jié)合大生產(chǎn)可能性，并從總多酚含量高低、降低成本角度考慮，最終確定金蕎麥總多酚提取物工藝為A1B2C3D1。

表5　正交試驗(yàn)出膏率結(jié)果方差表

表6　正交試驗(yàn)總多酚含量測(cè)定結(jié)果方差表

2.3驗(yàn)證試驗(yàn)

稱取金蕎麥藥材10 kg，按照上述最佳提取工藝條件提取，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果測(cè)得總多酚平均含量為48.1%，RSD為2.44%（n=3）。

3　討論

近年來在金蕎麥提取工藝研究過程中，主要以乙醇為溶劑，采用滲漉法、熱回流法或冷浸法等傳統(tǒng)方法［7-8］，但存在提取工藝時(shí)間長(zhǎng)、耗能大、有效成分損失多、提取效率不高等缺點(diǎn)［9］。本研究中采用動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫提取新技術(shù)對(duì)金蕎麥總多酚提取物進(jìn)行工藝優(yōu)化，選擇沒食子酸作為對(duì)照品測(cè)定總多酚的含量。依據(jù)金蕎麥中總多酚的特性，提取溫度、提取溶劑濃度及提取時(shí)間是影響提取物總多酚含量及出膏率的主要因素。確定了金蕎麥最佳動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫提取藝條件為：取金蕎麥藥材，粉碎，用藥材3倍量的50%乙醇動(dòng)態(tài)循環(huán)提取2 h，提取溫度為50℃，回收乙醇，干燥，即得。

與普通滲漉法和回流提取法相比，由于動(dòng)態(tài)循環(huán)提取工藝在整個(gè)提取過程保持恒定溫度，使物料受熱均勻，藥液質(zhì)量得到提高，并且不用對(duì)藥材進(jìn)行煮沸處理，僅能耗就可節(jié)約50%以上，且其整條生產(chǎn)線的物料采用管道化真空抽料方式，可避免物料在管道的黏滯，并可有效利用設(shè)備，使設(shè)備體積減小，生產(chǎn)過程更加安全［10-11］。因此，動(dòng)態(tài)循環(huán)控溫提取金蕎麥總多酚提取效率高，有效成分損失少，工藝操作簡(jiǎn)單，成本低，得率高，為金蕎麥總多酚的工業(yè)化生產(chǎn)提供了科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：203.

［2］谷勇，侯杰榮，何穎，等.金蕎麥藥用研究進(jìn)展［J］.實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2011，27（9）：646-647.

［3］邵萌，楊躍輝，高慧媛，等.金蕎麥的化學(xué)成分研究［J］.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，22（2）：100-102.

［4］唐宇，賈洪鋒，孫俊秀，等.金蕎麥有效成分及含量變化研究［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，53（3）：672-675.

［5］盛華剛，朱立俏，林桂濤.金蕎麥的化學(xué)成分與藥理作用研究進(jìn)展［J］.西北藥學(xué)雜志，2011，26（2）：156-158.

［6］王穎玉，潘立.動(dòng)態(tài)連續(xù)階段逆流提取工藝分析與研究［J］.浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，35（1）：105-108.

［7］楊莉，丁安偉，張麗，等.正交試驗(yàn)法優(yōu)選金蕎麥的提取工藝［J］.中國(guó)藥業(yè)，2009，18（1）：32-33.

［8］李華磊，曾小青，趙駿.正交試驗(yàn)優(yōu)化金蕎麥抗癌成分提取工藝的研究［J］.現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2011，25（2）：61-63.

［9］呂陽成，駱廣生，戴猷元.中藥提取工藝研究進(jìn)展［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)，2001，32（5）：232-235.

［10］韓麗，謝秀瓊，楊明，等.丹參動(dòng)態(tài)階段連續(xù)逆流提取工藝研究［J］.中成藥，2009，31（5）：721-724.

［11］沈善明.論中藥單罐分批和多級(jí)逆流連續(xù)浸出［J］.醫(yī)藥工程設(shè)計(jì)雜志，2001，22（5）：6-9.

中圖分類號(hào)：TQ461；R282.71

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-4931（2016）07-0021-04

作者簡(jiǎn)介：呂艷（1977-），女，大學(xué)本科，主管藥師，研究方向?yàn)橹兴幮轮苿⑿录夹g(shù)和金蕎麥的研究開發(fā)，（電子信箱）67430552@qq.com。

收稿日期：（2015-12-05）