2013版ASCO/CAP HER2檢測指南的更新對乳腺癌HER2基因擴增狀態(tài)的影響

杜嫻娟　申敬偉

(安陽市腫瘤醫(yī)院/河南科技大學第四附屬醫(yī)院 病理科　河南 安陽　455000)

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2013版ASCO/CAP HER2檢測指南的更新對乳腺癌HER2基因擴增狀態(tài)的影響

杜嫻娟申敬偉

(安陽市腫瘤醫(yī)院/河南科技大學第四附屬醫(yī)院 病理科河南 安陽455000)

【摘要】目的比較2007版與2013版ASCO/CAP指南對乳腺癌人類表皮生長因子受體2(HER2)基因擴增狀態(tài)的影響。方法對ASCO/CAP HER2檢測指南更新之前的115例乳腺癌熒光原位雜交(FISH)檢測樣本的HER2狀態(tài)進行回顧性分析，分別根據2007版與2013版指南的HER2判讀標準分析其HER2基因擴增狀態(tài)。結果采用FISH檢測的115例樣本中，根據2007版指南判定53例(46.1%)為陽性，58例(50.4%)為陰性，4例(3.5%)為不確定；根據2013版新標準重新判定55例(47.8%)為陽性，53例(46.1%)為陰性，7例(6.1%)為不確定。經χ2檢驗，2013版指南更新后判定為不確定的例數較2007版有顯著性增長(6.1%比3.5%，P<0.001)。結論2013版指南發(fā)表的HER2判讀標準結合了HER2/CEP17比值及平均HER2基因拷貝數，對一些復雜信號作出了更加明確的指示，指南更新后HER2基因擴增的不確定例數有顯著性增長。

【關鍵詞】HER2；熒光原位雜交；乳腺癌；ASCO/CAP指南

乳腺癌為女性發(fā)病第1位的惡性腫瘤，全國腫瘤登記地區(qū)2012年女性乳腺癌的發(fā)病率為42.55/10萬，同期女性乳腺癌的死亡率為10.24/10萬[1]。人類表皮生長因子受體2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)基因即c-erbB-2基因，是定位于人類17號染色體(Chr17)長臂(17q12)上的原癌基因，該基因在20%～30%的乳腺癌患者中有擴增或過表達[2]。經研究證實，HER2陽性的乳腺癌浸潤性強，無病生存期短，預后差，其基因擴增與乳腺癌患者的復發(fā)、轉移有關，且放療、化療效果欠佳[2-7]。正確檢測和評定乳腺癌的HER2蛋白表達和基因擴增狀態(tài)對乳腺癌的臨床治療和預后判斷至關重要[8]。推薦采用免疫組織化學(IHC)法檢測HER2受體蛋白的表達水平，應用原位雜交(in situ hybridization，ISH)法檢測HER2基因擴增水平。ISH包括熒光ISH(fluorescence in situ hybridization，F(xiàn)ISH)和亮視野ISH。常用的亮視野ISH方法有顯色ISH(chromogenic in situ hybridization，CISH)[9-10]和銀增強ISH(silver-enhanced in situ hybridization，SISH)[11-12]。但IHC由于其經濟性，國內IHC一般作為初篩，其結果不確定時(IHC 2+)需采用FISH進一步確認[13]。由于IHC無法區(qū)分HER2蛋白為中度陽性的患者是否存在HER2基因擴增，所以直接檢測HER2基因擴增水平的FISH被公認為是檢測乳腺癌HER2基因擴增的“金標準”。2013年美國臨床腫瘤學會/美國病理醫(yī)師學院(ASCO/CAP)公布了在2007版ASCO/CAP HER2檢測指南[14]基礎上的更新版本[3]。本研究對115例乳腺癌FISH檢測樣本的HER2狀態(tài)進行回顧性分析，分別根據2007版與2013版指南的HER2判讀標準分析其HER2基因擴增狀態(tài)，旨在探討2013版ASCO/CAP指南的更新對HER2基因擴增狀態(tài)的影響。

1資料與方法

1.1一般資料115例乳腺癌樣本為2012年7月至2013年12月在安陽市腫瘤醫(yī)院病理科完成的HER2基因FISH檢測樣本。所有乳腺癌患者均為女性，年齡27～73歲，中位年齡49歲。每例均選取石蠟包埋組織連續(xù)切片3張，厚度為3 μm。1張經HE染色確定腫瘤區(qū)域，1張用于FISH檢測，1張備用，按同一組織方向撈片。

1.2儀器試劑熒光顯微鏡為OLYMPUS BX51，HER2/neu探針和胃蛋白酶購自廣州安必平醫(yī)藥科技股份有限公司，HER2/CEP17(第17號染色體著絲粒)雙色探針定位于17號染色體，包含紅色的17q11.2-q12探針和綠色17p11.1-q11.1探針，分別用來計算平均HER2基因拷貝數和平均CEP17染色體拷貝數。

1.3實驗方法FISH檢測：石蠟切片于65 ℃烤片3 h。常規(guī)脫蠟，二甲苯30 min，100%乙醇脫二甲苯10 min，100%乙醇10 min，100%、85%、75%乙醇中各3 min，蒸餾水3 min，97 ℃蒸餾水煮片25 min，再于胃蛋白酶溶液中消化，2×SSC洗滌2次各5 min，過后依次經75%、85%和100%乙醇脫水各3 min后自然干燥。將探針混合液滴加于切片上，85 ℃變性5 min，37 ℃雜交過夜。第2天切片在37 ℃的2×SSC中洗10 min，過后在37 ℃的0.1% NP-40/2×SSC洗液中洗5 min，70%乙醇3 min后避光干燥，DAPI復染，封片后在熒光顯微鏡下觀察。

1.4結果判讀根據HE染色結果確定浸潤性腫瘤區(qū)域，選擇腫瘤細胞進行信號計數，分別由兩個小組進行判讀。2007版ASCO/CAP判讀標準[14]：雙探針HER2/CEP17比值>2.2或單探針平均HER2拷貝數/細胞>6.0判讀為HER2陽性；雙探針HER2/CEP17比值為1.8～2.2或單探針平均HER2拷貝數/細胞為4.0～6.0，則為結果不確定；雙探針HER2/CEP17比值<1.8或單探針平均HER2拷貝數/細胞<4.0判讀為HER2陰性。2013版ASCO/CAP判讀標準[3]，HER2陽性為：雙探針HER2/CEP17比值≥2.0，或者HER2/CEP17比值<2.0，且平均HER2拷貝數/細胞≥6.0；單探針平均HER2拷貝數/細胞≥6.0。HER2陰性為：雙探針HER2/CEP17比值<2.0且平均HER2拷貝數/細胞<4.0；單探針平均HER2拷貝數/細胞<4.0。HER2結果不確定：雙探針HER2/CEP17比值<2.0且平均HER2拷貝數/細胞為<6.0但≥4.0；單探針平均HER2拷貝數/細胞為<6.0但≥4.0。兩版指南判讀標準見表1。

1.5統(tǒng)計學方法應用統(tǒng)計學軟件SPSS 11.5進行數據分析，組間比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

表1　2007版與2013版ASCO/CAP指南的HER2基因擴增判讀標準

2結果

115例FISH檢測樣本經2007版與2013版指南判讀結果比較見表2。其中，2007版判讀不確定的有1例(0.9%)經2013版判為陽性，有2例(1.7%)判為陰性；2007版判讀陰性的有1例(0.9%)經2013版判為陽性，有6例(5.2%)判為不確定。

表2　115例FISH檢測樣本經2007版與2013版指南

3討論

2013版ASCO/CAP HER2檢測指南的更新，從僅評估HER2/CEP17比值到同時或更加關注HER2基因拷貝數。FISH雙探針檢測中加入CEP17探針的目的是為了在檢測HER2基因的同時，獲得第17號染色體的數目，從而將第17號染色體的非整倍體和單純的HER2基因擴增，尤其是低水平擴增區(qū)分開。但近年來的研究顯示，整條第17號染色體的多體罕見，CEP17的擴增并不能代表整條第17號染色體多體。部分乳腺癌中的第17號染色體存在HER2基因和著絲粒的共同擴增。越來越多的學者認為，與HER2/CEP17比值相比，HER2拷貝數對于HER2擴增的判斷可能更為重要[15]。

2013版指南把陽性標準HER2/CEP17比值從2.2降為2.0，又結合平均HER2基因拷貝數，將HER2/CEP17比值≥2.0，或HER2/CEP17比值<2.0，且平均HER2拷貝數/細胞≥6.0的樣本判讀為陽性。這一更新使得一部分采用2007版指南判讀HER2基因擴增狀態(tài)為不確定及陰性的患者獲得了潛在的靶向治療機會。本研究結果中，2007版指南判讀的1例(0.9%)不確定和1例(0.9%)陰性經2013版指南判為陽性。2013指南對不確定標準也作了更新：雙探針HER2/CEP17比值<2.0且平均HER2拷貝數/細胞為<6.0但≥4.0判讀為不確定。本研究結果中，2007版指南判讀的2例(1.7%)不確定經2013版指南判為陰性，2007版的6例(5.2%)陰性經2013版判為不確定。

采用FISH檢測的115例樣本中，根據2007版指南判定53例(46.1%)為陽性，58例(50.4%)為陰性，4例(3.5%)為不確定；根據2013版新標準重新判定55例(47.8%)為陽性，53例(46.1%)為陰性，7例(6.1%)為不確定。經χ2檢驗，2013版指南更新后判定為不確定的例數較2007版有顯著性增長(P<0.001)。這與國外Sapino等[16]的大樣本研究報道一致(2.4%比12.3%)。

總之，本研究簡單分析了2013版ASCO/CAP HER2檢測指南的更新對乳腺癌HER2基因擴增狀態(tài)的影響，但限于樣本量少，未進行更加詳細的闡述，后續(xù)有待于擴大樣本量做更加完善的分析和探討。

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Influence of the 2013 ASCO/CAP HER2 guideline updates onHER2 FISH testing on breast cancer

Du Xianjuan, Shen Jingwei

(DepartmentofPathology,AnyangTumorHospital/theFourthAffiliatedHospitalofHenanScienceand

TechnologyUniversity,Anyang455000,China)

【Abstract】ObjectiveTo compare the influence of 2007 and 2013 ASCO/CAP HER2 guideline on HER2 FISH testing on breast cancer. MethodsWe reviewed the 115 HER2 fluorescence in situ hybridization (FISH) results of before the HER2 guidelines updates and classified them according to both the 2007 and 2013 guidelines as negative, positive, or equivocal. ResultsOf 115 HER2 FISH results, 53 (46.1%) were positive, 58 (50.4%) were negative and 4 (3.5%) were equivocal when reassessed by 2007 guidelines. Of 115 HER2 FISH results, 55 (47.8%) were positive, 53 (46.1%) were negative and 7 (6.1%) were equivocal when reassessed by 2013 guidelines. There was a significant increase in the number of HER2 FISH equivocal results after the guideline updates (6.1% vs 3.5%, P<0.001). ConclusionImplementation of the 2013 ASCO/CAP HER2 guideline updates resulted in an increase in HER2 FISH equivocal results, which can be attributed to HER2 copy number, regardless of the HER2/CEP17 ratio.

【Key words】human epidermal growth factor receptor 2; fluorescence in situ hybridization; breast cancer; ASCO/CAP HER2 guideline

(收稿日期：2015-11-23)

【中圖分類號】R 743.33

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.04.010

通訊作者：申敬偉，E-mail：403555736@qq.com。