體外反搏治療對急性心肌梗死患者血漿miRNA-133水平的影響

黃　穎，趙春麗，韋永強

(廣西壯族自治區民族醫院，廣西 南寧 530001)

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體外反搏治療對急性心肌梗死患者血漿miRNA-133水平的影響

黃穎，趙春麗，韋永強

(廣西壯族自治區民族醫院，廣西 南寧 530001)

[摘要]目的觀察急性心肌梗死患者血漿miRNA-133(miR-133)表達情況和體外反搏治療(ECP)對其水平的影響。方法將60例急性心肌梗死經皮冠狀動脈介入(PCI)術后患者隨機分為治療組和對照組各30例，并選擇同期門診健康體檢者30例作為空白組。所有受試者均于入院時抽血，采用實時熒光定量PCR (qRT-PCR)法檢測血漿miR-133水平。治療組和對照組給予常規冠心病二級預防藥物治療，治療組在PCI術后第3周加用ECP，1 h/(次·d)，每周5次，為期7周；2組均于治療9周后分別測定患者血漿miR-133表達水平，評估心絞痛癥狀改善情況，同時觀察超聲心動圖心功能各項指標變化情況。結果與空白組比較，治療組急性心肌梗死患者血漿miR-133表達水平明顯升高(P<0.05)；治療9周后，治療組血漿miR-133含量明顯低于對照組(P<0.05)，心絞痛癥狀緩解情況及左室射血分數(LVEF)、收縮末體積(ESV)、舒張末體積(EDV)改善情況均明顯優于對照組(P均<0.05)。結論血漿miR-133水平可作為急性心肌梗死患者發病和病情進展的一項新型標志物；ECP治療可降低急性心肌梗死患者血漿miR-133表達水平，明顯改善患者心功能。

[關鍵詞]體外反搏；miRNA-133；急性心肌梗死

急性心肌梗死是常見的、病死率極高的心血管疾病急重癥。體外反搏治療(ECP)由于其經濟無創傷、無明顯不良反應等優點，近年來被廣泛應用于心肌梗死、動脈粥樣硬化性等疾病的一級和二級預防[1]。miRNA是內源性非編碼蛋白質的單鏈調控性小RNA，與心肌肥厚、心律失常、心肌梗死等心血管疾病的發生發展密切相關[2]。在急性心肌梗死大鼠模型和冠心病患者缺血心肌組織中已檢測到miRNA-133(miR-133)表達發生動態改變[3]。近年來發現外周循環血中miRNA-1、miRNA-141、miRNA-210、miRNA-335等多個miRNA已成為提示腫瘤、敗血癥等病情進展和預后的新型生物學標志物[4]。本研究以ECP和miR-133為研究的切入點，選擇60例急性心肌梗死經皮冠狀動脈介入(PCI)術后患者作為研究對象，檢測患者入院時以及ECP治療后其血漿miR-133水平變化，以探討ECP對心肌梗死患者血漿miR-133的影響。

1臨床資料

1.1一般資料選擇2012年1月—2013年9月在本院心內科住院行PCI術的急性心肌梗死患者60例，患者均為第1次診斷為急性心肌梗死[5]：血漿肌酸激酶水平較正常增加2倍以上或心肌肌鈣蛋白Ⅰ水平大于0.1 ng/mL；并同時具備下列至少1項：胸痛持續時間>20 min或動態心電圖(ECG)診斷的變化包括新的病理性Q波、ST段和T波改變。將患者隨機分為2組：治療組30例，男16例，女14例；年齡(51.2±12.2)歲；體質量指數(BMI)(23.3±3.2)kg/m2；TG(1.66±1.26)mmol/L；糖化血紅蛋白(HbA1c)(7.13±1.20)%；收縮壓(165.3±28.5)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)。對照組30例，男15例，女15例；年齡(53.1±12.2)歲；BMI(23.6±3.3)kg/m2；TG(1.63±1.28)mmol/L；HbA1c(7.23±1.20)%；收縮壓(158.6±23.2)mmHg。同時納入同期門診健康體檢者30例作為空白組，均無冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、心力衰竭、心律失常和心肌病等心臟疾病病史，無惡性腫瘤及腎臟替代治療；男16例，女14例；年齡(53.3±12.3)歲；BMI(23.4±3.6)kg/m2；TG(1.56±1.29)mmol/L；HbA1c(7.23±1.22)%；收縮壓(158.2±23.2)mmHg。3組受試者年齡、BMI、血脂、HbA1c、收縮壓比較差異均無統計學意義(P均>0.05)，具有可比性。

1.2治療方法治療組和對照組均行PCI術，術后均給予常規冠心病二級預防藥物治療，治療組在此基礎上于PCI術后第3周加用ECP治療，1 h/(次·d)，每周5次，為期7周。所有受試者均簽署知情同意書。

1.3檢測指標

1.3.1實時熒光定量PCR法檢測受試者血漿miRNA-133表達情況受試者均于入院時采集肘靜脈全血4 mL，以3.8%枸櫞酸鈉抗凝，4 ℃ 3 000 r/min離心10 min，收集血漿，分裝后-20 ℃凍存，實驗前取出室溫解凍待測。治療組和對照組于治療9周后再次取血檢測。具體方法：取1 mL血漿以Trizol(Invitrogen)法提取血漿總RNA，紫外分光光度計測吸光度值，計算RNA濃度，瓊脂糖電泳鑒定RNA的完整性。采用逆轉錄試劑盒(Fermentas)進行逆轉錄。以β-actin為內參照，具體引物序列及擴增片段見表1。將上述PCR產物連接到pMDl8-T質粒載體(Invitrogen公司)上，增菌后用質粒提取試劑盒(上海生工公司)提取質粒DNA，對質粒DNA酶切鑒定后進行序列測定(上海英駿生物技術有限公司)。將含有目的擴增片段的質粒DNA稀釋至1×107，1×106，1×105，1×104，1×103copies/μL，測定定量曲線和標準曲線，從而得出治療組miR-133相對于對照組增加或減少的倍數。

表1　miR-133及β-actin基因PCR引物

1.3.2觀察患者心絞痛癥狀改善情況和超聲心動圖心功能各項指標變化情況治療9周后評估治療組和對照組患者心絞痛癥狀情況，并于治療第2周和治療9周后采用超聲心動圖(Philips iE33型彩色多普勒顯像儀，二維圖像采集用S4矩陣探頭，頻率2～4 MHz)測定心功能收縮和舒張功能各項指標[包括左室射血分數(LVEF),收縮末體積(ESV),舒張末體積 (EDV)]。

2結果

2.1受試者血漿miR-133表達情況入院時，治療組和對照組患者血漿miR-133表達水平均明顯高于空白組(P均<0.05)；治療9周后，治療組血漿miR-133表達水平明顯低于對照組(P<0.05)。見圖1。

圖1　3組血漿miR-133表達情況比較

2.2患者治療后心絞痛癥狀和超聲心動圖各指標情況比較治療9周后，治療組6例(20%)出現心絞痛癥狀，但持續時間明顯縮短；對照組14例(47%)出現心絞痛癥狀，2組比較差異有統計學意義(P<0.05)。治療組超聲心動圖各指標改善情況均優于對照組(P均<0.05)，見表2。

表2　2組治療9周后超聲心動圖結果比較±s)

注：①與治療第2周比較，P<0.05；②與對照組比較，P<0.05。

3討論

進入21世紀以來，缺血性心臟病的治療已經從單一的血管擴張劑治療過渡到復雜多藥物結合和ECP、神經刺激、經皮激光血運重建和基因治療等非藥物輔助治療，以及外科手術和血管介入再通等創傷性治療措施的綜合性治療，其中創傷性治療僅在某個環節或終末階段對動脈粥樣硬化進程發揮有限的干預作用，但醫療資源消耗十分龐大[1]。近年來研究證實，ECP利用循環機械輔助裝置在心臟舒張期壓迫肢體，產生的雙脈動血流可加速動脈系統的血液流動，提高主動脈舒張壓和血流切應力，從而增加冠脈灌流量，并調控與血管內膜保護有關的細胞因子，是一項無創、安全有效和經濟的心腦血管病輔助治療方法[6]。錢孝賢等[7]發現，ECP對心肌梗死犬的NO系統有影響；伍貴富等[8]也證實長期ECP能促進側支循環的形成并最終發育成熟，使心肌的結構和功能獲得保護。

miR-133主要分布在心肌和骨骼肌，在其他組織中極少存在[9]。Wang等[10]報道，急性心肌梗死患者血漿中的miR-1、miR-133、miR-499以及miR-208a明顯高于健康對照者、非急性心肌梗死冠心病患者及其他心血管疾病患者，其漲幅最高為miR-133[11]，由此提示miR-133可作為急性心肌梗死診斷的理想生物學標志物。

本研究結果顯示，miR-133在急性心肌梗死患者血漿中異常高表達。ECP治療7周后，治療組miR-133表達水平明顯低于對照組，并伴隨著心絞痛癥狀的明顯緩解。結合miR-133在外周血循環穩定、可承受酶降解及反復凍融的特性[12]，以及肌鈣蛋白I在非急性冠脈綜合征如終末期腎臟疾病等疾病中亦可異常增加等缺點[13]，提示：①外周循環血miR-133可作為繼心肌酶譜、C反應蛋白等標志急性心肌梗死發生、發展的新型生物學標志物；對于判斷腎功能障礙患者心肌損傷情況，miR-133檢測可能更優于心肌肌鈣蛋白I。②ECP可有效改善急性心肌梗死患者心功能和心肌缺血狀態，其作用機制可能為ECP治療后減少了心肌細胞缺血壞死，miR-133由壞死心肌細胞中進入到外周循環血明顯減少[12]。本研究由新的角度探討了急性心肌梗死發生發展的分子機制和ECP的治療機制，對進一步探討急性心肌梗死的治療奠定了一定基礎。

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Effects of external counterpulsation on the plasma expression level of microRNA-133 in patients with acute myocardial infarction

HUANG Ying, ZHAO Chunli, WEI Yongqiang

(Mingzu Hospital of Guangxi Zhuang Autonomous Region, Nanning 530001， Guangxi, China)

Abstract:Objective It is to observe the plasma expression level of microRNA-133(miRNA-133) in patients with acute myocardial infarction (AMI) and to investigate the effects of external counterpulsation(ECP) on this level. Methods 60 AMI patients of after PCI were randomly divided into the treatment group(n=30) and negative control group(n=30), and 30 cases outpatients of healthy physical examination as a blank control group (n=30).The plasma expression level of miRNA-133 in three groups were analyzed by quantitative Real-Time PCR (qRT-PCR). The treatment group and the negative control group received conventional drug therapy for secondary prevention of coronary heart disease. And then the treatment group launch ECP at 3th weeks after PCI, 1 hour /time o d, 5 times a week for 7 weeks; miRNA-133 levels ,the improvement of angina symptoms and heart function in two groups of AMI patients were measured by qRT-PCR and echocardiographic indicators respectively after ECP treatment. Results Compared with the blank control group, the plasma expression levels of miRNA-133 in the AMI patients were significantly elevated(P<0.05); the level of miRNA-133 were significantly reduced in the AMI patients after 7 weeks ECP, accompany with clinical symptoms relieved and the echocardiography index of heart function markly improved(P<0.05). Conclusion Circulating miRNA-133 can be used as potential novel biomarker for AMI ; ECP obviously decreased the plasma level of miRNA-133 in AMI patients and improved cardiac function effectively.

Key words：external counterpulsation; microRNA-133；acute myocardial infarction

[收稿日期]2014-11-20

[中圖分類號]R0542.22

[文獻標識碼]A

[文章編號]1008-8849(2016)01-0025-03

doi:10.3969/j.issn.1008-8849.2016.01.008

[基金項目]廣西醫科大學青年科學基金項目(GXMUYSF201304)

[作者簡介]黃穎，女，博士，副主任醫師，研究方向為心肌梗死及心律失常。