分析巴中地區696例陰道分泌物的細菌分離鑒定及耐藥性

王貞美，鐘洪偉，王官容，王淑英，何　柳

(巴中市中心醫院 1.檢驗科; 2.放射科；3.新生兒科,四川 巴中636000)

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分析巴中地區696例陰道分泌物的細菌分離鑒定及耐藥性

王貞美1，鐘洪偉2，王官容1，王淑英1，何柳3

(巴中市中心醫院 1.檢驗科; 2.放射科；3.新生兒科,四川 巴中636000)

摘要：目的了解不同地區不同人群陰道感染病原菌的分布及耐藥情況，為臨床對陰道炎治療過程中合理選用抗生素提供科學的實驗室依據。方法對巴中地區2013年7月至2015年6月期間的696例陰道分泌物樣本進行培養，在VITEK2-compact全自動微生物分析儀對分離的菌株進行分離鑒定和藥敏試驗分析。結果696例樣本中457例中培養出病原菌238株，陽性檢出率為52.08%。細菌檢出種類較多，革蘭氏陽性球菌104株，革蘭氏陰性桿菌63株，假絲酵母菌67株，其他細菌4株，陽性檢出率分別為43.70%、26.47%和1.68%。葡萄球菌、糞腸球菌和B群無乳鏈球菌對萬古霉素和利奈唑胺抗生素敏感率均為100.0%，糞腸球菌和B群無乳鏈球菌對氨芐西林和萬古霉素的耐藥率為0.00%。大腸埃希氏菌和肺炎克雷伯菌對阿米卡星、美洛培南和亞胺培南抗生素敏感率均在97.00%以上，兩種假絲酵母菌對氟康唑和伊曲康唑的耐藥率均在34.00%以上。結論定期總結分析所在地區的陰道分泌物中病原菌分布及細菌總體耐藥概率，對臨床合理選擇抗生素、提高療效和降低耐藥菌株的產生有著重要的臨床意義。

關鍵詞：陰道分泌物；細菌培養；vitek2compact全自動微生物分析儀；不同地區

(ChinJLabDiagn,2016,20:0628)

陰道炎是女性發病率最高的一種生殖系統感染，各年齡組均可發病。陰道分泌物檢查是婦產科最常見的實驗室檢查項目,是監測女性生殖道感染的病原菌種類和耐藥情況的重要檢測手段[1]。準確及時了解陰道分泌物中病原菌以及各類抗菌藥物的敏感性，有助于明確陰道感染性疾病的致病因素，對陰道疾病的診治具有重要意義。不同地區不同人群陰道感染病原菌的類型存在一定差異，故筆者回顧分析巴中地區2013年7月至2015年6月期間的696例陰道分泌物樣本進行的培養、細菌分離鑒定及耐藥性分析的結果，旨在為臨床合理選擇抗生素治療陰道感染性疾病提供科學的實驗室依據。

1資料與方法

1.1一般資料696例來自2013年7月至2015年6月間在本院婦科門診及住院患者送檢的陰道分泌物樣本，年齡17-78歲，平均年齡35.6±19.7。其中有617例為已婚，79例患者為未婚。21-44歲患者占85.74%，包括自述白帶異味、陰部瘙癢以及不育癥、放環和人流等患者。臨床癥狀均表現外陰瘙癢、灼燒甚至有刺痛感，分泌物明顯增多，呈稀薄白色，嚴重感染時分泌物呈膿性。胺臭味試驗陽性。排除采集分泌物前有性生活(1d內)、盆浴、陰道灌洗，使用過抗生素或磺胺類藥物治療(7 d內)以及處于月經期的患者。

1.2儀器與試劑VITEK2-compact全自動微生物分析儀、細菌鑒定卡、藥敏卡均由法國梅里埃公司提供，儀器操作嚴格按照標準操作規程進行檢測。培養基來自鄭州安圖生物工程股份有限公司。快速革蘭染色液由珠海貝索生物技術有限公司提供。質控菌株由衛生部臨床檢驗中心提供銅綠假單胞菌 ATCC27 853、金黃色葡萄球菌 ATCC25 923、白假絲酵母菌ATCC90 029、大腸埃希菌ATCC25 922。

1.3方法患者在未用藥前由婦科醫生以無菌操作方式，對已婚患者借助于窺陰器使用無菌棉簽在宮頸內2 cm左右處來回捻轉采集陰道分泌物，未婚患者先用無菌生理鹽水進行外陰消毒，用無菌長棉簽深入采集分泌物，立即置入無菌培養試管中送檢。樣本迅速接種于不同培養基(血瓊脂平板和中國籃板)，在37℃條件下進行厭氧菌、需氧菌、真菌和淋球菌培養。所有操作在30 min內完成，培養24 h后利用VITEK2-compact全自動微生物分析儀對培養菌落進行鑒定，用快速革蘭染色液對細菌進行陰陽性確定。藥敏試驗按照法國梅里埃藥敏試驗卡使用說明書進行操作，將分離細菌配制成0.5麥氏濁度的菌懸液，用無菌棉簽浸取菌懸液均勻地在M-H瓊脂平板上涂布，置無菌間5 min左右。將藥敏卡貼于平板表面，置VITEK2-compact全自動微生物分析儀35℃孵育20 h左右后，由儀器自動分析藥敏。以上操作過程均嚴格按照第4版《全國臨床檢驗操作規程》[2]要求開展。

1.4統計學分析對培養分離鑒定病原菌和優勢藥敏的敏感率用Excel建立數據庫，用檢出率和構成比表示，統計分析由SPSS17.0軟件完成。

2結果

2.1陰道分泌物培養的病原菌分布情況696例陰道分泌物中，457例中培養出238株病原菌，陽性檢出率為52.08%。細菌檢出種類較多其中革蘭氏陽性(G+)球菌104株，陽性檢出率為43.70%，主要以葡萄球菌(43株)、糞腸球菌(26株)和B群無乳鏈球菌(19株)為主。革蘭氏陰性(G-)桿菌67株，陽性檢出率為26.47%，以大腸埃希氏菌(39株)和肺炎克雷伯菌(18株)為主。假絲酵母菌67株，陽性檢出率為28.15%，以中白色假絲酵母菌(38株)和光滑假絲酵母菌(26株)為主。見表1。同時檢出43例樣本存在2種菌株混合感染，10例存在3種菌株混合感染，其中白色假絲酵母菌合并其他細菌感染26例，大腸埃希菌合并其他鏈球菌感染8例，大腸埃希菌合并糞腸球菌感染9例。

表1　238株病原菌

注：a表示棒狀桿菌2株，奇異變形桿菌1株，草綠色鏈球菌1株。

2.2藥敏試驗結果

2.2.1革蘭氏優勢菌的耐藥性分析G+球菌中優勢分布的3種主要菌屬(金黃色葡萄球菌、糞腸球菌和B群無乳鏈球菌)對萬古霉素和利奈唑胺的敏感率均為100.0%，葡萄球菌中產β-內酰胺酶的有18株，占41.86%，糞腸球菌和B群無乳鏈球菌對氨芐西林和萬古霉素的耐藥率為0.00%；G-桿菌中優勢分布的2種菌屬主要是大腸埃希氏菌和肺炎克雷伯菌，39株大腸埃希菌中產超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)的有24株，產酶率高達61.54%，18株肺炎克雷伯菌中有3株產ESBLs(16.67%)對阿米卡星、美洛培南和亞胺培南的敏感率分別為97.44%，100%和94.44%。見表2和表3。

2.2.2假絲酵母菌藥性分析 白色假絲酵母菌對益康唑、制菌霉素、酮康唑、兩性霉素B的敏感率分別為84.21%、86.91%、92.11%和94.76%；對5-氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑的耐藥率分別為34.21%，63.16%和92.11%；光滑假絲酵母菌對益康唑、制菌霉素、酮康唑、兩性霉素B的敏感率分別為84.61%、92.31%、92.31%和88.46%；對5-氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑的耐藥率分別為34.62%，65.38%和92.31%，見表4。

表2　G+球菌主要優勢菌的耐藥性 耐藥株(n)/耐藥率(%)

表3　G-桿菌主要優勢菌的耐藥性　n/ %

表4假絲酵母菌和念珠菌主要優勢菌的耐藥性(n/%)

藥敏卡白色假絲酵母菌(n=38)光滑假絲酵母菌(n=26)益康唑6(15.79)4(15.38)制菌霉素5(13.16)1(7.69)酮康唑3(7.89)1(7.69)兩性霉素B2(5.26)3(11.54)5-氟胞嘧啶13(34.21)9(34.62)氟康唑24(63.16)17(65.38)伊曲康唑35(42.11)24(92.31)

3討論

隨著臨床上各種廣譜、超廣譜的抗生素以及不合理的抗菌藥物在各類疾病的應用增加，導致厭氧菌感染顯著下降，霉菌感染上升，越來越多的病原菌產生耐藥性，給臨床治療帶來一定的困難。細菌和真菌是陰道感染較為常見的致病微生物，陰道分泌物培養鑒定是明確女性泌尿生殖系感染性疾病的病因主要方法，對陰道疾病的診治具有重要的臨床意義[3]。為此我院臨床微生物室專門引進梅里埃VITEK2-compact全自動微生物分析儀來提高細菌鑒定和耐藥分析能力。該儀器具有操作簡便、檢測速度快、交叉污染率低以及特異性、敏感性和重復性高的特點，實現細菌微量快速培養基、分類鑒定、微量生化反應等技術自動化，絕大多數細菌的鑒定可在2-18 h內得出結果。本地區696例陰道分泌物培養鑒定中，457例樣本中培養出病原菌238株，陽性檢出率為52.08%。細菌檢出種類較多其中G+球菌104株，陽性檢出率為43.70%，主要以葡萄球菌(43株)、糞腸球菌(26株)和B群無乳鏈球菌(19株)為主。G-桿菌63株，陽性檢出率為26.47%，以大腸埃希氏菌(39株)和肺炎克雷伯菌(18株)為主。假絲酵母菌67株，陽性檢出率為28.15%，以中白色假絲酵母菌(38株)和光滑假絲酵母菌(26株)為主，說明陰道炎癥中病原菌種類較多,與陳平[4]學者報道一致。同時檢出43例樣本存在2種菌株混合感染，10例存在3種菌株混合感染，其中白色假絲酵母菌合并其他細菌感染26例，大腸埃希菌合并其他球菌感染8例，大腸埃希菌合并糞腸球菌感染9例。本文回顧分析結果與張國雄等[5]的研究結果相近，但糞腸球菌和混合感染的感染率有所不同，這可能與區域的致病菌流行不同以及當地衛生狀況不同有關。說明陰道內環境一旦發生變化，致陰道微生物生態平衡被破壞，陰道常住菌群(條件致病菌)轉變為致病微生物，導致細菌性和真菌性陰道炎的發生，嚴重危害女性身心健康[6]。

對G+球菌幾種常見致病菌的藥敏結果統計分析，發現葡萄球菌在G+球菌中感染率最高，其次是糞腸球菌和B群無乳鏈球菌。葡萄球菌可合成的新型青霉素結合蛋白2a(PBP2a),引起抗生素作用靶位改變而導致病原菌耐藥。葡萄球菌對萬古霉素和利奈唑胺的敏感率均為100.0%，可作為該菌感染治療的最佳藥物。哌拉西林、克林霉素、復方新諾明、利福平和氯霉素等幾種藥物對葡萄球菌的耐藥率均在25.00%以下，可作為該菌感染治療的首選藥物，青霉素、紅霉素、四環素、林可霉素、氨芐西林和亞胺培南的耐藥率均在60.00%以上，對該菌感染的治療效果不佳，與黃烈等學者[7]文獻報道一致；糞腸球菌和B群無乳鏈球菌對青霉素、萬古霉素、氨芐西林和利奈唑胺的敏感率均在90.00%以上，治療可首選。紅霉素、氯霉素、四環素和利福平等常用抗生素的耐藥性在50.00%以上，對其感染治療效果較低。葡萄球菌中產β-內酰胺酶的有18株，占41.86%。表明葡萄球菌對β-內酰胺類抗生素有較高的耐藥性，臨床常用抗生素治療效果差。

對G-球菌幾種常見致病菌的藥敏結果統計分析，發現18株肺炎克雷伯菌中有4株產ESBLs(22.22%)，39株大腸埃希菌中產超廣譜β-內酰胺酶(ESBLs)的有21株，產酶率高達53.85%，導致ESBLs菌株增多的原因是臨床廣譜抗生素(如三代頭孢菌素)濫用所致。其結果高于國內20.00%-40.00%的發生率[8]，ESBLs的基因由耐藥質粒攜帶是導致2種菌屬對廣譜β-內酰胺酶類抗生素耐藥的主要原因[9]。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌2種菌屬僅對阿米卡星、美洛培南和亞胺培南的敏感率均在97.00%以上，可作為治療感染的首選藥物，對復方新諾明、氨曲南、哌拉西林和左氧氟沙星及多種頭孢菌素等藥物的耐藥率達50.00%以上。表明G-桿菌對三代頭孢菌素、氨基糖苷類、喹諾酮類抗生素呈多重耐藥現象，與方家敏等[10]研究報道一致。因此，臨床在治療過程中對ESBLs菌株引起的感染時，正確選用抗生素，避免耐藥菌株的擴張。

對真菌感染疾病的幾種常見致病菌的藥敏結果進行統計分析，發現白色假絲酵母菌和光滑假絲酵母菌對益康唑、制菌霉素、酮康唑、兩性霉素B的敏感率均在80.00%以上，可作為假絲酵母菌性陰道病的首選藥物；對5-氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑的耐藥率均較高，其治療效果相對較差；這與臨床廣譜抗生素和抗真菌藥物濫用、免疫缺陷人群的增多以及女性陰道內環境變化密切相關。這可與區域的致病菌流行和當地衛生狀況不同以及臨床抗生素控制有關。對真菌感染患者的治療應盡量避免長期應用廣譜抗菌藥物以及糖皮質激素，以免降低機體免疫功能或破壞陰道的正常菌群，給真菌感染提供條件[11]。因此，在臨床為患者選擇耐藥性較低的藥物進行治療，應參考患者的不同臨床表現、實驗室鑒定的陰道分泌物中感染的致病菌以及藥敏試驗結果。這樣就會縮短治療時間，獲得良好效果。

本研究對696例陰道分泌物分析表明，陰道疾病患者陰道分泌物感染的病原學分布較為廣泛，有必要進行陰道分泌物的細菌培養和藥敏試驗。并定期總結分析所在地區的陰道分泌物中病原菌分布及細菌總體耐藥率，對臨床合理選擇抗生素、提高療效和降低耐藥菌株的產生有著重要的臨床意義。

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Analysis in Bazhong area of bacterial isolation and drug resistance in 696 cases of vaginal discharge

WANGZhen-mei,ZHONGHong-wei,WANGGuan-rong,etal.

(DepartmentofLaboratory,BazhongMunicipalCentralHospital,Bazhon636000,China)

Abstract:ObjectiveTo understand the distribution and drug resistance of pathogenic bacteria in different regions of different populations,and to provide scientific basis for clinical treatment of antibiotics.MethodsThe Bazhong was 696 cases sample of vaginal secretion from July 2013 to June 2015 in cultured,and the isolation and drug sensitivity test were analyzed by VITEK2-compact automatic microbial analyzer.ResultsIn 696 of the 457 samples,238 were cultured in,and the positive rate was 52.08%.There were 104 strains of bacteria,strains of gram positive bacteria,63 gram negative bacilli,67 Candida albicans,4 other bacteria,and the positive detection rate was 43.70%,26.47%,28.15% and 1.68% respectively.Staphylococcus aureus,Enterococcus faecalis and B group is Streptococcus agalactiae sensitive rate to vancomycin and linezolid antibiotics were 100.0%,Enterococcus faecalis and B group Streptococcus agalactiae to ampicillin and vancomycin resistant rate was 0.00%.Escherichia coli and pneumonia Klebsiella pneumoniae to amikacin,meropenem and imipenem antibiotic sensitive rate were above 97.00%,two kinds of Candida albicans to fluconazole and itraconazole resistance rate was 34.00%.ConclusionTo sum up the distribution of pathogenic bacteria in the vaginal discharge and the overall drug resistance rate of bacteria in the region,it has important clinical significance for clinical rational selection of antibiotics,improving the curative effect and reducing the production of drug resistant strains.

Key words:Vaginal discharge；bacterial culture;VITEK2-compact automatic microbial analyzer;Different regions

(收稿日期：2015-11-27)

中圖分類號：R378

文獻標識碼：A

文章編號：1007-4287(2016)04-0628-04