改良混合脫鈣液在骨髓活檢組織中的應(yīng)用分析

胡延濤 劉艷峰 于兵兵 王建業(yè)

【摘要】目的：分析改良混合脫鈣液在骨髓活檢組織中的應(yīng)用。方法：選取2014年6月到2015年6月期間內(nèi)，我院一共收治的骨髓穿刺活檢病例60例。按照隨機的方法分為對照組和研究組各30例。進行，對照組主要使用硝酸類脫鈣液，研究組主要使用改良混合脫鈣液。對兩組病例的脫鈣時間、切片質(zhì)量和 HE染色效果進行分析和對比。結(jié)果：研究組在脫鈣時間、切片質(zhì)量和 HE染色效果均優(yōu)于對照組（P<0.05），有統(tǒng)計學意義。討論：改良混合脫鈣液在骨髓活檢組織中具有極高的應(yīng)用價值，值得大力推廣以及應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】改良混合脫鈣液；骨髓活檢組織；應(yīng)用

在病理檢查中內(nèi)容中，骨髓活檢是很重要的檢查部分，是臨床疾病診斷的主要依據(jù)之一。骨組織在日常活檢當中，由于其質(zhì)地比較堅硬，若不能把鈣質(zhì)取出，難以制作成片。為此，脫鈣處理是關(guān)鍵。怎樣才能在短時間內(nèi)進行脫鈣處理并制作成片，又不會給染色造成影響，確保組織的不丟失以及免疫效果，成為了病理技術(shù)一個重視的問題[1-2]。現(xiàn)本文主要對改良混合脫鈣液在骨髓活檢組織中的應(yīng)用進行分析，望為臨床病理檢查提供借鑒和參考，詳細過程如下。

1.一般資料和方法

1.1一般資料

選取2014年6月到2015年6月期間內(nèi)，我院一共收治的骨髓穿刺活檢病例60例。按照隨機的方法分為對照組和研究組各30例。進行，對照組主要使用硝酸類脫鈣液，研究組主要使用改良混合脫鈣液。男性患者和女性患者分別為32例和28例.對照組中，年齡范圍為18-68歲，平均年齡為37.8歲。研究組中，年齡范圍為20-71歲，平均年齡為38.4歲。對于參加本次調(diào)查研究者均意識清晰，且自愿參加。均排除患有嚴重的精神疾病以及不愿參加本次調(diào)查研究者。經(jīng)過醫(yī)護人員的仔細分析和對比后，兩組患者在年齡、背景、學歷、病情、文化等方面不存在顯著的差異（P>0.05），具有一定的可比性。

1.2方法

活檢過程中主要使用的儀器包括有 切片機、染色機、脫水機、包埋機以及自動免疫組化染色機等等。

5%硝酸脫鈣液配制：95毫升的蒸餾水中加入5毫升濃硝酸，充分混勻.改良混合脫鈣液配制：在70毫升10%中性甲醛中加入30毫升甲酸，把其混勻；在70毫升10%中性甲醛中加入30毫升鹽酸，把其混勻；把上述兩種液體充分混勻。

選取 10毫升潔凈的玻璃西林瓶內(nèi)并把標本放入，使用10% 中性緩沖甲醛液進行固定 ，固定時間為240分鐘 ，把固定液傾去。對照組組采用硝酸脫鈣液脫鈣（240±60 ）分鐘后取出，并用蒸餾水沖洗。研究組組加入適量的改良混合脫鈣液，脫鈣（120±60）分鐘后取出，并用蒸餾水進行沖洗[3]。

對兩組標本繼續(xù)擰脫水以及石蠟包埋處理，然后進行連續(xù)切片，切為三張，每張厚度為2μm，然后分別進行染色，對疑似腫瘤病例在進行免疫組織化學染色檢驗，采用邁新 MaxVisionTM 試劑盒進行，并使用EDTA或者枸櫞酸進行修復，DAB進行顯色。接著使用蘇木精對細胞核進行復染，封固使用中性樹膠并在光鏡下觀察。使用已知陽性片對所有染色進行陽性對照，使用PBS 代替一抗做陰性對照[4]。

1.3效果評價

分析對比兩組患者的脫鈣時間、切片質(zhì)量以及HE染色效果。切片質(zhì)量以及HE染色效果可分為良好以及差兩個等級。

1.4統(tǒng)計學處理

將研究結(jié)果的數(shù)據(jù)輸入SPSS22.2軟件包，采用統(tǒng)計學分析數(shù)據(jù)，用 用以表示計量，用百分數(shù)（%）、例數(shù)（n）用以表示計數(shù)，如果數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示P<0.05，那么可以判斷兩者差異存在統(tǒng)計學意義。

2.結(jié)果

對照組脫鈣時間為（120±60）分；切片質(zhì)量良好的為24例（80%），差的為6例（20%）；HE染色效果良好的為26例（86.7%），差的為4例（13.3%）。研究組脫鈣時間為（240±60）；切片質(zhì)量良好的為28例（93.3%），差的為2例（6.7%）；HE染色效果良好的為29例（96.7%），差的為1例（3.3%）。組間數(shù)據(jù)對比分析發(fā)現(xiàn)，研究組在脫鈣時間、切片質(zhì)量良好率以及HE染色效果良好率均優(yōu)于對照組（P<0.05），有統(tǒng)計學意義。

3.討論

在骨髓活檢組織中，由于骨髓組織具有細小、疏松、硬脆的特點，加之纖維支架少和富含鈣鹽，在制片中具有一定的難度。所以，脫鈣處理是制片的關(guān)鍵。傳統(tǒng)方法中，經(jīng)常使用的組織脫鈣液一般包括有甲酸類、硫酸類、硝酸類、鹽酸類以及螯合劑類和三氯醋酸類等等。

經(jīng)過改良的混合脫鈣液一般具有以下幾個方面的優(yōu)點：1.組織不會過度膨脹，去誒不會變腐以及變小。2.組織脫鈣和固定能夠同時進行，且速度快，街上檢查時間。3，。容易控制脫鈣時間。4.細胞漿染色以及細胞核都不會受到影響，切抗原不會丟失，疫組織化學染色不會受到影響。5.操作較為簡單，配方簡單，容易掌握。6.脫鈣完成后還可以重復使用，減少成本。需要特別注意的是：在對骨髓組織進行脫鈣之前，一定要先做好固定處理，切保證處理時間大于或者等于四個小時，以達到更好保護超微結(jié)構(gòu)和組織抗原的目的[5]。

本次研究結(jié)果可知：組間數(shù)據(jù)對比分析發(fā)現(xiàn)，研究組在脫鈣時間、切片質(zhì)量良好率以及HE染色效果良好率均優(yōu)于對照組（P<0.05），有統(tǒng)計學意義。結(jié)果進一步表明，改良混合脫鈣液在骨髓活檢組織中具有極高的應(yīng)用價值，縮短了脫鈣時間，提高了制片質(zhì)量和染色質(zhì)量，該方法值得在臨床中大力推廣以及應(yīng)用。

【參考文獻】

[1]趙寶忠，張毅，劉志蘭.病理組織脫鈣液傳統(tǒng)組方的比較分析[J].臨床與實驗病理學雜志.2014，23（06）：556-558.

[2]羅燦嶠，莫木瓊，鐘覺民.不同的脫鈣液在骨組織制片中的比較應(yīng)用[J].中國實用醫(yī)藥.2014，17（19）：88-90.

[3]李玉蓮，徐曉艷.臨床病理檢驗中不同骨組織脫鈣液效果的比較[J].山西醫(yī)科大學學報.2014，12（10）：122-124.

[4]陳世梁，盧志承，董玉英.介紹一種改良脫鈣液在骨組織制片中的應(yīng)用[J].臨床與實驗病理學雜志.2015，17（05）：88-90.

[5]謝玲，鄒麗宜，張志平，崔紅晶，林堅濤.改良脫鈣液制作脫鈣骨石蠟切片與傳統(tǒng)方法的比較[J].中國組織工程研究與臨床康復.2015，14（11）：333-335.