艾納香油質量標準初步研究

胡璇　陳振夏　王凱黃梅　吳麗芬　龐玉新

摘 要 以不同批次的艾納香油為對象，通過觀察其外觀性狀，測定其溶解性、比旋度以及相對密度等物理特性，并采用薄層層析法（TCL）和氣相（GC）指紋圖譜對收集的艾納香油成分進行定性分析，對艾納香油的質量標準進行初步研究。結果表明：艾納香油為澄清、棕紅色的液體，有特異的芳香氣，易溶于乙醇、氯仿、乙醚，幾乎不溶于水，比旋度宜為-26°～-30°，相對密度宜為0.94～0.98，β-石竹烯和l-龍腦TCL斑點清晰，分離良好，GC指紋圖譜得到17個共有峰，均含有有效成分β-蒎烯、芳樟醇、樟腦、l-龍腦、β-石竹烯，相似度均在0.90以上。分析檢測方法簡便、可靠，可為艾納香油的質量控制提供參考依據(jù)。

關鍵詞 艾納香油 ；物理性狀 ；薄層色譜 ；GC指紋圖譜 ；質量控制

中圖分類號 O656.6 文獻標識碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2016.09.018

Abstract Different batches of Blumea Balsamifera Oil were sampled to observe their appearant traits and determine their physical traits such as solubility， specific rotation， relative density ratio， etc. Qualitative analysis was made of the samples by using thin layer chromatography （TLC） and gas chromatography （GC） finger-print. The results showed that B. balsamifera oil was pellucid and red-brown with specific aroma. It was easily dissolved in ethanol， trichloromethane， diethyl ether， almost insoluble in water. Its specific rotation was between -26°～30°， and the density ratio between 0.94～0.98. TLC spots of β-caryophyllene and l-borneol were clear and separated well. Seventeen common peaks were collected and all contained the effective constituents of β-pinene， linalool， camphor， l-borneol and β-caryophyllene， with their similarities being higher than 0.90. These two methods were simple and reliable and can be used for providing reference and basis for the quality control of B. balsamifera Oil.

Keywords Blumea Balsamifera oil ； physical properties ； TLC ； GC finger-print ； quality control

艾納香為菊科植物艾納香Blumea Balsamifera （L.） DC.的新鮮或干燥地上部分，俗稱“娜龍” （黎藥名）、“大風艾”，具有祛風除濕、溫中止瀉、活血解毒等功效，廣泛分布于海南、貴州、廣西、廣東等省區(qū)[1-2]。艾納香主要作為提取艾粉、艾片和艾納香油的原料，具有悠久的使用歷史，其新鮮莖葉經提取加工制成的結晶為艾片（左旋龍腦）[3]，在精制艾片的過程中，粗提物經壓榨分離而得到的油即為艾納香油，艾納香油中主要含有l(wèi)-龍腦、β-石竹烯、樟腦、α-蒎烯、β-蒎烯、檸檬醇、芳樟醇等活性成分，分別具有發(fā)汗、鎮(zhèn)驚、平喘、強心、鎮(zhèn)咳、驅蟲、祛痰、抗病毒、抗菌等作用[4]。

艾納香油被廣泛應用于藥品和化妝品行業(yè)，以艾納香油為主要成分的產品大量涌現(xiàn)，例如艾納香咽立爽滴丸、銀丹腦心通軟膠囊、心胃止痛膠囊、金喉噴健霧劑、銀冰消痤酊、復方一支黃花噴霧劑等[5]，它的獨特功效已得到廣大消費者的認可。目前，艾納香油的研究主要集中在單一化學成分以及毒理藥理研究方面[6-7]，缺少關于艾納香質量控制的相關研究報道。本文以收集不同批次的艾納香油為對象，對其相關物理性狀進行觀察和測定，并對其有效成分進行定性分析，為艾納香油在生產應用中的質量控制提供參考依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 樣品

艾納香油樣品分別來源于貴州省艾源生態(tài)藥業(yè)開發(fā)有限公司（S1-S6、S12、S13），貴州省江口縣苗藥生物科技有限公司（S7-S8），貴州利生香中藥科技有限公司（S9-S10），湖北丹圣醫(yī)藥科技有限公司（S11），經中國熱帶農業(yè)科學院龐玉新副研究員鑒定為菊科植物艾納香Blumea Balsamifera （L.） DC.的提取物艾納香油。

1.1.2 儀器與試劑

Agilent 7890A氣相色譜儀（配有氫火焰離子化檢測器FID）（載氣高純氮氣，助燃氣為空氣，燃氣為氫氣），HP-5毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm），OpenLAB CDS 工作站，G4513A自動進樣器；電子天平（Sartorius公司）； WZZ-2S自動數(shù)顯旋光儀（上海精密儀器儀表有限公司）。

對照品β-蒎烯（純度≥98%，批號：P-011-131204，購自成都瑞芬思生物科技有限公司）；芳樟醇（純度≥98.74%，批號：2N1117BC13，購自上海源葉生物科技有限公司）；樟腦（純度≥98%，批號：21506，購自Aladdin公司）；l-龍腦（純度≥98%，批號：10147015，購自Alfa Aesar公司）；β-石竹烯（純度≥98.8%，批號：201001，購自中國食品藥品檢定研究院）；乙酸乙酯為色譜純（Fisher Scientific公司），其它試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 理化性質

1.2.1.1 溶解性

按《中國藥典》[3]2015版一部凡例中“性狀”項下對溶解度的測定法：取各批次艾納香油1 mL，置試管中，分別加入不同體積蒸餾水、乙醇、氯仿、乙醚，每隔5 min強力振搖30 s，觀察30 min內的溶解情況。

1.2.1.2 比旋度

按《中國藥典》[3]2015版一部附錄Ⅶ E旋光度測定法：在20℃的條件下，取艾納香油1 g，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加入乙醇至刻度定容，搖勻，備用。每次測定前以乙醇作空白校正，測定后，再校正1次，以確定在測定時零點有無變動；如第2次校正時發(fā)現(xiàn)零點有變動，則應重新測定旋光度。將測定管用艾納香油供試液沖洗數(shù)次，緩緩注入艾納香油供試液適量（勿使發(fā)生氣泡），置于旋光計內檢測讀數(shù)，即得供試液的旋光度。用同法對每份樣品測定旋光度3次，取3次的平均數(shù)，即得供試品的比旋度。

1.2.1.3 相對密度

參照《中國藥典》[3]2015版一部附錄Ⅶ A相對密度測定第二法：取20℃時相對密度等于1的韋氏比重秤，將新沸過的冷水倒入所附玻璃圓筒至八分滿，不斷攪動玻璃圓筒內的水（置于20℃的水浴中），使之溫度調至20℃，將懸于秤端的玻璃錘慢慢浸入圓筒內的水中，游碼懸掛于秤臂右端1.000 0處，調節(jié)秤臂左端的螺旋使平衡，傾去玻璃圓筒內的水，拭干，加入艾納香油至相同的高度，并用同樣的方法調節(jié)溫度，將玻璃錘拭干后浸入艾納香油中，通過調節(jié)游碼在秤臂上的數(shù)量與位置使之平衡，數(shù)值讀取，即得艾納香油的相對密度。

1.2.2 TCL鑒別

1.2.2.1 對照品溶液的制備

取l-龍腦對照品、β-石竹烯對照品適量，分別加乙醇制成每1 mL含3、2、1 mg的溶液，作為對照品溶液。

1.2.2.2 供試品溶液的制備

稱取25.0 mg艾納香油樣品，加乙醇4 mL使其溶解，作為供試品溶液。

1.2.2.3 不同溶劑展開

參照2015版藥典薄層色譜鑒定方法[3]，用定量毛細管分別吸取供試品及對照品溶液各2～5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，分別以不同展開劑系統(tǒng)進行展開，取出，晾干，噴以0.5%香草醛硫酸乙醇（10%）溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。

1.2.3 指紋圖譜建立

1.2.3.1 供試品溶液的制備

取艾納香油樣品0.1 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，然后再精密量取1 mL置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

1.2.3.2 參照物溶液的制備

分別精密稱取β-蒎烯、芳樟醇、樟腦、l-龍腦、β-石竹烯對照品適量，加乙酸乙酯溶解并定容，制成質量濃度分別為1.578、0.784、3.545、8.243、4.472 mg/mL的混合液，作為混合對照品儲備液。

1.2.3.3 色譜條件

色譜柱：HP-5毛細管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm），程序升溫（40℃保持3 min，以2℃/min升溫至100℃，保持5 min，以5℃/min快速升溫至200℃，保持10 min），載氣為高純氮氣，流量6.5 mL/min；進樣量0.6 μL，不分流，F(xiàn)ID檢測器溫度240℃，進樣口溫度220℃。按l-龍腦計算理論塔板數(shù)及分離度。結果理論塔板數(shù)不低于50 000，分離度大于4，符合指紋圖譜的相關要求。該色譜條件作為GC條件。

2 結果與分析

2.1 理化性質

2.1.1 性狀

各批次艾納香油為澄清、棕紅色的液體，有特異的芳香氣。

2.1.2 溶解性

結果表明艾納香油易溶于乙醇、氯仿、乙醚，幾乎不溶于水，見表1。

2.1.3 比旋度

不同批次艾納香油比旋度見圖1。由圖1可知，13批樣品比旋度變化較小，說明艾納香油的比旋度較穩(wěn)定，為此艾納香油在質量控制的過程中比旋度宜為-26°～-30°。

2.1.4 相對密度

不同批次艾納香油相對密度見圖2。由圖2可知，13批樣品相對密度變化較小，說明艾納香油的相對密度較穩(wěn)定，為此艾納香油在質量控制的過程中相對密度宜為0.94～0.98。

2.2 TCL鑒別

不同溶劑展開系統(tǒng)試驗結果見表2。試驗結果表明，選擇石油醚-乙酸乙酯（9∶1）作為展開體統(tǒng)較為適宜。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，l-龍腦、β-石竹烯分別顯相同顏色的斑點，斑點可見。

2.3 指紋圖譜研究結果

2.3.1 檢測方法的檢驗

2.3.1.1 精密度試驗

取同一供試品續(xù)濾液，按“1.2.3.3”色譜條件連續(xù)進樣6次，以l-龍腦為參照峰，計算各共有峰的相對保留時間RSD<0.1%，相對峰面積RSD<2%，結果表明儀器精密度良好（圖3）。

2.3.1.2 重復性實驗

取同一批樣品6份，按照供試品溶液制備方法制備，續(xù)濾液進樣，按“1.2.3.3”色譜條件色譜條件分別進樣，以l-龍腦為參照峰，計算各共有峰的相對保留時間RSD<0.05%，相對峰面積RSD<2%。結果表明，該方法重復性良好。

2.3.1.3 穩(wěn)定性實驗

取同一供試品續(xù)濾液，按“1.2.3.3”色譜條件，分別在0、2、4、8、12、24 h進樣，以l-龍腦為參照峰，計算各共有峰的相對保留時間RSD<0.05%，相對峰面積RSD<2%。結果表明，供試品溶液在24 h內穩(wěn)定。

2.3.2 指紋圖譜及技術參數(shù)

2.3.2.1 指紋圖譜采集及共有峰的標定[8]

將13批艾納香油藥材按“1.2.3.1”供試品溶液制備方法得到進樣樣品，依法測定記錄色譜圖得到13批藥材GC指紋圖譜，將其全部導入《中藥指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004 A版》，生成對照指紋圖譜，見圖4-A，共選擇反映艾納香油內在質量的17個共有色譜峰。通過對照品保留時間的定性作用可以鑒定部分色譜峰，可知3號峰為β-蒎烯（7.73 min）、8號峰為芳樟醇（14.65 min）、9號峰為樟腦（16.71 min）、10號峰為l-龍腦（18.39 min）、13號峰為β-石竹烯（33.41 min），見圖4-B中a、b、c、d、e。結合不同批次艾納香油GC色譜峰狀況，發(fā)現(xiàn)10號峰l-龍腦保留時間穩(wěn)定，峰型對稱，響應值高并且為艾納香油中主要藥效指標成分，故選擇其為內標參照峰，計算其余各峰的相對保留時間和相對峰面積。

2.3.2.2 特征指紋圖譜的建立及相似度評價

特征指紋圖譜見圖5。根據(jù)所建立的GC指紋圖譜方法，連續(xù)得到13批艾納香油的指紋圖譜，建立了艾納香油指紋圖譜疊加模式色譜圖，將各色譜圖與特征指紋圖譜相比較，采用相似系數(shù)進行了相似度判別，相似度均大于0.90。結果見表3。

3 討論與結論

本文通過對艾納香油物理性狀的觀察和測定對其質量進行初步評價。TCL鑒別中采用4種不同展開溶劑分別針對艾納香油中β-石竹烯和l-龍腦進行薄層鑒別，采用石油醚-乙酸乙酯（9∶1）能使兩個極性不同的化合物得到分離，雖然顯色不夠清晰，各斑點分開較好，Rf值較適宜。因此，以此展開條件為展開系統(tǒng)。

在指紋圖譜建立的過程中，對柱溫進行了考察，比較不同程序升溫方法，采用不同升溫方法進樣分析，發(fā)現(xiàn)快速升溫至200℃，保持10 min，共能檢測出46個峰，樣品在60 min內出峰完全，且色譜基線平穩(wěn)，各色譜峰分離達到最佳效果，故確定該方法為最佳程序升溫法。

目前，相關報道均是對不同產地艾納香藥材進行指紋圖譜研究[9]，艾納香油作為其主要提取物，藥材本身的質量、提取工藝以及儲藏都會對其質量產生影響。本實驗首次對不同批次生產的艾納香油指紋圖譜進行研究，共制定17個共有峰，以l-龍腦作為參照峰，分別計算共有峰的相對峰面積和相對保留時間RSD，結果所建立的方法精密度、重復性、穩(wěn)定性良好。利用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》（2004A版）對艾納香油指紋圖譜的相似性進行研究，其相似度均在0.90以上，艾納香油化學成分相對穩(wěn)定。實驗結果表明，該方法能夠較好地反映艾納香油的指紋性，可結合薄層鑒別條件以及相關物理性狀對艾納香油的質量進行初步研究，為艾納香油在生產過程中的質量控制提供參考依據(jù)。

參考文獻

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