尿RBP、NAG聯(lián)合血清CysC檢測(cè)在2型糖尿病早期腎損傷中的診斷價(jià)值

魯 丹，陳麗芳，蔡潔丹

(深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518172)

·論 著·

尿RBP、NAG聯(lián)合血清CysC檢測(cè)在2型糖尿病早期腎損傷中的診斷價(jià)值

魯 丹，陳麗芳，蔡潔丹

(深圳市龍崗區(qū)人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518172)

目的 探討尿視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)聯(lián)合血清胱抑素C(CysC)檢測(cè)在2型糖尿病早期腎損傷中的診斷價(jià)值。方法 抽取該院T2DM糖尿病腎病患者58例(A組)，T2DM單純糖尿病患者54例(B組)，健康體檢者52例(C組)。利用免疫比濁法檢測(cè)3組受試者尿RBP、NAG和血清CysC水平，比較其差異，探討單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)診斷糖尿病早期腎損傷的陽(yáng)性率。結(jié)果 A組尿RBP、NAG和血清CysC水平均顯著高于B、C組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；B組RBP、NAG和血清CysC水平均高于C組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。RBP、NAG、CysC單項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性率分別為87.93%、86.21%、84.48%，聯(lián)合3項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的陽(yáng)性率為94.83%，高于單項(xiàng)檢測(cè)的陽(yáng)性率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 尿RBP、NAG及血清CysC是2型糖尿病早期腎損傷的靈敏指標(biāo)，且聯(lián)合3項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的綜合敏感性更好，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

糖尿病； 腎臟損傷； 視黃醇結(jié)合蛋白； β-N-乙酰葡萄糖苷酶； 胱抑素C

糖尿病性腎病(DN)是糖尿病引起的嚴(yán)重和危害性最大的一種慢性并發(fā)癥，由糖尿病引起的微血管病變而導(dǎo)致的腎小球硬化，是本癥的特點(diǎn)，后期可出現(xiàn)慢性腎功能不全和腎功能衰竭，對(duì)患者生命健康造成威脅[1]，亦是患者主要死因。然而，糖尿病腎病起病隱匿，緩慢進(jìn)展，早期的腎臟病有關(guān)癥狀不多，腎病初期腎臟增大，腎小球?yàn)V過(guò)功能亢進(jìn)和微量蛋白尿可持續(xù)多年，也不容易被注意，因此大多數(shù)糖尿病腎病患者是在出現(xiàn)明顯蛋白尿或顯著水腫時(shí)方被覺察。之前臨床上用于檢測(cè)的BUN,Cr作為診斷糖尿病腎病的敏感性較差[2]。而根據(jù)糖尿病早期腎損傷的結(jié)構(gòu)和功能變化，發(fā)現(xiàn)新型標(biāo)志物尿視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、β-N-乙酰葡萄糖苷酶(NAG)、血清胱抑素C(CysC)在糖尿病早期腎損傷中具有較高的靈敏性和診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 (1)T2DM糖尿病腎病患者58例(A組)：男32例，女26例。年齡42～74歲，平均年齡58歲；(2)T2DM單純糖尿病患者54例(B組)：男28例，女26例，年齡40～72歲，平均年齡56歲；(3)健康體檢者52例(C組)：男28例，女24例，年齡38～70歲，平均年齡54歲。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均符合1999年WHO關(guān)于糖尿病的診斷及分型標(biāo)準(zhǔn)；(2)病程1.8～23年；(3)年齡35～77歲；(4)簽署知情同意書。病例排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)腎臟實(shí)質(zhì)性病變和尿路感染而引起的尿蛋白陽(yáng)性者；(2)糖尿病酮癥酸中毒；(3)急慢性肝炎及其他急慢性炎癥者；(4)應(yīng)激狀態(tài)；(5)月經(jīng)期、妊娠期及哺乳期婦女；(6)甲狀腺功能異常、活動(dòng)性結(jié)核及心功能衰竭者；(7)糖尿病診斷前已有高血壓的患者。

1.2 儀器與試劑 尿RBP、NAG：所用儀器為BECKMAN COULTER UniCel DxC800，試劑購(gòu)自北京利得曼生化股份有限公司，血清胱抑素C(CysC)所用儀器為OLYMPUS AU640，試劑購(gòu)自北京利得曼生化股份有限公司。

1.3 方法 所有受試者禁食8～12 h，應(yīng)用一次性真空釆血管抽取次日清晨空腹靜脈血3 mL,3 500 r/min,離心5 min，分離血清，利用免疫比濁法進(jìn)行血清胱抑素C(CysC)的測(cè)定。并留取第一次晨尿標(biāo)本5 mL,3 500 r/min離心5 min，之后收集上清液利用免疫比濁法進(jìn)行尿RBP、NAG的測(cè)定。各測(cè)定項(xiàng)目按照儀器和試劑說(shuō)明書要求嚴(yán)格進(jìn)行操作，并保證實(shí)驗(yàn)室各項(xiàng)結(jié)果均在控。陰性結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)為RBP(0～0.7)μg/mL，NAG(0～11.5)IU/L，血清胱抑素C(CysC)<1.25 mg/L。

2 結(jié) 果

2.1 3組尿RBP、NAG和血清CysC水平比較 A組尿RBP、NAG和血清CysC水平均顯著高于B、C組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。B組RBP、NAG和血清CysC水平均高于C組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 3組尿RBP、NAG和血清CysC水平比較

*：P<0.05，與C組比較；#：P<0.05，與B組比較。

2.2 尿RBP、NAG和血清CysC單項(xiàng)及聯(lián)合3項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的陽(yáng)性率 RBP、NAG、CysC單項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性率分別為87.93%、86.21%、84.48%，聯(lián)合3項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的陽(yáng)性率為94.83%，高于單項(xiàng)檢測(cè)的陽(yáng)性率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 單項(xiàng)及聯(lián)合3項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)的陽(yáng)性率

χ2=13.092、8.923、10.036、9.227，*：P<0.05，與單項(xiàng)比較。

3 討 論

糖尿病腎病由于受高糖、血液流動(dòng)力異常、遺傳等因素影響，引起體內(nèi)胰島素絕對(duì)與相對(duì)不足以致糖蛋白質(zhì)和脂肪代謝障礙，引起微血管病變，累及腎臟成為主要病變之一。表現(xiàn)為蛋白尿、高血壓、水腫、腎損害、嚴(yán)重者腎衰竭，目前已成為終末期腎臟病的第2位原因。其終末期患者5年生存率僅為20%[3]。糖尿病腎病臨床一般分為早期(MA在30～300 mg/d)和臨床糖尿病腎病2期(MA>300 mg/d)，糖尿病早期腎損傷階段進(jìn)行及時(shí)的干預(yù)可逆轉(zhuǎn)其進(jìn)展為臨床糖尿病腎病2期[4]。研究認(rèn)為，約70%的糖尿病早期腎損傷經(jīng)過(guò)合理的治療是可逆轉(zhuǎn)的，因而，糖尿病早期腎損傷的準(zhǔn)確診斷至關(guān)重要[5]。

視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)是肝臟分泌的一種低相對(duì)分子質(zhì)量蛋白(21×103)，由肝細(xì)胞合成，受全反式視黃醇刺激并與之特異性結(jié)合,主要功能是將視黃醇從肝細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)到上皮細(xì)胞。血漿中的視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)約有90%與甲狀腺素結(jié)合前蛋白結(jié)合，形成高分子蛋白復(fù)合物，故而不被腎小球?yàn)V過(guò)膜濾過(guò)，當(dāng)視黃醇被轉(zhuǎn)運(yùn)到靶細(xì)胞后，視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)便游離到血漿中，迅速被腎小球?yàn)V過(guò)，幾乎全部被腎近曲小管重吸收而分解。正常情況下，在尿中穩(wěn)定性強(qiáng)，不易分解，不受pH和血壓干擾，排量甚微(100 μg/d)[6-7]。但在腎近曲小管損傷時(shí)，其尿排量明顯增加，故視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)排量增加可作為腎近曲小管損傷標(biāo)志[8]。本研究結(jié)果表明，A、B組糖尿病患者尿RBP顯著高于C組健康體檢者。單獨(dú)檢測(cè)尿RBP診斷糖尿病早期腎損傷的陽(yáng)性率為87.93%。

NAG是一種廣泛存在于各組織溶酶體中的高相對(duì)分子質(zhì)量溶酶體水解酶，在前列腺和腎臟近端腎小管中含量最高，健康人體血清中的NAG不能通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)膜達(dá)到尿液中，而當(dāng)糖尿病患者出現(xiàn)早期腎損傷時(shí)，隨著腎小管細(xì)胞的損害，出現(xiàn)溶酶體增殖的自溶反應(yīng)，表現(xiàn)為尿NAG顯著升高[9-10]。本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，A、B組糖尿病患者尿NAG顯著高于健康體檢者。單獨(dú)檢測(cè)尿NAG診斷糖尿病早期腎損傷的陽(yáng)性率為86.21%。

CysC是一種低相對(duì)分子質(zhì)量、堿性非糖化蛋白質(zhì)，廣泛存在于各種組織的有核細(xì)胞和體液中。循環(huán)中的胱抑素C具有產(chǎn)生率及釋放入血速率恒定，能自由通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)，在近曲小管全部重吸收并迅速代謝分解，不返回血液，不和其他蛋白形成復(fù)合物等特點(diǎn)。其血清濃度變化不受炎癥、感染、腫瘤及肝功能等因素的影響，與年齡、性別、飲食、體表面積、肌肉量無(wú)關(guān)[11]。是低相對(duì)分子質(zhì)量蛋白質(zhì)中與GFR最相關(guān)的內(nèi)源性標(biāo)志物，分析靈敏度和特異性均優(yōu)于血肌酐及內(nèi)生肌酐清除率。其含量變化可以敏感反應(yīng)腎小球的輕微損傷，能有效的反映腎小球?yàn)V過(guò)率變化，是一種評(píng)價(jià)早期腎功能損傷準(zhǔn)確性好、特異度高的理想指標(biāo)[12]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，A、B組糖尿病患者血清CysC水平顯著高于C組健康體檢者，單獨(dú)檢測(cè)血清CysC診斷糖尿病早期腎損傷的陽(yáng)性率為84.48%。

糖尿病早期腎損傷癥狀隱匿，尋找敏感指標(biāo)，并進(jìn)行有效干預(yù)、阻斷、延遲、至關(guān)重要。而單一指標(biāo)雖

都具其優(yōu)勢(shì)，但一定程度上也存在局限性，所以聯(lián)和運(yùn)用其敏感性和特異性，更能提高診斷的精確性。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，尿RBP、NAG和血清CysC是腎臟腎小管和腎小球細(xì)微早期損害的敏感指標(biāo)，聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性率為94.83%，高于單項(xiàng)檢測(cè)陽(yáng)性率。能及時(shí)準(zhǔn)確的診斷糖尿病早期腎損傷，從而逆轉(zhuǎn)糖尿病腎病，提高其臨床治愈率，具有重要的臨床價(jià)值和意義。

[1]Chen X,Xiao W,Li X,et al.In vivo evaluation of renal function using diffusion weighted imaging and diffusion tensor imaging in type 2 diabetics with normoalbuminuria versus microalbuminuria[J].Front Med,2014,8(4):471-476.

[2]Ciddi V,Dodda D.Therapeutic potential of resveratrol in diabetic complications:In vitro and in vivo studies[J].Pharmacol Rep,2014,66(5):799-803.

[3]朱柄銘,陳文璟,蘇運(yùn)欽,等.血清miR-21在糖尿病腎病中的診斷價(jià)值[J].中國(guó)病理生理雜志,2013,29(12)：2160-2166.

[4]Jayakumar C,Nauta FL,Bakker SJ,et al.Netrin-1,a urinary proximal tubular injury marker,is elevated early in the time course of human diabetes[J].J Nephrol,2014,27(2):151-157.

[5]Kim SS,Song SH,Kim IJ,et al.Clinical implication of urinary tubular markers in the early stage of nephropathy with type 2 diabeticpatients[J].Diabetes Res Clin Pract,2012,97(2):251-257.

[6]李俊如,黃靜.血清視黃醇結(jié)合蛋白(RBPs)和尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)在糖尿病腎病診斷中的價(jià)值[J].成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013,8(6):706-708.

[7] Holm J,Nielsen NV,Hemmingsen L.Retinopathy in type Ⅱ diabetes mellitus associated with above-normal urinary excretion of RBP[J].Kidney Int Suppl,1994，47(1):105-108.

[8] 張琳.血清視黃醇結(jié)合蛋白、低密度脂蛋白膽固醇測(cè)定對(duì)糖尿病早期腎損傷的診斷價(jià)值[J].國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2012,33(5):611-612.

[9]Vaidya VS,Niewczas MA,Ficociello LH,et al.Regression of microalbuminuria in type 1 diabetes is associated with lower levels of urinary tubular injury biomarkers,kidney injury molecule-1,and N-acetyl-β-D-glucosaminidase[J].Kidney Int,2011,79(4):464-470.

[10]Bouvet BR,Paparella CV,Arriaga SM,et al.Evaluation of urinary N-acetyl-beta-D-glucosaminidase as a marker of early renal damage in patients with type 2 diabetes mellitus[J].Arq Bras Endocrinol Metabol,2014,58(8):798-801.

[11]Jeon YL,Kim MH,Lee WI,et al.Cystatin C as an early marker of diabetic nephropathy in patients with type 2 diabetes[J].Clin Lab,2013,59(11/12):1221-1229.

[12]Arun O,Celik G,Oc B,et al.Renal effects of coronary artery bypass graft surgery in diabetic and non-diabetic patients:a study with urinary neutrophil gelatinase-associated lipocalin and serum cystatin C[J].Kidney Blood Press Res,2015,40(2):141-152.

Diagnostic value of urine RBP,NAG combined with serum CysC detection in early kidney damage in type 2 diabetes mellitus

LuDan,ChenLifang,CaiJiedan

(DepartmentofClinicalLaboratory,LonggangDistrictPeople′sHospital,Shenzhen,Guangdong518172,China)

Objective To explore the diagnostic value of urine retinol binding protein (RBP),beta-N-acetyl amino glycosidase enzymes(NAG) combined with serum cystatin C(CysC) detection in early kidney damage of type 2 diabetes mellitus(T2DM).Methods Totally 58 cases of T2DM complicating in our hospital were selected as the group A,54 cases of simple T2DM (group B) and 52 individuals undergoing the physical examination(group C).The urine RBP,NAG and serum CysC were detected in three groups,their differences were compared.The positive rates for detecting early diabetic renal damage were compared between the single index detection and combined detection.Results The levels of urine RBP,NAG and serum CysC level in the group A were significantly higher than those in the group B and C,the differences were statistically significant(P<0.05); the levels of urine RBP,NAG and serum CysC level in the group B were significantly higher than those in the group C,the differences were statistically significant(P<0.05); The positive rates of single detection of RBP,NAG and CysC were 87.93%,86.21% and 84.48% respectively,the positive rate of 3-index combined detection was 94.83%,which was significantly higher than that of single index detection,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion Urine RBP,NAG and serum CysC are the sensitive indexes in early diabetic renal damage.The 3-index combined detection has better comprehensive sensitivity and possesses higher clinical application value.

diabetes; kidney damage; retinol binding protein; beta-N-acetyl amino glycosidase enzymes; cystatin C

魯?shù)ぃ鞴軝z驗(yàn)師，主要從事免疫方面疾病的診治工作。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.023 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1673-4130(2016)07-0928-03

2015-11-20)