T2DM患者血清25-(OH)D與HCY、β2微球蛋白關系及臨床意義

馮小娟，李海英，蔣 玲，秦繼寶，安仲武，薄維波，劉 霞，劉書敏△

(1.連云港市東方醫院檢驗科，江蘇連云港 222042；2.連云港市第二人民醫院檢驗科，江蘇連云港 222042)

·論 著·

T2DM患者血清25-(OH)D與HCY、β2微球蛋白關系及臨床意義

馮小娟1，李海英1，蔣 玲1，秦繼寶1，安仲武1，薄維波1，劉 霞2，劉書敏1△

(1.連云港市東方醫院檢驗科，江蘇連云港 222042；2.連云港市第二人民醫院檢驗科，江蘇連云港 222042)

目的 本研究通過檢測2型糖尿病(T2DM)患者血清25-羥維生素D[25-(OH)D] 和同型半胱氨酸(HCY)、β2微球蛋白(β2-MG)水平，探討T2DM患者血清25-(OH)D和HCY、β2-MG關系及臨床意義。方法 選擇139例T2DM患者，根據尿清蛋白/肌酐(Alb/Cr)比值(UACR)分為正常Alb尿組(UACR<30 mg/gCr)45例，微量Alb尿組(UACR≥30且<300 mg/gCr)48例，大量Alb尿組(UACR≥300 mg/gCr)46例，選取45例體檢健康者作為對照組。采用電化學發光法檢測血清25-(OH)D水平，酶法測定血清HCY水平，膠乳增強免疫比濁法測定血清β2-MG水平，同時檢測血糖(GLU)、糖化血紅蛋白(HbA1C)、血肌酐(Cr)、血清鈣(Ca2+)、磷(P5+)等生化指標。結果 DM患者血清25-(OH)D隨著尿清蛋白的增加而降低，微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D與正常Alb尿組和健康對照組比較明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)。微量Alb尿組和大量Alb尿組血清HCY、β2-MG水平較健康對照組均明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 血清25-(OH)D水平隨著尿蛋白的增加而降低，血清HCY、β2-MG水平隨著尿蛋白的增加而增加，血清25-(OH)D水平與HCY、β2-MG呈負相關。

25.羥維生素D； 同型半胱氨酸； β2-微球蛋白； 2型糖尿病

糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病嚴重的微血管并發癥之一，因其高致殘率與死亡率已成為繼心血管病、腫瘤之后威脅人類健康的第三大非感染性疾病。Mao等[1]研究發現，在2型糖尿病(type 2 diabetic mellitus，T2DM)患者中，血清同型半胱氨酸(homocysteine，HCY)水平與DN發展風險率和嚴重性密切相關。β2微球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)是一種微量蛋白，在正常情況下在尿液及血清中微量表達，腎臟病變時其水平會明顯增加[2]。維生素D可通過減輕胰島素抵抗、促進胰島細胞分泌胰島素、增加胰島素敏感性等途徑來改善T2DM患者血糖水平，同時作為抑炎因子通過抑制炎性反應來保護腎臟，從而有效地延緩DN的發展。本文通過檢測T2DM患者血清[25-(OH)D]和HCY、β2-MG水平變化，探討T2DM患者血清[25-(OH)D]和HCY、β2-MG關系及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2014年10月至2015年5月連云港市東方醫院內分泌科T2DM患者，排除原發性腎病、肝病、非糖尿病其他內分泌病、糖尿病急性并發癥、原發性骨質疏松、腫瘤、自身免疫性疾病、感染、服用影響骨代謝藥物等患者。以尿清蛋白/肌酐(Alb/Cr)比值(UACR)作為尿Alb排泄異常的指標，將T2DM患者分為3組，UACR<30 mg/g Cr 48例(正常Alb尿組)，男23例，女25例，年齡(58.8±12.0)歲；UACR 30～<300 mg/g Cr 46例(微量Alb尿組)，男24例，女22例，年齡(62.6±12.6)歲；UACR≥300 mg/g Cr 45例(大量Alb尿組)，男23例，女22例，平均年齡(62.0±11.2)歲；選擇本院同期體檢健康者45例作為健康對照組，男24例，女21例，年齡(58.8±11.4)歲。

1.2 儀器與試劑 血清[25-(OH)D]水平測定采用Roche電化學發光分析儀及配套試劑。血清HCY、β2-MG水平測定儀器采用西門子Dimension RXL Max全自動生化分析儀。酶法測定HCY，采用儀器原裝試劑；膠乳增強免疫比濁法測定β2-MG。寧波美康生物科技股份有限公司提供試劑及其配套的定標液和質控品。

1.3 方法 標本采集：采集所有研究對象空腹靜脈血5 mL和2 mL分別于分離膠管和EDTA-K2抗凝采血管，分離膠管標本放置室溫20 min待血液凝固，3 000 r/min離心10 min分離血清于-20 ℃低溫冰箱保存，用于檢測25-(OH)D和HCY、β2-MG水平，血糖(GLU)、血肌酐(Cr)等生化指標。EDTA-K2抗凝血標本用于檢測糖化血紅蛋白(HbA1C)。同時留取晨尿測定尿Alb和Cr，計算UACR(Alb/Cr)。血清標本檢測前處理：檢測前將所有標本從-20 ℃低溫冰箱取出，置37 ℃水浴箱快速復融，將所有標本于離心機3 000 r/min離心10 min后(避免其他蛋白的干擾)，吸取上清液檢測血清[25-(OH)D]和HCY、β2-MG水平，檢測前所有儀器用定標液進行定標，檢測質控品，將儀器調整至最佳狀態。

2 結 果

2.1 T2DM患者尿Alb含量隨著病程增加而增加，差異有統計學意義(P<0.01)；3組患者GLU、HbA1c與健康對照組比較顯著升高(P<0.01)；大量Alb尿組患者血清Cr與健康對照組比較明顯升高(P<0.01)；大量Alb尿組患者血清Ca2+與健康對照組比較明顯降低(P<0.01)，而血清P5+明顯升高(P<0.01)，見表1。

2.2 正常Alb尿組、微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D依次降低，差異有統計學意義(P<0.01)，微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D與正常Alb尿組和健康對照組比較明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)。微量Alb尿組和大量Alb尿組血清HCY、β2-MG較健康對照組均明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表1 T2DM患者與健康對照組的臨床資料

#：P<0.01,與正常Alb尿組比較；*：P<0.05，**：P<0.01,與健康對照組比較。

表2 T2DM患者血清[25-(OH)D]、HCY、β2-MG測定結果

*：P<0.05，**：P<0.01，與健康對照組比較；#：P<0.05，與正常Alb尿組比較；△：P<0.01,與大量Alb尿組比較。

3 討 論

近年研究發現維生素D缺乏是慢性腎臟病患者的突出特征[3]。本文研究顯示，T2DM患者正常Alb尿組、微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D依次降低，差異有統計學意義(P<0.01)，微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D與正常Alb尿組和健康對照組比較明顯降低，差異有統計學意義(P<0.01)。進一步證實維生素D缺乏的現實狀況，并且尿蛋白量越大，維生素D缺乏越嚴重。維生素D缺乏不僅可以加重胰島素抵抗、使胰島β細胞功能紊亂，而且可以增加糖尿病血管并發癥的發病率。而腎臟損傷病變也使得維生素D的吸收水平較健康者差，排泄增多，更加重了維生素D的缺乏。楊燁等[4]研究發現，活性維生素D3可通過抑制糖尿病大鼠腎臟轉化生長因子β1(TGF-β1)對糖尿病大鼠腎臟損傷有預防保護作用。另外，補充維生素D可減輕胰島素抵抗，保護胰島β細胞，控制T2DM患者血糖水平，間接保護腎臟。

HCY是蛋氨酸代謝的中間產物，是動脈粥樣硬化重要的潛在致病因素[5]。大量的研究表明高HCY血癥可以損傷血管內皮，在DN的發生、發展中可能發揮了一定的作用[6]。本文結果顯示，微量Alb尿組和大量Alb尿組血清HCY較健康對照組均明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)，且大量Alb尿組HCY水平較微量Alb尿組和正常Alb尿組明顯升高，差異有統計學意義(P<0.01)。表明在糖尿病并發腎臟輕微損傷時HCY就已明顯升高。Tomislav等[7]研究發現，1型糖尿病患者蛋白尿和eGFR正常時，血漿HCY就與視網膜病變獨立相關，進一步證實了HCY的內皮損傷作用。姚立騰等[8]認為高HCY血癥可以作為一種內源性致病因素，在DN的發展中發揮了一定的作用，具體的作用機制有待進一步研究。

β2-MG是人白細胞組織相容性抗原(HLA)的輕鏈，由100個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，屬于低分子蛋白質，相對分子質量約為12×103[9]。β2-MG能自由通過腎小球濾過膜，由腎小球濾過的β2-MG經腎小管時幾乎全部被重吸收，如果β2-MG排出增高，則說明腎小管重吸收功能障礙。因此，β2-MG檢測可作為衡量糖尿病患者輕度腎損傷的一項簡便而又敏感的方法。但是β2-MG易受炎癥、腫瘤、免疫等多種因素影響而升高，特異度較差。微量Alb尿組和大量Alb尿組血清β2-MG較健康對照組均明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)，大量Alb尿組β2-MG水平較微量Alb尿組和正常Alb尿組明顯升高，差異有統計學意義(P<0.01)，說明微量Alb尿組和大量Alb尿組的腎損傷程度逐漸加重。綜合比較，β2-MG水平在DN患者的腎損傷反映程度上，具有一定的參考價值。

25-(OH)D是體內維生素D最主要的存在形式，包括25羥維生素D2和25.羥維生素D3。腎臟病變時可能會影響維生素D的代謝，也有研究提示糖尿病患者的維生素D缺乏與DN獨立相關[10]。本文結果顯示，正常Alb尿組、微量Alb尿組和大量Alb尿組血清25-(OH)D依次降低，差異有統計學意義(P<0.01)。結果表明，腎臟損傷越嚴重，25-(OH)D水平越低，具體是腎臟損傷導致25-(OH)D水平降低還是25-(OH)D水平降低導致腎臟損傷，尚需進一步研究。

劉會苗等[11]研究，血清25-(OH)D與β2-MG的水平呈負相關。微量Alb尿組和大量Alb尿組血清HCY、β2-MG較健康對照組均明顯升高，差異有統計學意義(P<0.05)。結果表明，蛋白排泄量越大，腎功能損傷越嚴重，血清HCY、β2-MG水平越高，血清25-(OH)D水平越低，血清HCY、β2-MG水平對于腎臟損傷的評估起到了一定的作用。維生素D具有改善血糖水平、保護腎臟的功能，如早期給予糖尿病患者維生素D的補充，對減緩DN的發展將有很大的臨床意義。

[1]Mao S,Xiang W,Huang SM,et al.Association between homocysteine status and the risk of nephropathy in type 2 diabetes mellitus[J].Clinica Chimica Acta,2014,431(2):206-210.

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[6]劉小林.2型糖尿病患者血漿同型半胱氨酸檢測的臨床意義[J].臨床輸血與檢驗，2010，12(1)：41-43.

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[11]劉會苗,秦貴軍,余勤，等.2型糖尿病腎病患者血清25-羥維生素D3的變化及意義[J]．中華內分泌代謝雜志，2011,27(12):1002-1003.

Relationship between serum 25-hydroxy vitamin D with HCY and β2-microglobulin in patients with T2DM and its clinical significance

FengXiaojuan1,LiHaiying1,JiangLing1,,QinJibao1△，AnZhongwu1,BoWeibo1,LiuXia2,LiuShumin1

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,LianyungangMunicipalOrientalHospital,Lianyungang,Jiangsu222042,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory,LianyungangMunicipaSecondPeople′sHospital,Lianyungang,Jiangsu222042,China)

Objective To detect the serum levels of 25-hydroxy vitamin D[25-(OH)D]，homocysteine(HCY) and β2-microglobulin(β2-MG) in the patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM) and to investigate the relationship between serum HCY and β2-MG with 25-(OH)D and its clinical significance.Methods A total of 139 cases of T2DM were selected anddivided into 3 groups,the normal albuminuria group for[urinary albumin to creatinine ratio (UACR)<30 mg/gCr,45 cases],microalbuminuria group (UACR ≥ 30 mg/gCr and < 300 mg/gCr,48 cases) and massive proteinuria group (UACR ≥ 300 mg/gCr,46 cases) according to the urinary albumin to creatinine ratio (UACR).Other 45 individuals undergoing the physical examination were selected as the control group.The serum 25-(OH)D level was measured by electrochemiluminescence.Serum HCY level was determined by the enzymatic method.Serum β2-MG level was measured by the latex enhanced immune turbidity method.At the same time,the biochemical indicators of FBG,HbA1C,serum calcium and phosphorus were measured.Results The serum 25-(OH)D level was decreased with the increase of urinary albumin in the DM patients.And the serum 25-(OH)D level in the microalbuminuria group and the massive proteinuria group was significantly decreased compared with the normal albuminuria group and the control group,the difference was statistically significant(P<0.01).The serum HCY and β2-MG levels in the microalbuminuria group and the massive proteinuria group were significantly increased compared with the healthy control group,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion The serum 25-(OH)D level is decreased with the increase of urinary albumin in the diabetic patients.The serum HCY and β2-MG levels are increased with the increase of urinary albumin and serum 25-(OH)D level is negatively correlated with the HCY and β2-MG levels.

25-hydroxy vitamin D; homocysteine; β2-microglobulin; type 2 diabetes mellitus

馮小娟，女，主管檢驗技師，主要從事糖尿病腎病的臨床生化研究。△通訊作者,E-mail:15261379935@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.017 文獻標識碼：A 文章編號：1673-4130(2016)07-0912-03

2015-10-28)