孕晚期肌肉注射HBIG與新生兒及產后乳汁HBV-DNA含量相關性分析*

米永華，黎 洋

(重慶醫科大學附屬永川醫院檢驗科 402160)

·論 著·

孕晚期肌肉注射HBIG與新生兒及產后乳汁HBV-DNA含量相關性分析*

米永華，黎 洋△

(重慶醫科大學附屬永川醫院檢驗科 402160)

目的 通過對孕產婦各個時期注射高效價乙肝免疫球蛋白(HBIG)后血清及乳汁中HBV DNA含量的分析、比較，為乙肝攜帶者孕產婦的乙肝病毒的母嬰阻斷及產后母乳喂養方案提供實驗依據。方法 選取2012年6月至2014年6月在該院產科門診進行產前檢查HBsAg(+)的乙肝攜帶者孕婦140例，根據自愿、保密的原則，分為研究組和對照組，其中研究組75例于孕期 28、 32、 36 周進行肌注高效價 HBIG 200 U，對照組65例中的孕產婦由于各種原因在孕期未進行HBIG注射。分別于注射前、分娩前檢測兩組血清中HBV DNA含量、分娩后對新生兒血清及3～5 d內乳汁進行HBV DNA含量檢測，分析兩組的差異及相關性。結果 注射HBIG前研究組HBV DNA含量<500 copies/mL、500-1×106copies/mL、>1×106copies/mL分別為：28例、17例、30例，產前分別為：35例、20例、20例；對照組產前2次檢測為：19例、21例、25例及20例、17例、28例；在研究組與對照組中新生兒血清 HBV DNA 陽性分別為：1例(5.3%)及5例(7.7%)；在兩組乳汁中HBV DNA陽性分別為：3例(4%)和8例(12.3%)。結論 乙肝攜帶者孕婦在孕晚期進行HBIG的注射可能影響其乙肝病毒的復制進而減少新生兒宮內感染的概率，同時降低其產后乳汁的HBV DNA的陽性率。

HBV DNA； 母乳喂養； 母嬰傳播； 乙肝病毒攜帶者； 乙肝免疫球蛋白

乙肝病毒(HBV)感染是當前較為嚴重的世界健康問題，我國是一個HBV感染的高發區，在人群中乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)攜帶者，有40%～50%是通過母嬰垂直傳播被動感染的。因此，如何減少我國乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)攜帶者數量，切實有效的措施就是減少母體血液、乳汁中HBV的含量，切斷母嬰傳播途徑，減少圍生期新生兒被感染率。對于乙肝攜帶者孕晚期注射乙肝免疫球蛋白(HBIG)阻斷HBV宮內感染的效果和產后母乳喂養會否傳染 HBV仍存在一定的爭議[1-5]，本文采用熒光定量 PCR技術檢測乙型肝炎病毒攜帶孕產婦血清、乳汁及新生兒血清中 HBV DNA含量，分析孕產婦在經過HBIG阻斷或者未經處理后其不同時期的血清中HBV DNA濃度含量，以及對乳汁和新生兒血清HBV DNA濃度的影響，為乙肝病毒攜帶者孕晚期的處理和產后母乳喂養提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年6月至2014年6月間在本院產科門診行孕期產前檢查的乙型病毒性肝炎病毒攜帶產婦140例，其平均年齡27.2歲，最大42歲，最小20歲。根據自愿、保密原則分為研究組和對照組，其中研究組分別在孕期28、32、36周給予高效價HBIG肌肉注射200 U，非用藥組不采取治療措施。兩組均按照孕婦產前保健手冊按時到醫院進行孕期各項檢查。

1.2 標本采集方式 血清：所有研究對象于孕期12周、產前分別采集空腹靜脈抗凝血標本2 mL，新生兒出生后 24 h 內乙肝被動-主動免疫前股靜脈采集標本，所有標本均在 2 h 內分離，待檢。乳汁：于產婦分娩后3～5 d內乳房局部清洗消毒后用一次性無菌容器采取乳汁1～2 mL，將乳汁3 000 r/min棄上層脂肪，取中層乳清進行乳汁HBV DNA檢測(檢測方法同血液標本)。

1.3 HBV DNA熒光定量PCR檢測 儀器：上海宏石SLAN6.0，試劑:乙型肝炎病毒核酸定量測定試劑盒(PCR-熒光探針法)

1.3.1 試劑準備 取出試劑，衡溫，備用。根據待測樣本、陰陽性對照以及定量參考品A-D，按比例取相應量的反應液、酶混合液及內標，充分混合成PCR-mix,瞬時離心后備用。

1.3.2 樣本處理 在反應管中加入核酸釋放劑5 μL，然后分別加入待測樣本、陰陽性對照以及定量參考品A-D各5 μL,混勻。10 min后，加入PCR-mix 40 μL，2 000 r/min離心30 s。

1.3.3 PCR擴增 將PCR反應管放入擴增樣品槽，按對應順序設置陰陽性對照、定量參考品A-D及未知樣本，并設置樣本名稱定量參考濃度，選擇熒光檢測通道，設定循環參數。

1.3.4 結果分析 反應結束后自動保存結果，根據分析后圖像調節Baseline的Start值、End值以及Threshold值，進行分析，得出結果。

1.4 統計學處理 所有實驗數據都應用SPSS19.0統計軟件包進行統計學處理、分析，計量資料用t檢驗，計數資料以χ2檢驗，P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 在表1中可見研究組在孕期28、32、36周給予高效價HBIG肌肉注射200 U后血清中HBV-DNA含量較以前有所下降，但是P>0.05，無統計學意義，對照組中各組的HBV-DNA含量差異無統計意義(P>0.05)。表明對于乙肝攜帶者孕產婦在孕期給予高效價HBIG肌肉注射對于降低血清中HBV-DNA含量無明顯意義。

表1 孕婦產前HBV DNA檢測變化情況

2.2 表2可見研究中初乳及新生兒HBV DNA陽性占4%和5.3%，對照組占12.3%和7.7%。兩組中對照組較研究組有明顯差異(P<0.05)，表明在孕晚期給予高效價HBIG肌肉注射可能對于減少新生兒宮內感染率及產后初乳的HBV DNA陽性率有一定的意義。

表2 產婦初乳及新生兒血清中HBV DNA

*：P<0.05，與研究組比較。

3 討 論

HBV感染的最主要的傳播途徑是母嬰垂直傳播，其中傳播的方式主要有：產前宮內感染、 分娩時傳播(產道感染)及產后水平傳播(產后感染)。馬靜等[6]研究發現血清中高濃度的HBV DNA含量將直接影響其產前宮內感染率。因此，在此環節需降低孕婦HBV DNA含量從而控制新生兒發生宮內感染，本研究中觀察不同濃度血清HBV DNA含量孕婦給予高效價HBIG肌肉注射后其HBV DNA濃度較注射之前有所下降，但差異無統計學意義，對于新生兒HBV-DNA陽性率統計中發現研究組明顯低于對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。因此，對于有條件的家庭來說，筆者建議在孕期給予高效價HBIG肌肉注射，其可能對于減少其宮內感染有一定的作用。產道感染大部分是由于分娩時胎盤剝離，母血通過臍靜脈進入胎兒體內，還有一些是胎兒經過產道時，皮膚擦傷而接觸了母血受到感染。對于此種感染方式的預防需要產科醫師密切配合。產后感染途徑只要是食物傳播，對于新生兒來說，就是母乳傳播以及密切接觸?？偹苤?，母乳是嬰兒成長最理想的營養品,它富含水、 優質蛋白、不飽和脂肪酸、 乳糖、 礦物質及維生素,以及免疫球蛋白,有益于嬰兒生長發育,國家大力提倡母乳喂養，但是對 HBsAg陽性產婦可否采用母乳喂養尚無統一意見[7-8],對于檢查產婦初乳中HBV DNA含量，是指導新生兒喂養方式的一個較為科學的辦法，血液中的 HBV主要來源于肝臟，而乳汁中的 HBV 主要來源于血液。當乳汁中含有高濃度的HBV DNA時，嬰兒吸吮母乳時也將吸入含有HBV-DNA的血液。因此，但當新生兒口腔、 咽喉、 食道、 胃腸黏膜等處有破損、 潰瘍時，HBV 就可能通過毛細血管進入血液循環而引起其感染。本研究中發現在孕期注射高效價HBIG組中，產后乳汁中HBV DNA陽性率明顯下降，這也為新生兒進行母乳喂養提供理論依據。

綜上所述，在對于乙肝攜帶者孕婦在孕晚期進行規律的高效價HBIG肌肉注射，可能降低新生兒宮內感染率及初乳中HBV DNA陽性率，從而降低新生兒感染HBV的概率并為其母乳喂養提供理論依據。

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[6]馬靜，隋景玉，白寶敏，等.孕婦血清 HBV DNA 含量在母嬰傳播中的意義[J].實用全科醫學，2007,5(5)：395-396.

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Analysis on correlation between intramuscular HBIG in late pregnancy with neonatal and postnatal milk HBV DNA content*

MiYonghua,LiYang△

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedYongchuanHospital,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing402160,China)

Objective To analyze and compare the HBV DNA contents in serum and breast milk after injection of hepatitis B immunoglobulin (HBIG) in different periods of pregnant and lying-in women to provide the experimental basis for blocking the maternal-neonatal transmission(PMTCT) and breast feeding scheme.Methods 140 pregnant women carrying hepatitis B virus with HBsAg(+) by antenatal examination in the obstetric outpatient department of our hospital from June 2012 to June 2014 were selected and divided into the research group and the control group according to the voluntary and secretive principle.Among them,75 cases in the research group were intramuscularly injected by high titer HBIG 200 U at 28,32,36 weeks of pregnancy,while 65 cases in the control group were injected by HBIG at the end of pregnancy due to different causes.Serum HBV-DNA content before injection and before delivery was detected in the two groups,and which in neonatal serum and breast milk within 3-5 d also detected.The differences and correlation between the two groups were analyzed.Results The HBV-DNA content <500 copies/mL，500-1×106copies/mL，>1×106copies/mL before HBIG injection in the research group were 28 cases，17 cases，30 cases respectively,which before delivery were 35 cases，20 cases，20 cases respectively; which in antenatal twice detection in the control group were 19 cases，21 cases，25 cases and 20 cases，17 cases，28 cases respectively;neonatal serum HBV-DNA positive in the research group and control group had 1 case(5.3%) and 5 cases (7.7%) respectively；the breast milk HBV-DNA positive in the two groups had 3 cases(4%)/ and 8 cases(12.3%) respectively.Conclusion HBIG injection at late pregnancy in the pregnant women carrying HBV could influence the HBV replication,thus reduces the probability of neonatal intrauterine infection,at the same time reduces the HBV-DNA positive rate of postpartum breast milk.

HBV-DNA； milk breast； maternal-neonatal transmission； hepatitis B virus carriers； hepatitis B immune globulin

永川市科委基金資助項目(2012BE5022)。

米永華,女，主管技師，主要從事腫瘤診斷方法學研究。

△，E-mail：iamliyang@163.com。

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.005 文獻標識碼：A 文章編號：1673-4130(2016)07-0878-03

2015-11-18)