柴胡皂甙A對(duì)膿毒癥大鼠早期血清中炎癥因子的影響

李淑萍　張宇

【摘要】 目的 探討柴胡皂甙A（SsA）對(duì)膿毒癥大鼠早期血清中炎癥因子的影響。方法 90只清潔級(jí)SD大鼠， 隨機(jī)分為對(duì)照組、膿毒癥組和治療組（膿毒癥+SsA）， 各30只。通過盲腸結(jié)扎穿孔建立膿毒癥大鼠模型， 術(shù)后1、8、24 h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集動(dòng)脈血標(biāo)本。酶聯(lián)免疫分析法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）濃度。結(jié)果 與對(duì)照組比較， 膿毒癥組大鼠血清TNF-α、IL-6水平在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)均明顯升高（P<0.05）。在8、24 h時(shí)間點(diǎn)， 治療組大鼠TNF-α、白細(xì)胞介素-1（IL-1）的含量均較膿毒癥組各時(shí)間點(diǎn)顯著降低（P<0.05）。結(jié)論 SsA可抑制膿毒癥大鼠早期炎癥反應(yīng)。

【關(guān)鍵詞】 柴胡皂甙A；膿毒癥；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-1；大鼠

膿毒癥是由細(xì)菌感染引發(fā)的全身性炎癥反應(yīng)， 常見于嚴(yán)重創(chuàng)傷、燒傷、休克及大手術(shù)后， 可導(dǎo)致多器官功能衰竭， 是臨床重癥患者主要死亡原因之一[1]。雖然近年來對(duì)該疾病的發(fā)病機(jī)制等已有較多的理解且出現(xiàn)了較多的治療方法和藥物， 但目前此重癥的治療效果仍不令人滿意。據(jù)統(tǒng)計(jì)， 膿毒癥死亡率在1979～2000年為0.022%～0.044%， 占美國(guó)全年總死亡率的9%[2]。SsA是從傳統(tǒng)中藥柴胡中提取的有效單體成分。已有研究證明SsA具有抗氧化、抗炎及肝臟保護(hù)等生物學(xué)活性， 但其是否可用于膿毒血癥治療尚未有相關(guān)研究報(bào)道。本研究通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)建立大鼠膿毒癥模型， 檢測(cè)術(shù)后多時(shí)間點(diǎn)TNF-α和IL-6水平的變化情況， 旨在明確SsA對(duì)膿毒癥早期炎癥反應(yīng)的影響。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 清潔級(jí)SD大鼠90只， 雌雄不限， 平均體重（200±20）g， 購(gòu)自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、膿毒癥組和治療組（膿毒癥+5.0 mg/kg SsA）， 每組30只。

1. 2 方法 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周， 自由飲食， 實(shí)驗(yàn)前禁食過夜。依Rittirsch D等[3]所報(bào)道的方法， 通過盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)（CLP）建立大鼠膿毒癥模型。10%水合氯醛（3 ml/kg）腹腔麻醉， 沿腹部正中線作約1.5 cm切口， 尋找到盲腸并在其根部進(jìn)行結(jié)扎。使用18號(hào)針穿刺盲腸3次， 擠壓盲腸見有糞便溢出， 將盲腸還納回腹腔， 關(guān)閉腹壁切口。對(duì)照組大鼠在找到盲腸后即關(guān)閉腹壁切口， 盲腸不作結(jié)扎穿刺。治療組大鼠在CLP術(shù)后立即經(jīng)尾靜脈注射SsA（購(gòu)自上海醫(yī)藥工業(yè)研究院， 純度>98%， 5.0 mg/kg）。

1. 3 檢測(cè)炎癥因子TNF-α和IL-6 分別于術(shù)后1、8、24 h 三個(gè)時(shí)間點(diǎn)從腹主動(dòng)脈收集動(dòng)脈血標(biāo)本。4℃靜置30 min， 4000 r/min離心15 min并保存血漿于-80℃冰箱。采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒（美國(guó)R&D公司）檢測(cè)TNF-α和IL-6含量， 操作過程嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行， 數(shù)據(jù)以pg/ml表示。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 三組大鼠血清TNF-α水平比較 CLP術(shù)后1 h， 膿毒癥組及治療組大鼠血清TNF-α含量明顯高于對(duì)照組（P<0.01）， 治療組大鼠TNF-α水平低于膿毒癥組大鼠（P<0.05）；術(shù)后8 h， 膿毒癥組大鼠TNF-α水平明顯高于本組大鼠1 h時(shí)TNF-α水平（P<0.05）， 而治療組大鼠TNF-α含量較膿毒癥組大鼠明顯降低（P<0.01）；術(shù)后24 h， 治療組大鼠TNF-α含量較同時(shí)間點(diǎn)膿毒癥組大鼠及本組8 h時(shí)間點(diǎn)大鼠均明顯降低（P<0.01）。見表1。

2. 2 三組大鼠血清IL-6水平比較 CLP術(shù)后1 h， 膿毒癥組及治療組大鼠血清IL-6含量明顯高于對(duì)照組大鼠（P<0.01）；術(shù)后8 h， 膿毒癥組大鼠IL-6水平明顯高于本組大鼠1 h時(shí)IL-6水平（P<0.05）， 而治療組大鼠IL-6含量較膿毒癥組大鼠明顯降低（P<0.01）；術(shù)后24 h， 治療組大鼠IL-6含量較同時(shí)間點(diǎn)膿毒癥組大鼠及本組8 h時(shí)間點(diǎn)大鼠均明顯降低（P<0.01）。見表2。

3 討論

膿毒癥早期發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)是失控性的炎癥反應(yīng)。已有研究認(rèn)為， 機(jī)體早期釋放的細(xì)胞因子在該炎癥反應(yīng)中起到啟動(dòng)作用[4]。TNF-α是炎癥反應(yīng)中釋放最早并且也是最重要的致炎因子， TNF-α也可產(chǎn)生調(diào)節(jié)IL-6和IL-8等其他炎癥介質(zhì)的釋放， 產(chǎn)生級(jí)聯(lián)效應(yīng)， 進(jìn)一步加重組織細(xì)胞損傷， 甚至發(fā)展為多器官功能障礙[5]。因此， 抗炎治療尤其是早期抑制炎癥反應(yīng)是治療膿毒癥的重點(diǎn)。

SsA是柴胡根莖的主要活性提取物， 屬于三萜皂苷化合物， 具有抗氧化、抗炎及肝臟保護(hù)等生物學(xué)活性。體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)， SsA可明顯降低TNF-α、 IL-1β、IL-6及前列腺素E2等炎性因子水平[6]。在CCl4所誘導(dǎo)的大鼠肝炎模型中， SsA可明顯降低大鼠血清中TNF-α， IL-1β， IL-6和IL-8水平[7]。但目前尚未見有關(guān)膿毒癥早期使用SsA進(jìn)行抗炎治療的研究報(bào)道。

本研究顯示， CLP術(shù)后1 h， 膿毒癥組及治療組大鼠血清TNF-α和IL-6含量明顯高于對(duì)照組大鼠（P<0.01）。而CLP術(shù)后8 h， 與膿毒癥組大鼠相比較， SsA治療組大鼠TNF-α和IL-6水平明顯降低（P<0.01）。術(shù)后24 h， SsA治療組大鼠血清TNF-α和IL-6含量較同時(shí)間點(diǎn)膿毒癥大鼠及本組8 h時(shí)間點(diǎn)大鼠明顯降低（P<0.01）， 提示SsA對(duì)膿毒癥大鼠早期炎性因子的釋放發(fā)揮了明顯的抑制作用， 降低炎癥反應(yīng)程度， 阻斷膿毒癥早期炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)的過程， 為膿毒癥臨床早期干預(yù)性治療提供了新思路。但需要指出， 本實(shí)驗(yàn)未對(duì) SsA的內(nèi)在抗炎作用機(jī)制進(jìn)行闡明， 因此有待進(jìn)一步研究。

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[收稿日期：2015-11-23]