微生物比濁法測定注射用替考拉寧的效價含量

張文杰(沈陽醫學院附屬第二醫院藥劑科，遼寧 沈陽　110002)

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微生物比濁法測定注射用替考拉寧的效價含量

張文杰*(沈陽醫學院附屬第二醫院藥劑科，遼寧 沈陽110002)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.03.031

摘要目的：建立比濁法測定注射用替考拉寧效價含量的方法，以用于其質量控制。方法：分別采用微生物比濁法和管碟法對注射用替考拉寧的效價進行檢定，比較2種方法的效果。結果：替考拉寧線性范圍為5.0～15.0 u/ml，濃度的對數與吸光度成良好的線性關系，線性方程為A=1.372-0.792 6l gC(r=0.997)，平均回收率為100.46%，RSD為0.85%。結論：比濁法和管碟法測定注射用替考拉寧效價含量的結果無顯著差異。微生物比濁法靈敏、準確、可靠、重現性好，可用于注射用替考拉寧的質量控制。

關鍵詞效價； 含量； 比濁法； 管碟法； 替考拉寧

Determination of Content of Teicoplanin for Injection by Microbiological Turbidimetric Method

ZHANG Wenjie (Dept.of Parmacy, the Second Affiliated Hospital of Shenyang Medical College, Liaoning Shenyang 110002, China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish a microbiological turbidimetri method for the determination of content of teicoplanin for injection, so as to control its quality. METHODS: Microbiological turbidimetri method and cup-plate method were respectively adopted to detect and compare the the potency of teicoplanin for injection, and the effects of two methods were compared. RESULTS: The calibration curve was linear with the logarithm of concentration range of 5.0-15.0 (μ/ml) of teicoplanins, the linear equation wasA=1.372-0.792 6l gC(r=0.997), the average recovery was 100.46%,RSDwas 0.85%. CONCLUSIONS: There was no significant difference in the determination of content of teicoplanin for injection between turbidimetric method and cup-plate method. Microbiological turbidimetri method is sensitive, accurate, reliable and reproducible, suitable for quality control of teicoplanin for injection.

KEYWORDSPotency; Content; Turbidimetric method; Teicoplanin

替考拉寧作為一種重要的抗菌藥物，臨床主要用于多重耐藥菌感染的治療[1]。為了更好的控制藥品的質量，保證藥品的安全有效，參考相關文獻[2-7]，本研究采用微生物比濁法《中國藥典》(2005年版)對該制劑含量進行測定，并與該制劑含量測定的現行標準的管碟法進行比較，以評價該制劑的質量控制方法，現報告如下。

1儀器與試藥

島津UV-260型紫外分光光度計(日本島津公司)；WBS-200多功能微生物比濁法自動測量分析儀與ZY-300微生物管碟效價測定儀(北京先驅威烽技術開發公司生產)。

金黃色葡萄球菌 [CMCC(B)26003]和枯草芽孢桿菌 [CMCC(B)63501] 由中國食品藥品檢定院提供。替考拉寧標準品(批號130374-201201；效價847 u/mg)由中國食品藥品檢定院提供。注射用替考拉寧(批號：2012016，2012017，2012018；規格1.0 g)為市場上購買。營養肉湯培養基(批號120509)；抗菌藥物檢定培養基Ⅱ(pH 6.5，批號120107)由北京三藥科技開發公司提供。甲醛、氯化鈉、磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀為分析純；0.9%氯化鈉注射液和磷酸鹽緩沖液(pH 6.0)均按《中國藥典2部》(2010年版)附錄配制。

2方法與結果

2.1管碟法

取裝量差異項下的供試品細粉適量，精密稱定，用pH 6.0的磷酸鹽緩沖液制成每1 ml中約含1 000 u/ml的溶液，按照《中國藥典2部》(2010年版)附錄Ⅺ A中抗菌藥物微生物檢定法測定。高、低濃度分別為40 u/ml和20 u/ml，試驗菌為枯草芽孢桿菌 [CMCC(B)63501]，培養溫度36～37 ℃，培養時間14～16 h。

2.2比濁法

2.2.1菌液及含菌培養基的制備:取金黃色葡萄球菌新鮮斜面培養物一白金耳，接種于營養肉湯培養基100 ml中，搖勻，使其在530 nm波長處的吸光度約為1.0，為含菌培養基。

2.2.2溶液的配制:取替考拉寧標準品，精密稱定，加滅菌水稀釋至1 000 μ/ml備用；作為標準品溶液；另取裝量差異項下的注射用替考拉寧，精密稱定，加滅菌水稀釋至1 000 μ/ml制成溶液，取樣3批，分別制備，作為供試品溶液。

2.2.3測定方法:精密量取供試品溶液1 ml置滅菌試管中，每個濃度9管，分別精密加入菌液培養基9 ml，立刻搖勻，放入比濁法自動測量分析儀中，于37 ℃培養5 h取出，立即加入甲醛溶液(1→5)0.5 ml，充分混勻；標準品溶液測定同上述方法一樣。以含9.0 ml菌液培養基、1.0 ml磷酸鹽緩沖液和0.5 ml甲醛溶液(1→5)同條件培養的溶液為空白液；分別于紫外分光光度計530 nm波長處測定供試液和空白液試管中金黃色葡萄球菌對數生長期內的不同培養時間吸光度值(A)。

2.2.4線性關系及范圍:精密量取標準品溶液適量，分別用磷酸鹽緩沖液稀釋成濃度分別為5.0、7.0、9.0、11.0、13.0、15.0 u/ml的溶液，作為供試液，照“2.2.3”項下測定方法測得吸收度，以濃度(C)的負對數値為橫坐標，吸收度(A)為縱坐標進行線性回歸，得線性方程：A=1.372-0.792 1 gC(r=0.997)。結果，替考拉寧在5.0～15.0 μ/ml的濃度范圍內與吸光度線性關系良好，并通過t檢驗可靠性測驗結果判定證明回歸效果顯著。

2.2.5回收率試驗:精密量取標準品溶液適量，用磷酸緩沖溶液分別稀釋成濃度為5.0、10.0、15.0 μ/ml的溶液各6份，按“2.2.3”項下測定方法測定吸收度，計算回收率和RSD%，見表1。由表1可見，平均回收率為100.46%，RSD為0.85%。

表1　回收率試驗結果(μ/ml)

2.2.6精密度試驗:取“2.2.5”項下回收率試驗10.0 μ/ml濃度標準品溶液作9支管，按“2.2.3”項下測定方法測定吸收度，計算吸光度RSD為1.7%。

2.2.7穩定性試驗：取10.0 μ/ml濃度標準品溶液經0、1、3、4 h分別測其吸光度値，計算RSD為0.97%。

2.2.8樣品的測定:分別用管碟法和比濁法對3批樣品進行含量測定：取樣品分別用磷酸鹽緩沖液稀釋濃度為10.0 μ/ml作為供試液。按“2.2.3”項下測定方法測定吸收度，并計算含量，并與管碟法含量進行了比較，2種方法結果一致，見表2。

3討論

由于任何影響液體培養基內微生物生長的因素和儀器的性能均會影響測定的準確性，因此，在試驗中應考慮培養時間的控制、培養溫度均一性及試驗菌液的配制和培養管的均一性。《中國藥典》(2005年版)新增比濁法，與管碟法比較，比濁法具有快速靈敏，精密度好的特點。

表2　種方法測定結果比較

本研究中試驗培養4 h，當日出結果。采用管碟法測定時，高低劑量的劑距不大，且易產生雙圈現象，效價測定時的可信限率不是很好。比濁法測定時高低劑量的劑距較大，避免了上述影響，且培養時間短，因此測定更為快速，準確，可信限率較小[8-11]。

綜上所述，替考拉寧是種多組分抗菌藥物主要通過微生物發酵法生成，同管碟法比較，比濁法測定注射用替考拉寧的效價含量操作方便、靈敏度高、重復性好、檢驗時間短、輔料無干擾、可信限率低、人為影響因素少。因此，比濁法能夠應用于注射用替考拉寧效價測定[12-14]。

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(收稿日期：2015-07-02)

中圖分類號R927

文獻標志碼A

文章編號1672-2124(2016)03-0364-02

*副主任中藥師。研究方向：藥物分析。E-mail:593438436@qq.com