電化學(xué)發(fā)光技術(shù)測(cè)定25羥基維生素D的性能驗(yàn)證

向　波，劉忠民，覃潤(rùn)東

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510120)

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·臨床研究·

電化學(xué)發(fā)光技術(shù)測(cè)定25羥基維生素D的性能驗(yàn)證

向波，劉忠民，覃潤(rùn)東

(廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東廣州 510120)

摘要:目的對(duì)電化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)25羥基維生素D項(xiàng)目進(jìn)行性能驗(yàn)證，以確保實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確。方法依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)文件，對(duì)電化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)25羥基維生素D的精密度、正確度、線性范圍、參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果高、低濃度的批內(nèi)變異系數(shù)(CV)分別為3.18%和3.38%，批間變異系數(shù)分別是13.37%和6.23%，均小于廠家聲明的不精密度或驗(yàn)證值；正確度驗(yàn)證試驗(yàn)偏倚未超過(guò)原衛(wèi)生部規(guī)定的最大允許誤差的1/2；驗(yàn)證的線性范圍為3.165～48.515 ng/mL；參考范圍驗(yàn)證20份體檢標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果均在廠家提供的參考區(qū)間內(nèi)。結(jié)論電化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)25羥基維生素D項(xiàng)目性能驗(yàn)證通過(guò)，可用于臨床檢測(cè)。

關(guān)鍵詞:25羥基維生素D；性能驗(yàn)證；精密度;電化學(xué)發(fā)光技術(shù)

維生素D狀態(tài)評(píng)估是防止骨質(zhì)疏松癥的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，眾多研究均強(qiáng)調(diào)良好的維生素D狀態(tài)對(duì)骨骼健康和長(zhǎng)期接受抗骨質(zhì)疏松治療非常重要。在老年人常見(jiàn)的高血壓、腫瘤(前列腺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌等)、糖尿病、多發(fā)性硬化、免疫功能失調(diào)等疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中，維生素D也起重要作用。血清25羥基維生素D是評(píng)估維生素D狀態(tài)的最佳指標(biāo)[1]。本實(shí)驗(yàn)室擬開(kāi)展25羥基維生素D檢測(cè)項(xiàng)目。按照中華人民共和國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證(WS/T 420-2013)》要求，臨床實(shí)驗(yàn)室使用廠家已經(jīng)過(guò)嚴(yán)格評(píng)估的檢驗(yàn)方法或試劑盒之前，還要驗(yàn)證相關(guān)分析性能以證實(shí)在本實(shí)驗(yàn)室能達(dá)到廠家聲稱的分析性能指標(biāo)，從而保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確。因此本實(shí)驗(yàn)室對(duì)電化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)25羥基維生素D的精密度、正確度、線性范圍、生物參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源選擇2014年8月1日至10月31日在本院就診患者和體檢者的新鮮血清和中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院(以下簡(jiǎn)稱中大附一醫(yī)院)體檢者的新鮮血清，標(biāo)本無(wú)溶血、黃疸、脂濁。

1.2儀器與試劑德國(guó)Roche公司Modular E170全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，所用試劑為儀器原裝配套試劑盒、定標(biāo)液、質(zhì)控液。

1.3方法

1.3.1精密度驗(yàn)證選擇低濃度(批號(hào)173190)和高濃度(批號(hào)173191)兩個(gè)濃度水平的質(zhì)控品，試驗(yàn)持續(xù)5 d，每批每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算批內(nèi)不精密度、批間不精密度。若實(shí)測(cè)結(jié)果小于廠家聲明的不精密度或驗(yàn)證值，則結(jié)論為精密度驗(yàn)證通過(guò)。

1.3.2正確度驗(yàn)證本科室與使用相同檢測(cè)系統(tǒng)的中大附一醫(yī)院檢驗(yàn)中心進(jìn)行結(jié)果比對(duì)，在獲取的20份標(biāo)本中隨機(jī)抽取5份已在中大附一醫(yī)院檢驗(yàn)中心測(cè)定25羥基維生素D的標(biāo)本，在本實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行測(cè)定，得出結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，若結(jié)果偏倚未超過(guò)允許范圍，驗(yàn)證通過(guò)。

1.3.3線性范圍驗(yàn)證選擇低(L)、高(H)濃度水平混合血清(盡可能接近說(shuō)明書的線性高低值)，按比例配制成系列濃度的6個(gè)標(biāo)本：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H。在質(zhì)控在控的情況下，每個(gè)標(biāo)本重復(fù)測(cè)定2次。判斷標(biāo)準(zhǔn)：預(yù)期值與實(shí)測(cè)值作回歸統(tǒng)計(jì)，斜率在0.97～1.03并且R2≥0.95則認(rèn)為在該濃度范圍內(nèi)呈線性。

1.3.4生物參考區(qū)間驗(yàn)證表面健康人入選原則：從既往檢驗(yàn)人員中獲取20例表面健康者，考慮性別和年齡分布。具體人員情況：共20例。其中男10例，年齡21～70歲；女10例，年齡23～69歲。判斷標(biāo)準(zhǔn)：若20份標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果均在廠家提供的參考范圍內(nèi)，則實(shí)驗(yàn)室可直接使用廠家提供的參考范圍。

2結(jié)果

2.1精密度驗(yàn)證批內(nèi)及批間不精密度結(jié)果見(jiàn)表1,批內(nèi)及批間標(biāo)準(zhǔn)差與驗(yàn)證值見(jiàn)表2。

表1　　批內(nèi)及批間不精密度

2.2正確度驗(yàn)證5份標(biāo)本比對(duì)結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3線性范圍驗(yàn)證維生素D的低值和高值分別是3.16、48.52 ng/mL。統(tǒng)計(jì)軟件多項(xiàng)式回歸數(shù)據(jù)擬合結(jié)果顯示：線性方程為Y=1.002 9X+0.069 3，R2為0.999 1，斜率為1.003。見(jiàn)表4。

表2　　批內(nèi)及批間標(biāo)準(zhǔn)差與驗(yàn)證值比較

2.4生物參考區(qū)間驗(yàn)證廠家提供的參考范圍：>20 ng/mL;20份體檢標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果最低值為20.55 ng/mL，最高值為50.28 ng/mL，均值為30.90 ng/mL。

表3　　正確度驗(yàn)證結(jié)果

表4　　線性試驗(yàn)的實(shí)測(cè)均值與預(yù)期值

3討論

維生素D有廣泛的生理作用，不僅可以維持鈣、磷濃度的穩(wěn)定，促使骨的礦化，還能誘導(dǎo)細(xì)胞分化、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡以及免疫調(diào)節(jié)作用，是癌癥和其他慢性疾病風(fēng)險(xiǎn)的獨(dú)立預(yù)示因子[2]。如有文獻(xiàn)報(bào)道，宮頸癌患者的維生素D水平顯著低于健康人群[3]。維生素D因與陽(yáng)光關(guān)系密切，又稱為陽(yáng)光維生素[4]。但是近年由于環(huán)境污染加劇、霧霾天氣增加等因素，人類從大自然中攝取維生素D的途徑越來(lái)越少[5]。因此，實(shí)驗(yàn)室及時(shí)開(kāi)展維生素D檢測(cè)，監(jiān)測(cè)人體的維生素D水平，對(duì)預(yù)防疾病、維護(hù)機(jī)體健康有著重要意義。

根據(jù)2003年CLIA′88更新說(shuō)明，由FDA證實(shí)的、未被修改的中等復(fù)雜的檢驗(yàn)項(xiàng)目，在實(shí)驗(yàn)室報(bào)告患者結(jié)果前，需檢查(確認(rèn))在產(chǎn)品說(shuō)明書中的廠商性能指標(biāo)：正確度、精密度、可報(bào)告范圍、參考范圍。我國(guó)的衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)也明確提出：臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在正式使用商品定量試劑盒前，對(duì)廠家聲稱的各項(xiàng)主要分析性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證，依據(jù)CLIA′88要求，臨床實(shí)驗(yàn)室可只對(duì)正確度、精密度和線性主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證[6]。本實(shí)驗(yàn)室即依據(jù)以上標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)25羥基維生素D檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行開(kāi)展前的性能驗(yàn)證。

本次精密度驗(yàn)證嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)文件《臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證(WS/T 420-2013)》進(jìn)行設(shè)計(jì)和結(jié)果判讀。如果計(jì)算值小于或等于廠家聲稱值，則驗(yàn)證廠家聲稱的重復(fù)精密度可靠。如果計(jì)算值大于廠家聲稱值，則需將計(jì)算值與驗(yàn)證值比較，如小于驗(yàn)證值，說(shuō)明此差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明廠家聲稱的重復(fù)精密度可靠。本試驗(yàn)的精密度驗(yàn)證批內(nèi)變異系數(shù)分別是3.18%和3.38%，均小于制造商聲明的批內(nèi)變異系數(shù)(6.50%和4.20%)；而批間變異系數(shù)分別是13.37%和6.23%，大于廠家聲稱值，但小于驗(yàn)證值。因此，本實(shí)驗(yàn)室電化學(xué)發(fā)光技術(shù)檢測(cè)25羥基維生素D精密度驗(yàn)證通過(guò)。

本次正確度驗(yàn)證是依據(jù)中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)CNAS-CL38-《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則在臨床化學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用說(shuō)明》中5.6.3.2條款執(zhí)行:對(duì)沒(méi)有開(kāi)展能力驗(yàn)證/室間質(zhì)評(píng)的檢驗(yàn)項(xiàng)目，應(yīng)通過(guò)與其他實(shí)驗(yàn)室(如已獲認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室，使用相同檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)室，使用配套系統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)室)對(duì)比，判讀檢驗(yàn)結(jié)果的可接受性。該條款要求：樣品數(shù)量至少5份，包括正常和異常水平，頻率至少每年2次，判定標(biāo)準(zhǔn)為應(yīng)有不低于80%的結(jié)果符合要求[7]。25羥基維生素D屬于無(wú)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)項(xiàng)目，根據(jù)CNAS-CL38中5.6.3.2替代方案，本次正確度試驗(yàn)選取的5份標(biāo)本，偏倚均小于衛(wèi)生部最大允許誤差的1/2，正確度驗(yàn)證通過(guò)。

本次線性范圍的驗(yàn)證是嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)文件《臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)商品定量試劑盒分析性能的驗(yàn)證(WS/T 420-2013)》進(jìn)行設(shè)計(jì)和結(jié)果判讀。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室新使用一種試劑時(shí)，必須確定其線性范圍，因線性范圍寬窄對(duì)于定量檢測(cè)的臨床化學(xué)分析方法極為重要[8]。Roche公司對(duì)于25羥基維生素D聲明的線性范圍為3～70 ng/mL，由于臨床上患者高值標(biāo)本十分缺少，無(wú)法滿足廠商提供的線性范圍。本試驗(yàn)選取了盡量靠近試劑說(shuō)明書的線性高低值，低值為3.165 ng/mL，高值為48.515 ng/mL。統(tǒng)計(jì)軟件多項(xiàng)式回歸數(shù)據(jù)擬合結(jié)果顯示：線性方程為Y=1.002 9X+0.069 3，R2為0.999 1，斜率為1.003。斜率在0.97～1.03并且R2≥0.95，本實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的線性范圍為3.165～48.515 ng/mL。

本次生物參考區(qū)間的驗(yàn)證是嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)文件《臨床實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間的制定(WS/T 402-2012)》進(jìn)行設(shè)計(jì)和結(jié)果判讀。若實(shí)驗(yàn)室希望或需要對(duì)參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，則實(shí)驗(yàn)室可以從本地參考人群中篩選少量參考個(gè)體(n=20)，將其測(cè)得值與參考區(qū)間的原始參考值相比較。若20個(gè)測(cè)定值中落在參考限外的測(cè)定值不超過(guò)2個(gè)，則該參考區(qū)間可直接使用[9]。本次生物參考區(qū)間驗(yàn)證結(jié)果均在廠家提供的參考區(qū)間內(nèi)，實(shí)驗(yàn)室可直接使用廠家提供的25羥基維生素D參考范圍(>20 ng/mL)。

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(收稿日期：2015-12-26)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.06.029

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)06-0786-03