結(jié)直腸癌組織中EZp蛋白陽性表達(dá)及意義

姚坤厚，魏倫收，馬萬里，胡軍紅(河南大學(xué)淮河醫(yī)院，河南開封475001)

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結(jié)直腸癌組織中EZp蛋白陽性表達(dá)及意義

姚坤厚，魏倫收，馬萬里，胡軍紅(河南大學(xué)淮河醫(yī)院，河南開封475001)

摘要：目的探討果蠅zeste基因增強(qiáng)子同源物2(EZp)蛋白在結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法選擇結(jié)直腸癌組織52例份(結(jié)直腸癌組)及遠(yuǎn)癌正常腸組織22例份(正常組)，采用免疫組化SP法檢測兩組EZp蛋白表達(dá)，并分析其陽性表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果結(jié)直腸癌組EZp陽性表達(dá)率為69.2%(36/52)，正常組為4.5%(1/22)，二者比較P<0.05。結(jié)直腸癌組EZp陽性表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤部位及臨床分型無關(guān)(P均>0.05)，與組織分化程度、Duke分期及腫瘤直徑有關(guān)(P均<0.05)。EZp陽性者3年無疾病進(jìn)展生存率為49.8%，EZp陰性者為79.6%，EZp陽性者疾病進(jìn)展風(fēng)險顯著高于陰性者(HR=2.91，95% CI為1.23～3.66，P<0.05)。結(jié)論EZp蛋白陽性表達(dá)變化與結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，可作為判斷預(yù)后不良的指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：結(jié)直腸癌；EZp蛋白；免疫組化；臨床病理特征；預(yù)后

結(jié)直腸癌是臨床常見的消化系統(tǒng)腫瘤，近年來其發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1]。目前關(guān)于結(jié)直腸癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移的分子生物學(xué)機(jī)制尚不十分清楚[2]，但普遍認(rèn)為其惡性生物學(xué)行為是涉及多基因、多步驟的調(diào)控過程。研究發(fā)現(xiàn)，果蠅zeste基因增強(qiáng)子同源物2(EZp)在多種實體腫瘤組織中異常表達(dá)，并與腫瘤的惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)[3，4]，但其在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的研究報道較少。2010年4月～2015年8月，我們觀察了結(jié)直腸癌組織中EZp蛋白陽性表達(dá)情況，并分析其陽性表達(dá)與患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系。現(xiàn)報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇同期我院收治的結(jié)直腸癌患者52例。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診為結(jié)直腸癌；術(shù)前未接受過新輔助化療；術(shù)后隨訪數(shù)據(jù)完整；組織標(biāo)本獲取經(jīng)家屬簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理診斷不明者；術(shù)前接受過放化療或生物治療者；合并其他惡性腫瘤者。其中，男28例、女24例，年齡36～75歲(58.6±12.3)歲。結(jié)腸癌20例、直腸癌32例，腫瘤直徑1.2～10.3 cm；組織分化程度：高、中分化11例，低、未分化41例；Duke分期：A、B期30例，C、D期22例；臨床分型：腫塊型23例，浸潤型20例，潰瘍型9例。

1.2EZp蛋白表達(dá)檢測取52例患者手術(shù)切除的癌組織標(biāo)本(結(jié)直腸癌組)，取其中22例患者遠(yuǎn)癌正常腸組織標(biāo)本(正常組)。采用免疫組化SP法檢測兩組EZp蛋白表達(dá)。結(jié)果判定[5]：采用雙盲法對染色結(jié)果進(jìn)行判定，在400倍顯微鏡下每張切片選取5個視野，計數(shù)每個視野中的細(xì)胞總數(shù)及EZp陽性細(xì)胞數(shù)。EZp陽性染色定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀。根據(jù)染色強(qiáng)度和染色面積綜合計分。染色強(qiáng)度：不著色為0分，輕度著色為1分，中度著色為2分，強(qiáng)著色為3分；染色面積：無著色為0分，<25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分。兩積分相加≤2分為EZp陰性表達(dá)，>2分為EZp陽性表達(dá)。

1.3隨訪術(shù)后定期隨訪，記錄患者疾病進(jìn)展或死亡事件的發(fā)生時間，采用Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較不同EZp表達(dá)者3年無疾病進(jìn)展生存率。

2結(jié)果

2.1兩組EZp陽性表達(dá)比較結(jié)直腸癌組EZp陽性表達(dá)率為69.2%(36/52)，正常組為4.5%(1/22)，二者比較P<0.05。

2.2EZp陽性表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系EZp陽性表達(dá)與結(jié)直腸癌患者性別、年齡、腫瘤發(fā)生部位及臨床分型無關(guān)(P均>0.05)，而與組織分化程度、Duke分期及腫瘤直徑有關(guān)(P均<0.05)。見表1。

表1　EZp陽性表達(dá)與結(jié)直腸癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3不同EZp表達(dá)者預(yù)后比較EZp陽性者3年無疾病進(jìn)展生存率為49.8%，EZp陰性者為79.6%，EZp陽性者隨訪期間疾病進(jìn)展風(fēng)險顯著高于陰性者(HR=2.91，95%CI為1.23～3.66，P<0.05)。見圖1。

圖1　不同EZp表達(dá)者預(yù)后狀況生存曲線

3討論

EZp是1996年發(fā)現(xiàn)的一個新基因，當(dāng)時命名為ENX-1[6]。EZp在體內(nèi)外均能與Vav相互作用，是果蠅zeste基因增強(qiáng)子[E(z)]的人類同源物[7，8]。EZp基因定位于人7號染色體3帶5區(qū)，為多梳蛋白復(fù)合體PcG家族的重要成員之一[9]。EZp基因?qū)Ω杉?xì)胞表型的維持是必不可少的。既往研究發(fā)現(xiàn)，EZp表達(dá)產(chǎn)物可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖及擴(kuò)散，在多種惡性腫瘤(如前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等)組織中異常表達(dá)[7，10～12]。臨床研究還發(fā)現(xiàn)，在人類前列腺癌演化過程中，EZp基因表達(dá)逐漸升高，并隨著其表達(dá)水平逐漸升高，多個分化相關(guān)基因的表達(dá)受到抑制。EZp具有組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶和多種基因的調(diào)控作用，參與多個基因的轉(zhuǎn)錄抑制[13]。EZp介導(dǎo)的基因沉默依賴HDAC活性，HDAC抑制劑可完全消除EZp的抑制作用。故EZp發(fā)揮功能既需要完整的SET結(jié)構(gòu)域，又需要內(nèi)源性HDAC的活性。提示HDAC抑制劑在EZp高表達(dá)的腫瘤中可能有效。但EZp與結(jié)腸癌的關(guān)系研究較少，其與結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為及患者預(yù)后的關(guān)系不十分清楚[14]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，通過小干擾RNA下調(diào)人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116中EZp基因表達(dá)后，細(xì)胞凋亡比例增加，細(xì)胞增殖能力明顯降低[15]，表明EZp可能參與人結(jié)腸癌細(xì)胞增殖與凋亡過程。也有文獻(xiàn)報道，EZp為典型的癌基因，在多種惡性腫瘤細(xì)胞(如乳腺癌、前列腺癌、肺癌等)高表達(dá)[16，17]。本研究結(jié)果顯示，結(jié)直腸癌組EZp陽性表達(dá)率顯著高于正常組；EZp陽性表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤部位及臨床分型無關(guān)，與組織分化程度、Duke分期及腫瘤直徑有關(guān)。在組織分化程度較低、Duke分期較高和腫瘤直徑較大者EZp陽性表達(dá)率較高。說明EZp與結(jié)直腸癌的惡性行為有關(guān)，EZp陽性表達(dá)者惡性生物學(xué)行為明顯高于陰性表達(dá)者。生存分析顯示，EZp陽性者3年無疾病進(jìn)展生存率明顯低于EZp陰性者。說明EZp陽性表達(dá)與患者預(yù)后不良有關(guān)。

綜上所述，EZp陽性表達(dá)變化與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，且與患者預(yù)后有關(guān)，可作為判斷預(yù)后不良的指標(biāo)。

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(收稿日期：2015-12-04)

中圖分類號：R735.3

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)08-0052-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.08.020

通信作者：馬萬里(E-mail： wanlima_g@126.com)

基金項目：河南省科技公關(guān)計劃項目(14A320064)。