肝癌組織中miRNA-200b表達及其與患者生存時間的關系

崔靜，于泳，劉超，周英發，鄭鵬遠( 鄭州大學第二附屬醫院，鄭州45004； 鄭州大學第五附屬醫院)

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肝癌組織中miRNA-200b表達及其與患者生存時間的關系

崔靜1，于泳1，劉超1，周英發1，鄭鵬遠2(1 鄭州大學第二附屬醫院，鄭州450014；2 鄭州大學第五附屬醫院)

摘要：目的探討miRNA-200b(miR-200b)在肝癌組織中的表達及其與患者生存時間的關系。方法選擇行手術治療的原發性肝癌患者76例，術中留取肝癌組織以及癌旁正常組織，采用RT-PCR技術檢測miR-200b表達，分析其表達與患者臨床病理特征的關系。以miR-200b相對表達量的中位數為界值，將患者分為miR-200b高表達和低表達，采用Kaplan-Meier生存分析法比較其生存情況。結果肝癌組織中miR-200b相對表達量為0.61±0.12，癌旁正常組織為1.37±0.19，二者比較P<0.05。miR-200b表達與肝癌患者淋巴結轉移有關(P<0.05)，與年齡、性別、腫瘤大小、分化程度、TNM分期、肝炎史和AFP均無關(P均>0.05)。miR-200b相對表達量中位數為0.597，76例患者中miR-200b高表達32例、低表達39例。隨訪2～60個月，miR-200b高表達者生存22例(68.7%)、中位生存期47.5個月，低表達者生存16例(41.0%)、中位生存期31.0個月；miR-200b高表達者生存率及生存期均高于低表達者(P均<0.05)。結論miR-200b在肝癌組織中低表達，其低表達與腫瘤浸潤、轉移有關，可影響患者生存時間。

關鍵詞：原發性肝癌；miRNA-200b；淋巴結轉移；生存時間

原發性肝癌是一種常見的惡性腫瘤，具有惡性程度高、易轉移、病死率高等特點[1，2]。其發病機制目前尚未完全清楚，可能是多因素共同作用的結果。微小RNA(miRNA)是一種廣泛參與機體多種生物學功能的非編碼短小RNA，可調控細胞增殖、分化和凋亡，在腫瘤發生、發展中具有重要作用[3]。miRNA-200b(miR-200b)是miR-200家族的重要成員，通過調控上皮-間質間轉化(EMT)，在多種惡性腫瘤的發生、發展過程中發揮抑癌基因功能[4，5]。近年來，miR-200b與惡性腫瘤的關系已成為臨床研究的熱點，特別是與原發性肝癌的關系[6]。2008年5月～2010年5月，我們檢測了原發性肝癌組織及癌旁組織中miR-200b表達，并分析其表達與患者臨床病理參數及預后的關系。現報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料選取同期在鄭州大學第二附屬醫院手術切除的原發性肝癌組織及癌旁(距腫瘤邊緣>3 cm)正常組織標本各76份。患者男57例、女19例，年齡27～79(56.7±10.4)歲；有肝炎(乙肝或丙肝)病史44例。組織病理學檢查明確診斷，組織類型均為肝細胞癌，TNM分期：Ⅰ、Ⅱ期56例，Ⅲ、Ⅳ期20例，有淋巴結轉移49例。所有患者術前未接受放化療。

1.2miR-200b表達檢測術中留取肝組織標本，液氮冷凍，-80 ℃冰箱保存。取肝癌及癌旁組織標本，研磨，采用TRIzol試劑盒提取組織中總RNA。所有操作嚴格按照說明書進行，并對獲得的總RNA進行檢測，取A260/A280>1.8的標本完成后續實驗。采用逆轉錄試劑盒將總RNA逆轉錄為cDNA，以cDNA為模板，用PCR試劑盒完成PCR檢測。miR-200b引物序列：上游引物：5′-UAAUACUGCCUGGUAAUGAUGA-3′，下游引物：5′-AUCAUUACCAGGCAGUAUAAAU-3′；GAPDH引物序列：上游引物：5′-ATGTTCGTCATGGGTGTGAAC-3′，下游引物：5′-CCAAAGTTGTCATGGATGACC-3′。PCR反應條件：95 ℃ 10 min，94 ℃ 30 s，56 ℃ 20 s，70 ℃ 15 s，共38個循環。每個樣品均設置3個平行反應復孔。采用2-ΔΔCt法計算miR-200b相對表達量。

1.3隨訪隨訪截至2015年5月31日，隨訪時間2～60個月。采取門診隨訪和電話隨訪相結合，Kaplan-Meier生存分析法計算患者的總生存期。以miR-200b相對表達量的中位數為界值，將患者分為miR-200b高表達(中位數以上)和低表達(中位數以下)，統計不同表達者總生存期。

2結果

2.1miR-200b在肝癌及癌旁組織中表達肝癌組織中miR-200b的相對表達量為0.61±0.12，癌旁正常組織為1.37±0.19，二者比較差異有統計學意義(t=31.173，P<0.05)。

2.2肝癌組織miR-200b相對表達量與患者臨床病理特征的關系見表1。

表1　肝癌組織miR-200b相對表達量與患者

注：*指既往明確診斷為慢性乙肝或丙肝者。

2.3不同miR-200b表達與肝癌患者預后的關系miR-200b相對表達量中位數為0.597，32例為miR-200b高表達，39例為低表達。miR-200b高表達者至隨訪截至日期生存22例(68.7%)，中位生存期47.5個月；低表達者生存16例(41.0%)，中位生存期31.0個月。Log-rank檢驗顯示，miR-200b高表達者生存期高于低表達者(χ2=12.067，P<0.05)。見插頁Ⅱ圖6。

3討論

miR-200家族是miRNA的重要組成部分，可在多種腫瘤組織中異常表達。研究發現，miR-200家族能抑制腫瘤轉移中的關鍵步驟——EMT轉化過程，在腫瘤轉移過程中扮演重要角色[7～10]。miR-200b為miR-200家族的重要成員，亦參與腫瘤細胞浸潤、轉移等多種生物學行為[11，12]；在膽管癌組織中miR-200b低表達，上調miR-200b表達可降低人膽管癌細胞的侵襲力，增加其凋亡[13]；在子宮內膜癌中miR-200b作為癌基因，可抑制抑癌基因的表達，促進腫瘤進展[14]。但目前關于miR-200b在原發性肝癌組織中的表達研究較少。

本研究顯示，肝癌組織中miR-200b相對表達量低于癌旁正常組織，提示miR-200b低表達可能與肝癌發生、發展過程有關；肝癌組織中miR-200b相對表達與患者淋巴結轉移有關，提示miR-200b表達下調可能參與肝癌的細胞侵襲及轉移過程。Kaplan-Meier生存分析顯示，miR-200b高表達者中位生存期長于低表達者，表明miR-200b高表達可提高患者生存率，延長生存期，與楊西勝等[15]報道基本一致。已有研究證實，miR-200b參與腫瘤細胞遷移、侵襲調控過程[16]。結合本研究結果，推測miR-200b在肝癌發生中可能發揮抑癌基因作用，高表達miR-200b可能通過下調E-cadherin或直接抑制EMT而減少腫瘤細胞遷移、侵襲的發生。

綜上所述，miR-200b在肝癌組織中低表達，其低表達與腫瘤浸潤、轉移有關，可影響患者生存時間。

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(收稿日期：2015-09-28)

中圖分類號：R735.7

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)08-0047-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.08.018

通信作者：鄭鵬遠(E-mail： 1541421042@qq.com)