玉燭散水煎液對血虛型結腸慢傳輸型便秘小鼠胃腸功能的影響及其作用機制

呂艷鋒，王建新，李志文，崔振華，王賢仁，禹化龍，喻苗，金鐳，劉貞吉(山東大學第二醫院，濟南250033)

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玉燭散水煎液對血虛型結腸慢傳輸型便秘小鼠胃腸功能的影響及其作用機制

呂艷鋒，王建新，李志文，崔振華，王賢仁，禹化龍，喻苗，金鐳，劉貞吉(山東大學第二醫院，濟南250033)

摘要：目的探討不同濃度玉燭散水煎液對血虛型結腸慢傳輸型便秘(STC)小鼠胃腸功能的影響及其可能的作用機制。方法制備含生藥0.8、0.4、0.2 g/mL的玉燭散水煎液(分別為高、中、低濃度)。建立小鼠血虛型STC模型60只，隨機分為模型對照組、莫沙必利組，高、中、低濃度玉燭散組，每組12只；莫沙必利組予莫沙必利灌胃，高、中、低濃度玉燭散組分別予高、中、低濃度玉燭散水煎液20 mL/kg灌胃；另選正常小鼠12只作為空白對照組，空白對照組、模型對照組均予等體積生理鹽水灌胃。各組均連續灌胃7天。比較各組第1次排黑便時間、排便粒數、排便重量及血清5-羥色胺(5-HT)、胃動素(MTL)、NO水平。結果與空白對照組比較，模型對照組第1次排黑便時間明顯增加，排便粒數、排便質量顯著降低(P均<0.05)；與模型對照組比較，高、中濃度玉燭散組第1次排黑便時間明顯縮短，糞便粒數和重量顯著增加(P均<0.05)；與莫沙必利組比較，高、中濃度玉燭散組第1次排黑便時間亦顯著縮短，糞便粒數和重量亦顯著增加(P均<0.05)；并且高、中濃度玉燭散組效果優于低濃度玉燭散組(P均<0.05)。與空白對照組比較，模型對照組血清5-HT水平明顯降低(P<0.05)；與模型對照組比較，高、中、低濃度玉燭散組及莫沙必利組血清5-HT水平明顯升高(P均<0.05)。與空白對照組比較，模型對照組血清MTL水平明顯降低(P<0.05)；與模型對照組比較，中濃度玉燭散組血清MTL水平明顯升高(P<0.05)。與空白對照組比較，模型對照組血清NO水平明顯升高(P<0.05)；與模型對照組比較，中濃度玉燭散組、莫沙必利組血清NO水平明顯降低(P均<0.05)。結論0.8、0.4、0.2 g/mL的玉燭散水煎液均能促進血虛型STC小鼠腸蠕動，改善其胃腸功能，呈一定的量效關系；其機制可能與升高血清5-HT、MTL水平，降低血清NO水平有關。

關鍵詞：結腸慢傳輸型便秘；血虛型便秘；玉燭散；小鼠

結腸慢傳輸型便秘(STC)又稱結腸無力，屬腸道動力障礙性疾病[1，2]。中醫認為，STC大多屬中醫虛秘范疇，多以虛證為主，臨床以氣虛、血虛便秘居多，且虛實夾雜，多伴血瘀，臨證以養血潤腸、化瘀通便為治法，常能獲得滿意療效。玉燭散出自中醫古籍《儒門事親》，具有調養氣血、通瘀潤腸之功效，多用于治療虛型便秘。本課題組自2008年開展關于便秘胃腸道動力方面的中醫藥研究，前期研究發現，玉燭散中部分單味藥物在藥理上有促進排便作用，但其成方功效具體機理鮮見報道。2012年12月~2013年10月，我們觀察了玉燭散水煎液對血虛型STC小鼠胃腸功能的影響，現分析結果，并探討其可能的作用機制。

1材料與方法

1.1材料健康ICR小鼠100只，4周齡，雌雄各半，體質量18～22 g，由山東魯抗醫藥集團提供，許可證號：SCXK(魯)20080002。所有小鼠于山東大學第二醫院實驗動物中心適應性飼養，溫度20～22 ℃，相對濕度50%～60%。復方苯乙哌啶(批號：20110703，長春長紅制藥有限公司)；枸櫞酸莫沙必利片(批號：110511，魯南貝特制藥有限公司)；納米碳混懸液(規格：50 mg/支，批號：20100022，重慶萊美藥業股份有限公司)；電子天平(型號：DS-425P，上海寺崗電子有限公司)；恒溫鼓風干燥箱(型號：DHG-9030A，上海精宏儀器廠)。 玉燭散水煎液(主要成分為當歸、川芎、熟地、白芍、大黃、芒硝、甘草)制備：取同一批次各藥材飲片(除芒硝)10 g，用蒸餾水浸泡30 min，煎煮30 min收集煎液，煎液中加入芒硝10 g，攪拌充分溶解。原渣再加水煎20 min，過濾取煎液，兩液合并后加熱蒸發，制成含生藥0.8、0.4、0.2 g/mL的水煎液(分別為高、中、低濃度)，4 ℃冰箱保存備用。

1.2動物分組及處理所有小鼠適應性飼養48 h。隨機取12只作為空白對照組。其余小鼠制作血虛型STC模型[3,4]：復方苯乙哌啶(1.875 mg/kg)連續灌胃30天。灌胃首日下午，用75%乙醇棉球擦拭小鼠尾部，使血管擴張充血，剪去鼠尾尖端(0.25～0.30 cm)，將鼠尾傷口浸入37 ℃溫水中，直至小鼠失血0.15～0.20 mL。每5天同法放血1次，共6次。共制成血虛型STC模型小鼠60只。

將成模小鼠隨機均分為模型對照組、莫沙必利組及高、中、低濃度玉燭散組，每組12只。按人和動物比例折算藥物用量[5]，莫沙必利組給予枸櫞酸莫沙必利片1.875 mg/kg，用生理鹽水稀釋至0.05 mg/mL灌胃，2次/d；高、中、低濃度玉燭散組分別予高、中、低濃度玉燭散水煎液20 mL/kg灌胃，2次/d?？瞻讓φ战M、模型對照組給予等體積生理鹽水灌胃。各組均連續灌胃7天。末次灌胃前禁食12 h，灌胃液加入納米碳混懸液1 mL，混勻后灌胃。

1.3相關指標觀察

1.3.1排便情況觀察灌胃后第1次排黑便時間，連續觀察12 h，計數排便粒數，并稱取糞便重量。

1.3.2血清5-羥色胺(5-HT)、胃動素(MTL)、NO各組收集完糞便后，腹腔注射4%水合氯醛麻醉，下腔靜脈取血，4 ℃ 2 500 r/min離心10 min，取上清，檢測血清5-HT、MTL、NO。所有操作嚴格按試劑盒說明進行。

2結果

2.1各組排便情況比較見表1。

表1　各組排便情況比較±s)

注：與空白對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，#P<0.05；與莫沙必利組比較，△P<0.05；與低濃度玉燭散組比較，▲P<0.05。

2.2各組血清5-HT、MTL、NO水平比較見表2。

表2　各組血清5-HT、MTL、NO水平比較

注：與空白對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，#P<0.05；與莫沙必利組比較，△P<0.05；與中濃度玉燭散組比較，▲P<0.05。

3討論

STC是由結腸傳輸功能障礙引起的一種常見疾病，表現為排便次數減少、排便困難、腹脹等，其確切發病機制尚不清楚[6～8]。目前西醫治療以各類瀉藥為主，多數患者治療早期病情有所緩解，但長期服用瀉藥易產生耐藥，部分患者產生藥物依賴性，表現為服藥即便、停藥即秘，出現濫用瀉藥綜合征、瀉劑結腸等，部分長期服藥者出現水電解質紊亂、心律失常等。

近年來，中藥單方及組方治療便秘多有報道，如單味中藥枳實、木香、養血潤腸方等[9，10]，均可增加胃腸道推進率。玉燭散來自《儒門事親》卷十二，由當歸、川芎、熟地、白芍、大黃、芒硝、甘草組成，主要功用是養血清熱、泄積通便，主治血虛秘結?！冻煞角杏谩分^：取《爾雅》“四時和氣，謂之玉燭”之義。古籍中對其頗為推崇，《血證論》釋：取四物以補調其血，而芒硝、大黃逐瘀去閉。

5-HT是參與調節胃腸道運動和分泌功能的重要神經遞質和旁分泌信號分子，與慢性便秘、腸易激綜合征、腹瀉等胃腸道功能性疾病密切相關[11～13]。結腸體外實驗證明，5-HT類似物能夠加速結腸運動，而其拮抗劑則明顯抑制結腸運動[14]。MTL是一種含有22個氨基酸的活性直鏈多肽，分泌MTL的細胞分布于十二指腸和近端空腸黏膜隱窩及絨毛中，在胃底、胃竇及小腸下部黏膜有少量分布，通過血液循環以內分泌的方式調節胃腸運動，其主要生理作用是促進消化間期的胃腸運動，是參與胃腸動力的一種興奮性肽[15]。NO在腸道的生理活動中具有重要作用，通過擴散方式進入胃腸平滑肌細胞，激活可溶性鳥苷酸環化酶，引起cGMP升高，可減少細胞內鈣離子濃度，使結腸平滑肌松弛導致胃腸蠕動減弱[16]。

莫沙必利作為第四代促胃腸動力藥物，是一種強效5-HT受體激動劑，通過興奮肌間神經叢5-HT受體，刺激乙酰膽堿釋放，增強胃腸運動，已得到廣泛認可。本研究結果顯示，與莫沙必利組比較，高、中濃度玉燭散組第1次排黑便時間明顯縮短，排便粒數及重量明顯增加。表明玉燭散水煎液可用于STC的治療。本研究還發現，與空白對照組比較，模型對照組血清5-HT水平明顯降低；與模型對照組比較，高、中、低濃度玉燭散組及莫沙必利組血清5-HT水平明顯升高。與空白對照組比較，模型對照組血清MTL水平明顯降低；與模型對照組比較，中濃度玉燭散組血清MTL水平明顯升高。與空白對照組比較，模型對照組血清NO水平明顯升高；與模型對照組比較，中濃度玉燭散組、莫沙必利組血清NO水平明顯降低。表明玉燭散可能通過升高血清5-HT、MTL水平，降低血清NO水平而發揮治療作用。

綜上所述，0.8、0.4、0.2 g/mL的玉燭散水煎液均能促進血虛型STC小鼠腸蠕動，改善其胃腸功能，呈一定的量效關系；其機制可能與升高血清5-HT、MTL水平，降低血清NO水平有關。

參考文獻：

[1] Lyford GL, He CL, Soffer E, et al. Pan-colonic decrease in interstitial cells of Cajal in patients with slow transit constipation[J]. Gut, 2002,51(4):496-501.

[2] Sanders KM, Ordog T, Ward SM. Physiology and pathophysiology of the interstitial cells of Cajal: from bench to bedside. Ⅳ. Genetic and animal models of GI motility disorders caused by loss of interstitial cells of Cajal[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2002,282(5):G747-G756.

[3] 盧文麗，方肇勤，潘志強，等.四種不同品系小鼠氣虛血虛證候的比較與評價[J].遼寧中醫雜志,2007,34(4)：519-522.

[4] 劉麗莎，張微，趙敏，等.功能性便秘動物造模方法研究概況[J].實用中醫內科雜志，2015,29(2)：169-172.

[5] Kobayashi A, Yokota H, Kobayashi H, et al. Mucosal neuroendocrine cell abnormalities in patients with chronic constipation[J]. Asian J Surg, 2004,27(3):197-201.

[6] Bassotti G, Villanacci V. Slow transit constipation: a functional disorder becomes an enteric neuropathy[J]. World J Gastroenterol, 2006,12(29):4609-4613.

[7] Chan AO, Cheng C, Hui WM, et al. Differing coping mechanisms, stress level and anorectal physiology in patients with functional constipation[J]. World J Gastroenterol, 2005, 11(34):5362-5366.

[8] Benatar A, Feenstra A, Decraene T, et al. Effects of cisapride on corrected QT interval, heart rate, and rhythm in infants undergoing polysomnography[J]. Pediatrics, 2000,106(6):E85.

[9] 吳承艷，李振彬，石建喜.木香、丁香和威靈仙鎮痛及胃腸動力作用的實驗研究[J]．江蘇中醫藥，2005，26(12):61-63．

[10] 邱劍鋒，李國棟，肖誠，等.養血潤腸方對小鼠血虛型慢性功能性便秘結腸組織勻漿及血清中 NO的影響[J].江西中醫藥大學學報，2007,19(3)：68-69.

[11] Prasansuklab A, Poovorawan Y, Tencomnao T. Modulation of human serotonin transporter expression by 5-HTTLPR incColon cells[J]. Int J Mol Sci, 2011,12(10):6619-6634.

[12] Priem EK, De Maeyer JH, Vandewoestyne M, et al. Predominant mucosal expression of 5-HT4(+h) receptor splice variants in pig stomach and colon[J]. World J Gastroenterol, 2013,19(24):3747-3760.

[13] Chua AS, Keeling PW, Dinan TG. Role of cholecystokinin and central serotonergic receptors in functional dyspepsia[J]. World J Gastroenterol, 2006,12(9):1329-1335.

[14] Lacy BE, Yu S. Tegaserod: a new 5-HT4 agonist[J]. J Clin Gastroenterol, 2002,34(1):27-33.

[15] He Y, Wang H, Yang DY, et al. Differential expression of motilin receptor in various parts of gastrointestinal tract in dogs[J]. Gastroenterol Res Pract, 2015,2015:970940.

[16] Francis SH, Busch JL, Corbin JD, et al. cGMP-dependent protein kinases and cGMP phosphodiesterases in nitric oxide and cGMP action[J]. Pharmacol Rev, 2010,62(3):525-563.

(收稿日期：2015-12-08)

中圖分類號：R574.62

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)08-0025-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.08.009

通信作者：王建新(E-mail： youtow@sina.com)

基金項目：山東省自然科學基金資助項目(ZR2011HQ049)；濟南市青年科技明星計劃項目(201004055，20090208)。