Bmi1、EZH2在食管鱗癌中的表達及其臨床價值

幸小均

618300 四川省廣漢市人民醫院

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Bmi1、EZH2在食管鱗癌中的表達及其臨床價值

幸小均

618300 四川省廣漢市人民醫院

【摘要】目的探討Bmi1與EZH2共同高表達對食管鱗癌的影響。方法回顧性分析82例食管鱗癌患者的臨床資料，考察Bmi1與EZH2在食管鱗癌組織中的表達情況及其對食管鱗癌患者生存率的影響，并進一步分析Bmi1與EZH2的表達情況對食管鱗癌的影響是否存在關聯性。結果腫瘤組織Bmi1與EZH2的IS得分均明顯高于癌旁組織(P<0.05)；Bmi1高表達組患者2～5年及5年生存率較Bmi1低表達組低(P<0.05)，EZH2高表達組患者各時間段生存率與低表達組比較差異無統計學意義(P>0.05)；Bmi1與EZH2共同高表達組與其他組的食管鱗癌患者的P16表達情況差異無統計學意義(P>0.05)。結論Bmi1與EZH2與食管鱗癌的發生和發展有密切聯系，且影響食管鱗癌患者的預后，Bmi1與EZH2共同高表達是食管鱗癌發生的獨立危險因素。

【關鍵詞】Bmi1基因；EZH2基因；食管鱗癌；危險因素

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:537～540)

Bmi1與EZH2均屬于多梳基家族的成員(PcG)，Bmi1為多梳基抑制復合體1(PRC1)的重要組成之一[1]，EZH2參與多梳基抑制復合體2(PRC)的組成[2]。多梳基家族(PcG)基因具有高度的保守性，在組織器官的發育中發揮重要作用，并且參與調控多種生理過程，包括調節靶基因的轉錄，干細胞的更新，細胞分化以及腫瘤發生等[3-5]。相關研究已經證實，Bmi1與EZH2在多種腫瘤組織中異常表達，表明其在腫瘤的發生和發展中發揮重要作用[6]，但是Bmi1和EZH2與食管鱗癌的發生和發展的相關性尚不完全清楚。本研究對我院確診的82例食管鱗癌患者進行回顧性研究，現將相關內容報告如下。

1材料與方法

1.1一般資料

選取2006年4月-2010年4月期間我院確診的82例食管癌患者，其中男性47例，女性35例，年齡43～78歲，平均年齡(58.3±5.4)歲。本研究82例食管鱗癌患者均符合以下入選標準：①所選標本經病理學確診為食管鱗癌和癌旁組織；②均未經放化療治療；③患者隨訪資料完整。所有患者均于手術前獲取患者的食管鱗癌組織和癌旁組織，并制作石蠟標本，用于進一步的免疫組化分析。

1.2研究方法

所有患者均于手術時切除標本進行10%福爾馬林固定，石蠟包埋，然后進行(1)脫蠟水化：置于二甲苯Ⅰ~Ⅲ 各5 min，100%酒精Ⅰ~Ⅲ 各1 min，95%酒精 1 min， 75%酒精 1 min，雙蒸水洗滌 2 min 共2次；(2)抗原修復：10 mM 枸櫞酸緩沖液(pH6.0)，微波加熱97 ℃12 min，室溫自然冷卻；(3)1×PBS洗滌2 min，2次；雙蒸水洗滌 5 min 共3次，3% H2O2室溫孵育10 min；(4)雙蒸水洗滌 2 min，1次，1×PBS洗滌2～5 min，2次；(5)封閉：5% BSA-PBST 室溫1 hr；(6) 一抗40 ℃孵育過夜(不超過16 hr)；(7)1×PBST洗滌8 min，2次；1×PBS洗滌8 min，2次；(8)二抗室溫孵育 1 hr；(9)1×PBST洗滌8 min，2次；1×PBS洗滌8 min，2次；(10)ABC室溫孵育 10 min；(11)1×PBS洗滌8 min，3次；(12)DAB 染色出現陽性結果后用雙蒸水沖洗終止染色過程；(13)蘇木精復染1 min；后用雙蒸水洗滌5 min。(14)脫水保存：系列75%乙醇30 s；100%乙醇30 s；二甲苯30 s；中性樹膠封閉后蓋上玻片，避免氣泡產生[7]。

本研究的免疫組織化學染色評分標準為：根據切片中上皮細胞的免疫組織化學著色深淺的比例分為弱陽性、陽性、強陽性，分別記1分、2分、3分。樣本中Bmi1或EZH2陽性表達細胞所占總細胞的比例分為5級：<5%(0分)，5%~25%(1分)，26%~50%(2分)，51%~75%(3分)和>75%(4分)。根據著色深淺與陽性細胞比例計算免疫反應得分(immunoreactivity score，IS)，IS=樣本著色程度得分×陽性細胞比例得分[8]。

Bmi1高表達是指Bmi1免疫反應得分≥6分，EZH2高表達是指EZH2免疫反應得分≥10分，P16高表達是指P16免疫反應得分≥3分[9]。

1.3統計學方法

使用SPSS 16.0軟件比較各組間差異，計量資料采用均數±標準差表示，計數資料以絕對數和百分率表示，組間比較采用q檢驗加方差F分析，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1Bmi1與EZH2在食管鱗癌組織及癌旁組織中的表達差異

腫瘤組織Bmi1與EZH2的IS得分較癌旁組織高，差異具有統計學意義(P<0.05)；在2種組織中P16的表達差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1　Bmi1、EZH2與P16在食管鱗癌患者組織中的表達情況

注：*為與癌旁組織比較，差異有統計學意義(P<0.05)。

2.2食管鱗癌患者Bmi1與EZH2表達與其臨床資料的關系

根據患者腫瘤組織Bmi1的IS得分分成Bmi1高表達組(Bmi1 H)和低表達組(Bmi1 L)。其中Bmi1高表達組19例，占23.17%;Bmi1低表達組63例，占76.83%。患者性別、腫瘤大小、腫瘤分化程度、臨床分期、以及是否發生遠處轉移在Bmi1高表達組和低表達組比較差異有統計學意義(P<0.05)。

根據患者腫瘤組織EZH2的IS得分分成EZH2高表達組(EZH1 H)和EZH2低表達組(EZH2 L)。其中EZH2高表達組49例，所占比例為59.75%；EZH2低表達組33例，所占比例為40.25%。患者臨床分期、以及是否發生遠處轉移在EZH2高表達組和低表達組比較差異有統計學意義(P<0.05)。,見表2。

表2　食管鱗癌患者Bmi1與EZH2表達與其臨床

Bmi1與EZH2共同高表達組與其他組的食管鱗癌一般臨床資料比較差異均無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3　Bmi1與EZH2的不同表達組與食管鱗癌患者的一般臨床資料分析(例，%)

2.3Bmi1與EZH2的表達與食管鱗癌患者生存率的關系

通過比較各組0~2年、2~5年及5年以上生存率發現，Bmi1 H組的2～5年以及5年生存率低于Bmi1 L組，差異具有統計學意義(P<0.05)；而EZH2 H組與EZH2 L組的各時間段生存率差異均無統計學意義(P>0.05)，見表4。

表4　不同Bmi1與EZH2的表達組患者食管鱗癌患者

進一步分析Bmi1與EZH2共同高表達組Bmi1(H)EZH1(H)與其他各組患者生存率發現，Bmi1與EZH2共同高表達并不縮短患者生存期，(P>0.05)，見表5。

表5　Bmi1與EZH2共同高表達食管鱗癌患者與其他

2.4P16在Bmi1與EZH2高表達食管鱗癌患者中的表達情況

對不同組別患者的P16表達情況進行分析，發現Bmi1與EZH2共同高表達組與其他組的食管鱗癌患者的P16表達情況差異無統計學意義(P>0.05)，見表6。

表6　不同Bmi1與EZH2表達組患者的P16表達

3討論

原癌基因Bmi1和EZH2同屬于多梳基因家族，其具有高度的保守性，相關研究表明Bmi1和EZH2在細胞的生長、增殖中均發揮重要調節作用[10-12]。研究表現Bmi1在胃癌組織中的高表達患者的存活期較短，能夠作為胃癌診斷和治療的一個有價值的標志物[13]。最新的研究提出Bmi1和EZH2可以作為某些癌癥治療的分子靶點[14]。

本研究發現，食管鱗癌組織的Bmi1和EZH2免疫反應得分明顯高于癌旁組織，表明食管鱗癌組織高表達Bmi1和EZH2可能在食管鱗癌的發生和發展過程中起到促進作用。相關研究已經證實，Bmi1與多種腫瘤包括白血病、乳腺癌、胃癌、肺癌、膀胱癌、大腸癌及食管癌等的發生和發展有密切關系[15-16]。通過分析Bmi1的不同表達程度與患者臨床資料的結果表明Bmi1的表達與食管鱗癌生長、遠處轉移和TNM分期具有相關性，而EZH2高水平表達也可能參與食管鱗癌的發生和發展。隨訪發現，Bmi1表達高的患者2～5年以及5年以上生存率明顯低于Bmi1低表達組，表明Bmi1高水平表達影響了食管鱗癌患者手術的預后。

本研究進一步對Bmi1和EZH2共同高表達對食管鱗癌患者的影響， 結果顯示Bmi1和EZH2共同高表達組食管鱗癌患者的一般臨床資料、生存率以及抑癌基因P16的表達情況與其他組比較差異均無統計學意義。本研究主要從食管鱗癌患者的腫瘤組織標本的免疫組化方面著手，并沒有深入到細胞分子水平，有一定的局限性。Bmi1與EZH2的表達與食管鱗癌的更深層次的聯系，還有待進一步的研究證實。

綜上所述，Bmi1與EZH2與食管鱗癌發生和發展有密切聯系，且影響食管鱗癌患者的預后。

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(編輯：甘艷)

Expression of Bmi-1 and EZH-2 in Esophageal Squamous Cell Carcinoma and Its Clinical Value

XINGXiaojun.People’sHospitalofGuanghan，Guanghan,618300

【Abstract】ObjectiveTo explore co-overexpression of Bmi1 and EZH2 on esophageal squamous cell carcinoma.MethodsRetrospective analysis of the clinical data of 82 patients with esophageal squamous cell carcinoma was conducted.Expression of of Bmi1 and EZH2 in esophageal squamous cell carcinoma and its influence on survival rate were detected,and further analysis of the association of Bmi1 and EZH2 expression in esophageal squamous cell carcinoma and its impact was conducted.ResultsThe IS scores of Bmi1 and EZH2 in tumor tissues were significantly higher than adjacent tissues (P<0.05);2~5 and 5-year survival rates of the patients with high expression of Bmi1 were lower than patients with low expression of Bmi1(P<0.05),there had no significant difference in the survival rates at different time between patients with high EZH2 expression and patients with low EZH2 expression (P>0.05);there had no significant difference in P16 expression between patients with co-overexpression of Bmi1 and EZH2 group and other group (P>0.05).ConclusionBmi1 and EZH2 are closely related with the occurrence and development of esophageal squamous cell cancer,and it influence the prognosis of patients,and co-overexpression of Bmi1 and EZH2 is an independent risk factor for esophageal squamous cell carcinoma.

【Key words】Bmi1gene;EZH2 gene;Esophageal squamous cell carcinoma;High risk factor

(收稿日期2015-06-02修回日期 2015-11-20)

中圖分類號：R735.1

文獻標識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)04-0537-04

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.04.005