KPNA2基因沉默對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC7721和Bel7404增殖和侵襲能力的影響

王濤　馬思聰　戚星星　湯曉寅　崔丹　王智　池嘉昌　李萍　翟博

200127　上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院腫瘤介入科

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·論著·

KPNA2基因沉默對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC7721和Bel7404增殖和侵襲能力的影響

王濤馬思聰戚星星湯曉寅崔丹王智池嘉昌李萍翟博

200127上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院腫瘤介入科

【摘要】目的觀察核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因α2(Karyopherin α-2，KPNA2)基因沉默對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC7721和Bel7404增殖以及侵襲能力的影響。方法將KPNA2 siRNA干擾質(zhì)粒用LipofectaminTM 2000方法瞬時(shí)轉(zhuǎn)染人肝癌細(xì)胞株SMMC7721和Bel7404，轉(zhuǎn)染后48 h應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中KPNA2蛋白表達(dá)。采用MTT法檢測(cè)基因沉默細(xì)胞增殖能力，采用Transwell法檢測(cè)基因沉默細(xì)胞侵襲能力。結(jié)果SMMC7721細(xì)胞株對(duì)照組mRNA為1.02±0.13，高于siRNA轉(zhuǎn)染組的0.37±0.07(t=10.78，P<0.01)；肝癌Bel7404細(xì)胞株對(duì)照組mRNA為1.05±0.17，高于siRNA轉(zhuǎn)染組的0.36±0.06 (t=9.38，P<0.01)。肝癌SMMC7721細(xì)胞株對(duì)照組蛋白定量值為0.96±0.10，高于轉(zhuǎn)染組的0.42±0.05(t=11.83，P<0.01)；肝癌Bel7404細(xì)胞株對(duì)照組蛋白定量值為0.93±0.09，高于轉(zhuǎn)染組的0.48±0.06(t=10.19，P<0.01)。SMMC7721和Bel7404細(xì)胞株在24、48和72 h時(shí)對(duì)照組增殖能力高于轉(zhuǎn)染組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。SMMC7721細(xì)胞株對(duì)照組侵襲能力值為126.20±21.61，高于siRNA轉(zhuǎn)染組的51.13±10.2 (t=7.68，P<0.01)；肝癌Bel7404細(xì)胞株對(duì)照組侵襲能力值為125.124±8.04，高于siRNA轉(zhuǎn)染組的55.20 ±18.54 (t=8.48，P<0.01)。結(jié)論KPNA2基因沉默可以調(diào)節(jié)人肝癌細(xì)胞株SMMC7721和Bel7404的增殖能力和侵襲能力。

【關(guān)鍵詞】KPNA2；肝癌細(xì)胞株；SMMC7721；Bel7404；增殖能力；侵襲能力

核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因α 2(Karyopherin α 2，KPNA2)是核定位信號(hào)區(qū)域的一種結(jié)合蛋白，其作為核孔靶向復(fù)合物的組成部分，通過與核定位信號(hào)相結(jié)合的方式將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)入核內(nèi)發(fā)揮作用，從而達(dá)到調(diào)節(jié)相應(yīng)基因表達(dá)的目的[1]。目前相關(guān)研究表明，KPNA2與細(xì)胞癌變密切相關(guān)，KPNA2基因沉默及過表達(dá)對(duì)人膀胱癌細(xì)胞株5637的增殖能力有調(diào)節(jié)作用[2]。然而，目前有關(guān)KPNA2基因與肝癌的相關(guān)性的研究較少，其確切分子機(jī)制尚不清楚。本研究通過采用RNA干擾(RNA interference，RNAi)對(duì)人肝癌細(xì)胞株SMMC7721和Bel7404進(jìn)行KPNA2基因沉默，探討KPNA2基因干擾對(duì)肝癌細(xì)胞株SMMC7721和Bel7404增殖以及轉(zhuǎn)移能力的影響，以期為深入研究KPNA2基因在肝腫瘤中異常表達(dá)的分子機(jī)制提供新思路。

資料和方法

一、材料與試劑

人肝癌細(xì)胞株SMMC7721和Bel7404購(gòu)自于美國(guó)菌種保藏中心。……