WWOX和Ang-2在乳腺癌生成與發展過程中的表達①

李義強,徐　墨

(佳木斯大學附屬第一醫院,黑龍江 佳木斯 154003)

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WWOX和Ang-2在乳腺癌生成與發展過程中的表達①

李義強,徐墨

(佳木斯大學附屬第一醫院,黑龍江 佳木斯 154003)

摘要:目的：通過WWOX和Ang-2基因在乳腺癌生成與發展過程中相關蛋白含量以及表達,來進一步分析WWOX和Ang-2在女性乳腺癌生成與發展過程中的相關性。方法：選用免疫組化法進行試驗，選取乳腺良性腫瘤中正常組織13例、原位癌12例、浸潤癌45例(其中病理組織學I級16例、II級14例、III級15例)共70例。結果：(1)WWOX、Ang-2基因在正常乳腺組織、原位癌及浸潤癌組織中的陽性表達率分別是76.92%(10/13)，66.67% (8/12)，40.00%(18/45)；53.85%(7/13)，58.33%(7/12)，75.56%(34/45)且每組兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。用統計學方法Spearman分析，二者在三種組織中表達呈負相關(rs=-0.336，P<0.05)。(2)WWOX、Ang-2蛋白在乳腺浸潤癌組織病理分級I、II、III中的陽性表達率分別是62.50%(10/16)，35.71%(5/14)，20.00%(3/15)；56.25%(9/16)，78.57% (11/14)，93.33%(14/15)且每組兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。二者在乳腺浸潤癌病理分級I、II、III級中呈負相關(rs=-0.369，P<0.05)。結論: 在乳腺癌生發過程中，WWOX、Ang-2二者共同參與乳腺癌的發生發展，過程中WWOX表達下降、而Ang-2升高，并且二者在病程中呈負相關作用。

關鍵詞：乳腺癌；WWOX；Ang-2；臨床分期

1材料與方法

1.1材料

選取2013-01~2014-05佳木斯大學附屬第一醫院腫瘤科住院并進行手術的女性患者，收集術中切除的乳腺標本，通過查閱病例中病理科給予的術中快速病理及術后免疫組化結果，選取乳腺良性腫瘤中正常組織13例、原位癌12例、浸潤癌45例(其中病理組織學I級16例、II級14例、III級15例)共70例，年齡25～66歲。所有蠟塊病理組織學類型結果均由病理科確診證實。實驗所用兔抗人WWOX、Ang-2多克隆抗體、DAB顯色劑購于上海聯碩生物有限公司。

1.2免疫組織化學法

〗通過病歷號選取病理科存檔的蠟塊，并將已經第一次固定的標本進行二次固定切片后HE染色，然后檸檬酸抗原修復，滴加兔抗人WWOX、Ang-2多克隆抗體(1:200)，經室溫孵育1h后過夜，后經PBS緩沖液沖洗3次，DAB顯色1~10min后沖洗3次，復染、脫水、透明、固定。陽性對照：用已染呈陽性切片作陽性對照。陰性對照：用PBS片代替為陰性對照。〗

1.3染色判斷

細胞核內出現黃色或棕褐色顆粒認為WWOX陽性表達、細胞漿內出現黃色或棕褐色顆粒認為Ang-2陽性表達。鏡下觀察陽性細胞比例，觀察的所有切片均用雙盲法觀察計數。每張病理切片至少在高倍鏡下(×200)觀察不重復的視野10個，以每100細胞為1個視野計算其中陽性細胞數。根據陽性細胞所占百分比和染色強度分別計分，前者計分按0分為≤0%～10%，1分為10%～25%，2分為26%～50%，3分為為51%～75%，4分為75%～100%。后者計分無色為0分，淡黃色1分，黃色2分，黃褐色3分，兩者相乘得分:(-)為0~3分，(+)為4~6分，()為7~9分，()為10~12分，其中“-”示為陰性表達，"+"以上，示為陽性表達。

1.4統計學方法

采用SPSS18.0統計學軟件進行計算，免疫組化陽性率采用χ2進行檢驗驗，病理分級采用Spearman分析比較，P<0.05差異具有統計學意義。

2.1結果

(1)WWOX、Ang-2基因在正常乳腺組織、原位癌及浸潤癌組織中的陽性表達率分別是76.92%(10/13)，66.67% (8/12)，40.00%(18/45)；53.85%(7/13)，58.33%(7/12)，75.56%(34/45)且每組兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.05)(表1~2)。用統計學方法Spearman分析，二者在三種組織中表達呈負相關(rs=-0.336，P<0.05)，見表5。(2)WWOX、Ang-2蛋白在乳腺浸潤癌組織病理分級I、II、III中的陽性表達率分別是62.50%(10/16)，35.71%(5/14)，20.00%(3/15)；56.25%(9/16)，78.57% (11/14)，93.33%(14/15)且每組兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表3~4。二者在乳腺浸潤癌病理分級I、II、III級中呈負相關(rs=-0.369，P<0.05)，見表6。

表1　WWOX在正常、乳腺癌、原位癌組織中表達

注： χ2=9.525，P<0.05。

表2　Ang-2在正常、乳腺癌、原位癌組織中表達

注： χ2=7.087，P<0.05。

表3　浸潤癌中WWOX表達水平

注： χ2=6.973，P<0.05。

表4　分析結果

注： χ2=7.664，P<0.05。

表5　WWOX與Ang-2在三種組織中相關性

(χ2=5，P<0.05)，(rs=-0.336，P<0.05)。

表6　WWOX與Ang-2在浸潤癌中相關性

(χ2=7.53，P<0.05)，(rs=-0.486，P<0.05)

3討論

目前根據相關文獻中顯示WWOX可與多種腫瘤的發生有一定關聯，如在食管癌，胃癌，肺癌，乳腺癌，前列腺癌，卵巢癌等惡性腫瘤中都出現不同程度的WWOX基因外顯子丟失、雜合性缺失及的表達降低等異常表達[6]。國內學者王曉、晁嵐、秦曉冰、張敬川等人的研究顯示乳腺患者癌組織中的WWOX表達水平明顯降低。還有國外學者Keltouma、Hans、Guler、Nunez等都有相同研究[7]。Ang-2尤其在腫瘤組織中表達有所增強，Charnock-Jones研究表明其可存在于成年女性生殖系統，如：卵巢、子宮內膜等，Ang-2參與生理性血管修復、重建，誘導內皮細胞分裂、移位[8]。像其他實體腫瘤一樣，乳腺癌的生長和轉移也有Ang-2等因子的參與其表達與癌腫臨床分期、血液淋巴道、血道等均有相關[9]。說明乳腺癌的生成與發展的過程中Ang-2的高表起重要作用。其高表達可以使乳腺組織的血管修復、重建等功能調節異常，使腫瘤細胞突破基底膜時得到血液供應幾率增大，可能引起乳腺癌發病幾率增高。本實驗在乳腺正常、原位癌、浸潤癌組織；浸潤癌I級、II級、III級隨著乳腺癌病程遞進過程中，WWOX蛋白表達下降、而Ang-2升高，表明共同參與乳腺癌的發生發展，并且二者在乳腺癌病程發生發展過程中起負相關作用。希望通過本實驗的數據與結果，為檢測乳腺癌發生、發展、治療等方面提供新的依據，為治療提供新思路。

參考文獻:

[1]Holash J,Wiegand S J,Yancopoulos GD.New model of tumor angiogenesis:dynamic balance between vessel regression and growth mediated by angiopoietins and VEGF[J]. Oncogene,1999,18(38):5356-5362

[2]Bednarek AK,Laflin KJ,Daniel RL,et al.WWOX a novel WW domain containing protein mapping to human chromosome 16q23.3-24.1,a region frequently affected in breast cancer[J]. Cancer Res,2000,60(8):2140-2145

[3]Bednark AK,Keck-Waggoner C L,Daniel R L,et al.WWOX,the FRA16Dgene,behaves a suppressor of tumor growth[J].Cancer Res,2001,61(22):8068-8073

[4]李義強,王瑞,王彩霞,等.乳腺癌浸潤發生前后Ang-2的表達及其意義[J].黑龍江醫藥科學,2011,34(1):20-21

[5]Yu Q,Stamenkovic I.Angiopoietin-2 is implicated in the regulation of tumor angiogenesis[J].Am J Pothol,2001,158(2):563-570

[6]Chang NS,Doherty J,Ensign A,et al.WOX1 is essential for tumor necrosis factor,UV light, staurosporine,and p53-mediated cell death, and its tyrosine 33-phosphorylated form binds and stabilizes serine 462 phosphorylated p53[J].Biol Chem,2005,280(52):43

[7]Keltouma Driouch,Hans Prydz,Rossana Monese1,et al Alternative transcripts of the candidate tumor suppressor gene,WWOX are expressed at high levels in human breast tumors[J].Oncogene,2002,21:1832-1840

[8]DS.Soluble flt-1 and the Angiopoietins in the development and regulation of placental vasculature[J].Anat,2002,200(6):607-615

[9]李義強,趙春雨,李壯，等.乳腺癌微淋巴管生成與淋巴道轉移的關系[J].黑龍江醫藥科學,2012,35(2):65-66

(收稿日期：2015-11-10)

中圖分類號：R737.9

文獻標識碼：B

文章編號：1008-0104(2016)01-0072-02無論在國內外乳腺癌都是女性常見的惡性腫瘤之一，近年來其發病率逐年增高，據WHO(世界衛生組織)統計每年診斷為乳腺癌女性至少120萬。本病是一種多因素疾病，隨著人類對疾病診斷、治療與預防手段的提高，乳腺癌的研究方向已逐漸開始涉及更高的基因水平。腫瘤細胞初期在擺脫組織液營養的供給后，血管的建立與養分供應在腫瘤的生成、生長及浸潤過程中起著重要的作用[1]。WWOX (ww domain contaming oxidoreductase) 是由Bednarek與Ried等人用基因測序法分離并分析的方法鑒定出的含氧化還原酶ww結構域的新基因[2]目前WWOX基因的研究逐漸在肺癌、卵巢癌、胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤中展開，并且文獻結果顯示在腫瘤組織中都有表達減弱趨勢[3]。Ang-2(angiopoietin-2，血管生成素-2)是近年發現的調節血管生成的調控因素之一，也是與腫瘤新生作用密切的因子之一[4]，所以Ang-2及其家族近年越來越受到人們的關注，對其的研究正日益增多[5]。本實驗通過免疫組化法檢測正常乳腺組織、乳腺原位癌組織、乳腺浸潤癌組織中WWOX和Ang-2相關的蛋白含表達,來進一步分析二者在女性乳腺癌生成與發展過程中的相關性，爭取尋求新的治療方向，為臨床上治療乳腺癌及預后提供相關的理論依據。

作者簡介：李義強(1962~)男,黑龍江佳木斯人，碩士，主任醫師，碩士研究生導師。通訊作者：徐墨(1982~)男，黑龍江佳木斯人，在讀碩士研究生。E-mail:xumo1982@163.com。