頂空氣相色譜法測定頭孢曲松鈉中三乙胺殘留量

魏永紅，馮　翎，宋世丘(.麗珠集團麗珠合成制藥有限公司質量控制部，廣東 珠海　59030； .麗珠集團麗珠合成制藥有限公司質量保證部,廣東 珠海　59030)

?

頂空氣相色譜法測定頭孢曲松鈉中三乙胺殘留量

魏永紅1*，馮翎2，宋世丘1(1.麗珠集團麗珠合成制藥有限公司質量控制部，廣東 珠海519030； 2.麗珠集團麗珠合成制藥有限公司質量保證部,廣東 珠海519030)

DOI10.14009/j.issn.1672-2124.2016.02.020

摘要目的：建立頂空氣相色譜法測定頭孢曲松鈉原料藥中三乙胺殘留量的方法。方法：以氫氧化鈉溶液為溶劑，采用頂空毛細管氣相色譜法，用DB-624毛細管柱進行梯度升溫方式分離，以氮氣為載氣，氫火焰離子化檢測器測定三乙胺殘留量。結果：在上述色譜條件下三乙胺質量濃度在考察范圍內與峰面積具有良好的線性關系(R2=0.999)，平均回收率為98%～105%，精密度RSD均<5%，最低檢測限為0.03 μg/ml，定量限為0.15 μg/ml。結論：本法簡單、靈敏、準確，適用于頭孢曲松鈉中三乙胺殘留量的測定。

關鍵詞頂空氣相色譜； 頭孢曲松鈉； 三乙胺

Determination of Residual Triethylamine in Ceftriaxone Sodium by Headspace Gas Chromatography Method

WEI Yonghong，FENG Ling，SONG Shiqiu(1.Quality Control Unit，Livzon Pharmaceutical Group Inc.，Guangdong Zhuhai 519030，China； 2.Quality Assurance Unit,Livzon Pharmaceutical Group Inc.，Guangdong Zhuhai 519030，China)

ABSTRACTOBJECTIVE：To establish headspace gas chromatography method to determine residual triethylamine in ceftriaxone sodium (CTR). METHODS：Sodium hydroxide solution was set as solvent，headspace gas chromatography method was adopted，DB-624 capillary column separation was conducted with gradient heating way；and nitrogen was set as carrier gas，FID detector was used to detect the residual triethylamine. RESULTS：Under chromatographic conditions， the concentration of triethylamine within the scope of the investigation and the peak area were in good linear relationship (R2=0.999)，the average recovery was 98%～105%，the precision ofRSD<5%，with the lowest detection limit of 0.03 μg/ml and quantitative limit of 0.15 μg/ml. CONCLUSIONS：The method is simple，sensitive and accurate，suitable for the determination of residual triethylamine in ceftriaxone sodium.

KEYWORDSHeadspace gas chromatography； Ceftriaxone sodium； Triethylamine

頭孢曲松鈉為目前國內抗菌藥物中的基礎一線用藥，其不良反應發生率較其他頭孢類稍高[1-2]，但價格較低，臨床廣泛使用。頭孢曲松鈉的合成工藝中主要用到乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、二氯甲烷、三乙胺等有機溶劑，目前除三乙胺外其他溶劑均有法定的標準和檢驗方法[3]，且也有文獻報道除三乙胺外的其他溶劑的檢驗方法[4-5]。雖然三乙胺的限度標準在《美國藥典》《歐洲藥典》《中國藥典》的正文均沒有硬性規定，但均在凡例中要求凡工藝用到的溶劑需檢驗[6-8]。由于三乙胺具有助溶和輕度的防腐作用，因此需要控制其殘留限度，且其限度(質量分數0.32×10-3)也已收載于《EDQM關于化學純度和微生物質量方面的文檔要求》，因此有必要對其殘留量進行考察。因頭孢曲松鈉會和三乙胺結合，導致其殘留測定具有較大難度。本研究參照《中國藥典2部》(2010年版)附錄殘留溶劑檢查法[9]，并結合其他藥典的要求[10-11]，建立了一種簡單、靈敏、準確的三乙胺殘留量檢測方法。

1材料

1.1儀器

Agilent 7890A(美國Agilent公司)，氫火焰離子化檢測器(FID)；Agilent 1888頂空進樣器；德國沙多利斯電子天平。

1.2藥品與試劑

頭孢曲松鈉(麗珠集團麗珠合成制藥有限公司，批號：91203006～009)；三乙胺(天津富宇精細化工有限公司 ，AR，批號110415910)；氫氧化鈉(國藥集團藥業股份有限公司，AR，批號1110627901)；二甲基甲酰胺(DMF)(天津富宇精細化工有限公司 ，AR，批號100420)；水為純化水。

1.3色譜條件

頂空瓶平衡溫度100 ℃；熱平衡時間30 min；定量環溫度105 ℃；進樣時間1 min；進樣體積1.0 ml；色譜柱DB-624 30 m×0.32 mm×1.8 um；柱溫起始溫度為60 ℃，后以20 ℃/min升溫至150 ℃，保持3 min，再以60 ℃/min,升溫至220 ℃，保持2 min；進樣口溫度200 ℃；柱流量1.0 ml/min；分流比30∶1；載氣為氮氣N2；FID檢測器；檢測器溫度250 ℃。

1.4試驗溶液的配制

取三乙胺適量用DMF制成約0.06 mg/ml的對照品貯備液，再精密量取其1 ml置于頂空瓶中，加DMF 1 ml、水0.5 ml、1 mol/L的氫氧化鈉(NaOH)溶液0.5 ml，混勻，軋蓋密封為對照品溶液；取供試品適量制成0.2 g/ml的供試品貯備液，再取其0.5 ml置于頂空瓶中，同對照品溶液的制備方法操作制成供試品溶液；另同法制備空白對照溶液。

2結果

2.1系統適用性試驗及專屬性試驗

取對照品溶液和空白對照溶液分別置頂空儀中，依法進樣，記錄色譜圖(空白對照溶液圖譜見圖1～2，對照品溶液圖譜見圖3)。其中，三乙胺峰理論塔板數為142 120，其與相鄰雜質峰分離度為30.4，表明本法系統適用性試驗及專屬性試驗均符合要求。

圖1　空白對照溶液(DMF+水+NaOH)圖Fig 1　Blank reference solution(DMF+water+NaOH)

圖2　空白對照溶液(DMF+水)圖Fig 2　Blank reference solution(DMF+water)

圖3　系統適用性試驗(DMF+水+NaOH+三乙胺)典型圖Fig 3　System suitability test(DMF+water+NaOH+triethylamine)

2.2精密度試驗

取對照品溶液6份，依法重復進樣，測定三乙胺的峰面積，結果RSD值為0.6%，表明方法精密度很好。

2.3準確度試驗

取一批待測樣品，制成供試品溶液，依法進樣記錄色譜圖，按外標法計算供試品溶液中三乙胺濃度。

另取供試品貯備液3份，依法加三乙胺制成約含三乙胺80%、100%、120%的濃度。每個濃度配制3份，依法檢測并記錄色譜圖，按標準加入法計算供試品溶液中加入的三乙胺組份的濃度，并計算其回收率。結果80%組平均回收率為98.0%，RSD為3.0%；100%組平均回收率為103.7%，RSD為4.1%； 120%組平均回收率為104.9%，RSD為2.9%；3組平均回收率均在95%～105%之內，符合殘留溶劑準確度的要求。

2.4線性范圍試驗

分別取對照品貯備液適量，依法分別配制成相當于對照品溶液濃度的5%、10%、30%、50%、80%、100%、120%和150%的溶液，依法檢測記錄色譜圖，按峰面積歸一化法計算供試品溶液中增加的三乙胺峰面積為縱坐標，以三乙胺的濃度為橫坐標，繪制標準曲線。結果顯示，三乙胺濃度在1～30 μg/ml濃度范圍內呈線性關系，線性回歸方程為Y=4.350 0X-4.315 0，相關系數為R2=0.999 0，三乙胺的濃度與峰面積的線性關系良好。

2.5檢出限與定量限測定

取三乙胺適量，依法逐級稀釋成不同濃度的測試溶液測定，記錄色譜圖。按信噪比S/N=10.0±1.0時的定量限濃度為0.15 μg/ml；S/N=3.0±1.0時的檢出限濃度為0.03 μg/ml。

3討論

3.1進樣方式選擇

頭孢曲松鈉在水中易溶，在三氯甲烷(CHCl3)或乙醚中幾乎不溶；而三乙胺微溶于水，曾考慮用CHCl3等有機溶劑萃取頭孢曲松鈉中三乙胺[12-13]，但萃取操作較復雜，且萃取劑毒性較大；考慮到三乙胺的沸點不高可采用頂空進樣法測定[14]，且頂空進樣法測定殘留溶劑操作簡單，基質對測定無干擾，對儀器、系統污染小。

3.2溶解介質選擇

三乙胺是有機堿，其沸點約90 ℃，如果全用水為溶解介質，其不易從供試品中揮發。考慮到三乙胺和DMF可以混溶，因此，加入DMF作為溶劑，以使樣品溶液混合更均勻[15]。

另外，通過試驗和分析頭孢曲松鈉及三乙胺的化學結構發現：由于頭孢曲松鈉和三乙胺會結合，導致只用水和DMF做溶劑時樣品的加標回收率均為0，因此必須用堿破壞頭孢曲松鈉的結構后進樣方可出三乙胺峰。通過測試不同濃度下不同體積的NaOH(0.1、0.5、1 mol/L)出峰情況發現：NaOH雖會改變DMF的峰型，但是對三乙胺的定量影響微小，低濃度的NaOH不能使加了三乙胺的頭孢曲松鈉溶液完全釋放出三乙胺，而高濃度的NaOH的量太多又對儀器和色譜柱的損害加大，故選擇1.0 mol/L NaOH溶液0.5 ml為溶解介質，用以增大三乙胺的檢測靈敏度。

3.3色譜柱選擇

三乙胺為含氮堿性化合物[16]，因此采用弱極性的色譜柱DB-624進行分析，三乙胺峰與相鄰峰之間的分離度均能符合要求，且方法重現性好，檢測靈敏度高，非常適合三乙胺殘留量測定，因此選用DB-624石英毛細管柱。

3.4頂空平衡溫度和時間選擇

選擇了80、90、100、110、120 ℃的5個頂空平衡溫度分別進行平衡20 min和30 min的試驗測定表明：平衡時間30 min比20 min的重現性更好；平衡溫度80 ℃和90 ℃的三乙胺的峰面積較小，而高溫度的峰面積相應較大，鑒于110 ℃和120 ℃的峰面積相較于100 ℃無太明顯優勢，且考慮樣品溶液中有0.25倍體積的水，不適用太高溫度的頂空條件，因此，選擇100 ℃頂空平衡30 min的條件。

3.5柱溫選擇

因DMF沸點約150 ℃且較難洗脫，而三乙胺沸點約90 ℃，因此采用程序升溫的方法操作，一方面可以保證三乙胺的分離效果，另一方面也較容易去除DMF的殘留。

4結論

本研究建立的頭孢曲松鈉中三乙胺殘留測定方法操作簡單，避免了三乙胺與頭孢曲松鈉的結合而導致的不出峰情況，同時，檢測的線性范圍廣，靈敏度很高，檢測的準確度和精密度良好，非常適用于頭孢曲松鈉中三乙胺的殘留檢測。

參考文獻

[1]萬春燕，劉秀娟，鄧劍雄，等.2181例頭孢曲松鈉不良反應報告分析[J].廣東藥學院學報，2010，26(4)：404-408.

[2]卞蓉蓉，孫駿. 6916例頭孢曲松鈉不良反應報告分析[J].醫學研究生學報，2012,25(6)：628-630.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010:181-183.

[4]游飛明.頂空氣相色譜法測定頭孢曲松鈉中多種溶劑殘留量[J].福建分析測試，2007,16(1)：15-17.

[5]陳飛，陳華嬌.頂空氣相色譜法測定頭孢曲松鈉中有機溶劑的殘留[J].福建分析測試，2010,19(3)：49-52.

[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2部[S]：中國醫藥科技出版社,2010:凡例 XIV.

[7]U.S.Pharmacopeia National Formulary. USP-37 NF 33. United Book Press,Inc.,Baltimore,MD. General Notices and Requirements 5.60.Impurities and Foreign Substances:6.

[8]European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 8.2. Druckerei C.H.Beck,N?rdlingen(Germany).1.General notices:3897-3904.

[9]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2部[S]:中國醫藥科技出版社,2010:附錄ⅧP.

[10]U.S.Pharmacopeia National Formulary. USP-37 NF 33. United Book Press,Inc.,Baltimore,MD. <467 >RESIDUAL SOLVENTS:309-325.

[11]European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare. European Pharmacopoeia 8.0 Druckerei C.H.Beck,N?rdlingen(Germany). 5.4. Residual solvents:639-646.

[12]李紅影，孫穎麗.氣相色譜法測定頭孢唑林鈉中三乙胺的殘留量[J].黑龍江科技信息，2009，3(7)：182.

[13]姜小林，傅志慧，應志洪，等.氣相色譜法測定奧美拉唑中三乙胺殘留[J].化工生產與技術，2014，21(3)：27-28.

[14]郭瑞,王惠群,楊春巧,等.頂空氣相色譜法測定鹽酸頭孢替安中三乙胺殘留量[J].河北化工,2011(5): 34-57.

[15]劉珊，陳貴斌，洪利婭.頂空進樣氣相色譜法測定克林霉素磷酸酯中三乙胺殘留量[J].中國抗生素雜志，2014，39(3)：217-219.

[16]中國藥品生物制品檢定所，中國藥品檢驗總所.中國藥品檢驗標準操作規范.氣相色譜法[M].2010年版.中國醫藥科技出版社, 2010：94-104.

(收稿日期：2015-08-26)

中圖分類號R978.1

文獻標志碼A

文章編號1672-2124(2016)02-0196-03

*助理工程師。研究方向：藥物分析。E-mail:weihong57@qq.com