卡培他濱雜質ABC含量測定方法的選擇

朱葉芬　胡婷霞　石玲玲

摘 要：目的：建立高效液相色譜法測定卡培他濱原料中雜質ABC含量。方法：色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq柱（4.6×250mm，5mm）；流動相：A相0.1%醋酸：甲醇：乙腈65：30：5，B相0.1%醋酸：甲醇：乙腈15：80：5，梯度洗脫；檢測波長： 250nm；流速：1.0ml/min；柱溫：40℃。結果：卡培他濱雜質A的含量按外標法、自身對照法和加校正因子的自身對照法計算分別為 0.073%，0.078%，0.077%；雜質B的含量分別為0.034%、0.026%、0.033%；雜質C的含量分別為0.030%、0.029%、0.031%。結論：卡培他濱雜質A跟C的含量選擇自身對照法，雜質B的含量選擇加校正因子的自身對照法。

關鍵詞：高效液相色譜方法；卡培他濱；雜質

市面上的卡培他濱是由羅氏生產的希羅達，用于聯合化療治療晚期或轉移性結直腸癌、晚期或轉移性胃癌，也適用于紫杉醇和化療方案治療無效的晚期原發性或轉移性乳腺癌的進一步治療。本文在美國藥典的基礎上[1]優化色譜條件，建立了更合適的色譜條件對卡培他濱的雜質進行更好的控制。該方法簡便，精確，對卡培他濱制劑的質量研究具有積極意義。

1 儀器、試劑與對照品

Agilent 1100高效液相色譜儀，紫外檢測器；METTLER TOLEDO XS105 DualRange 電子天平

甲醇和乙腈，色譜純；冰醋酸為分析純；水為純水

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq （4.6×150mm，5μm）；流動相A：0.1%冰醋酸：甲醇：乙腈65：30：5，B相0.1%冰醋酸：甲醇：乙腈15：80：5，梯度洗脫。0～5min，A相100%；5～20min，A相100%～60%；20～30min，A相60%～50%；50min，A相50%；流速1ml/min，柱溫40℃，波長250nm

2.2 對照品儲備液的制備

分別取雜質ABC約11.25mg精密稱定，至同一250ml容量瓶中，加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液振搖至完全溶解，再加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液稀釋定容至刻度，作為對照品儲備液。

2.3 線性范圍考察

精密吸取上述對照品儲備液0.2ml、0.5ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.5ml，分別加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液稀釋至25ml，作為20%、50%、80%、100%、120%、150%對照品溶液，各進樣10μl，按“2.1色譜條件”分析。以濃度（μg/ml）為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y）進行線性回歸，結果見表1。試驗結果表明在各自的線性范圍內，三種雜質均有良好的相關性。

2.4 供試品溶液的制備

取卡培他濱原料適量，精密稱定至25ml容量瓶中，加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液適量使溶解，再加水：甲醇：乙腈（65：30：5）的混合溶液稀釋定容至刻度，制成約0.6mg/ml的溶液作為供試品溶液。

2.5 重復性試驗

分別精密稱取批號為110701的卡培他濱原料按“2.4”項下的方法制得6份供試品溶液，各進樣10μl，按“2.1色譜條件”分析。按自身對照法、外標法、加校正因子的自身對照法以峰面積計算，比較三種方法，結果見表2

2.6 加樣回收率實驗

取“2.5”項下的卡培他濱原料（批號110701）約15mg量，分別精密稱定，置25ml容量瓶中，分別加入“2.2”項下對照品儲備液0.2ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml各3份，按“2.4”項下制得12份供試品溶液，各進樣10μl；同時取“2.3”項下100%對照品溶液進樣10μl，以“2.5 重復性試驗”項下的測定結果（自身對照法、外標法、加校正因子的自身對照法）為批號110701的含量，按外標法以峰面積計算，結果見表3。

2.7 溶液穩定性試驗

取“2.3”項下100%對照品溶液分別于0、2、4、6、8、10、12小時進樣10μl。試驗結果表明，溶液在12小時內穩定。

2.8 樣品含量測定

取卡培他濱原料3批（110701、110702、110703）各兩份，按“2.4”項制得供試品溶液，各進樣10μl；同時取“2.3”項下100%對照品溶液進樣10μl，按外標法、自身對照法、加校正因子的自身對照法以峰面積計算，結果見表4。

3 討論

本文用外標法、自身對照法、加校正因子的自身對照法三種方法對卡培他濱中三種雜質含量的測定方法進行了選擇，雜質A跟C的含量用三種方法測得的結果一致，自身對照法最簡便，故雜質A跟C的含量選擇自身對照法；雜質B相對于卡培他濱的校正因子為0.78，故不能直接用自身對照法來計算，實驗結果表明外標法及加校正因子的自身對照法計算結果一致，故雜質B的含量選擇加校正因子的自身對照法。

參考文獻

[1] 卡培他濱《美國藥典》標準