MiR-183/182/96基因簇在食管鱗癌組織中的表達(dá)變化及意義

何斌，邱洪清，任麗華，施瑞華(蘇州大學(xué)附屬張家港醫(yī)院，江蘇張家港 5600；東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院)

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MiR-183/182/96基因簇在食管鱗癌組織中的表達(dá)變化及意義

何斌1，邱洪清1，任麗華2，施瑞華2(1蘇州大學(xué)附屬張家港醫(yī)院，江蘇張家港 215600；2東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院)

摘要：目的觀察miR-183/182/96基因簇在食管鱗癌組織中的表達(dá)變化并探討其意義。方法 取32例食管鱗癌組織、21例食管高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織、9例食管低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織，每例患者均取其病變組織及距病變組織5 cm外的正常食管組織各1份。采用Taq-Man qRT-PCR法檢測組織中miR-183、miR-182、miR-96的表達(dá)。結(jié)果miR-183、miR-182在食管鱗癌及正常食管組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，miR-183在食管高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及正常食管組織中的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而miR-182在食管高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及正常食管組織中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，miR-183、miR-182在食管高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在食管低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變及正常食管組織中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；miR-96在食管鱗癌組織、食管高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織、食管低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織中的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 miR-183/182/96基因簇中miR-183在食管鱗癌組織、食管高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織中的表達(dá)上調(diào)，檢測miR-183/182/96基因簇表達(dá)有助于食管鱗癌的早期篩查。

關(guān)鍵詞：食管鱗癌；食管高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變；食管低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變;miR-183/182/96基因簇

食管癌是常見的惡性腫瘤之一，我國以食管鱗癌(ESCC)為主要類型。消化內(nèi)鏡的應(yīng)用有助于食管癌的早期發(fā)現(xiàn)及診斷，但仍有部分人群確診時(shí)已處于晚期，食管癌患者的5年生存率不足10%[1]。近年來，微小RNAs(miRNAs)在腫瘤中的作用機(jī)制成為研究熱點(diǎn)之一，其可與靶基因的信使RNA(mRNA)的3′非編碼區(qū)結(jié)合，降解mRNA或阻斷其翻譯，進(jìn)而調(diào)節(jié)靶基因表達(dá)，在腫瘤中可發(fā)揮促癌或抑癌作用[2]。miR-183/182/96基因簇在多種腫瘤組織中表達(dá)異常，但其在食管鱗癌、食管早期病變組織中的表達(dá)尚未見相關(guān)報(bào)道。2014年7月～2015年5月，我們觀察了miR-183/182/96基因簇在ESCC、食管早期病變組織中的表達(dá)變化，并探討其意義。

1資料與方法

1.1臨床資料經(jīng)病理檢查確診的原發(fā)性ESCC患者32例，男27例、女5例，年齡(68±7)歲。術(shù)前均未接受過放療或化療等輔助治療；消化內(nèi)鏡黏膜下剝離術(shù)后經(jīng)病理確診的高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(HG-IPN)、低級(jí)別上皮內(nèi)瘤變(LG-IPN)患者分別為21、9例。其中HC-IPN患者中男18例、女3例，年齡(70±8)歲；LG-IPN患者中男7例、女2例，年齡(65±9)歲。每例患者均取其病變組織及距病變組織5 cm外的正常食管組織各1份。患者均簽署知情同意書并獲醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。其中食管腫瘤的分期根據(jù)2010年WHO對(duì)于消化系腫瘤分期進(jìn)行劃分[3]。

1.2miR-183/182/96基因簇表達(dá)檢測方法采用Taq-Man qRT-PCR方法檢測上述62例份組織中miR-183/182/96的表達(dá)。 TRIzol法提取組織總RNA，Taq-Man miRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒將10 ng的總RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，其中逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系為15 μL。反應(yīng)條件為16 ℃ 30 min；42 ℃ 30 min；85 ℃ 5 min。此反應(yīng)得出的cDNA后用Taq-Man探針法實(shí)時(shí)定量PCR，檢測組織中miRNA及U6的含量。實(shí)時(shí)定量PCR的反應(yīng)體系為10 μL，反應(yīng)條件為95 ℃ 10 min；95 ℃ 15 s；60 ℃ 60 min，共40個(gè)循環(huán)。miRNA的相對(duì)表達(dá)量以2-ΔΔCT法計(jì)算，U6為內(nèi)參。

2結(jié)果

2.1miR-183在ESCC、HG-IPN、LG-IPN組織中的表達(dá)比較miR-183在32例ESCC組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.559±0.672，在配對(duì)正常食管上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.209±0.260，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。miR-183在21例HG-IPN組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.761±0.793，在配對(duì)正常食管上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.470±0.702，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。miR-183在9例LG-IPN組織中的相對(duì)表達(dá)量為1.487±2.092，在配對(duì)正常食管上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.744±0.852，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而miR-183在HG-IPN及LG-IPN間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2miR-182在ESCC、HG-IPN、LG-IPN組織中的表達(dá)比較miR-182在32例ESCC組織中的相對(duì)表達(dá)量為1.881±2.393，在配對(duì)正常食管上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.571±0.676，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。miR-182在21例HG-IPN組織中的相對(duì)表達(dá)量為3.424±5.898，在配對(duì)正常食管上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量為3.342±5.694，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。miR-182在9例LG-IPN組織中的相對(duì)表達(dá)量為1.068±1.501，在配對(duì)正常食管上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.590±0.452，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。而miR-182在三種組織間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

2.3miR-96在ESCC、HG-IPN、LG-IPN組織中的表達(dá)比較miR-96在32例ESCC組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.800±1.421，在配對(duì)正常食管上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量為1.106±2.173，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。miR-96在21例HG-IPN組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.675±1.655，在配對(duì)正常食管上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.750±1.765，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。miR-96在9例LG-IPN組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.398±0.970，在配對(duì)正常食管上皮組織中的相對(duì)表達(dá)量為0.269±0.608，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同樣，miR-96在三種組織間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

3討論

miR-183/182/96家族位于人7號(hào)染色體長臂31～34位點(diǎn)，該區(qū)域的序列高度保守，參與細(xì)胞重要功能的調(diào)節(jié)[4]。有研究發(fā)現(xiàn)在小鼠體內(nèi)過表達(dá)miR-183/182/96可抑制PTEN表達(dá)，通過Shh信號(hào)途徑促進(jìn)髓母細(xì)胞瘤發(fā)生發(fā)展[5]。此外，家族中的miR-183成員高表達(dá)于滑膜肉瘤、橫紋肌肉瘤、結(jié)腸癌細(xì)胞，靶向抑制EGR1、PTEN促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[6]。亦有研究發(fā)現(xiàn)miR-183低表達(dá)于視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，靶向抑制LRP6表達(dá)，對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、侵襲等產(chǎn)生負(fù)面影響[7]。上述研究提示miR-183在不同腫瘤中可能通過不同的靶基因影響腫瘤進(jìn)展，而miR-183/182/96基因簇在食管鱗癌、食管早期腫瘤中的表達(dá)及生物學(xué)功能目前尚不清楚。

本研究發(fā)現(xiàn)miR-183/182/96基因簇的相對(duì)表達(dá)量高于配對(duì)正常食管組織，其中miR-183在食管鱗癌組織中的相對(duì)表達(dá)量是配對(duì)正常食管組織的3.98倍，在食管高級(jí)別上皮內(nèi)瘤變組織中的相對(duì)表達(dá)量是配對(duì)正常食管組織的2.93倍，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這表明從正常的食管鱗狀上皮向上皮內(nèi)瘤變發(fā)展進(jìn)而演變?yōu)槭彻荀[癌，miR-183表達(dá)水平可能呈逐漸上調(diào)趨勢，在食管早期病變演變?yōu)槭彻荀[癌的生物過程中發(fā)揮重要作用。彭兵鋒等[8]研究發(fā)現(xiàn)，miR-183表達(dá)上調(diào)與ESCC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)；且miR-183表達(dá)上調(diào)者的ESCC患者的中位生存時(shí)間明顯短于非上調(diào)者[8]。而我們的研究發(fā)現(xiàn)miR-183在HG-IPN組織中的表達(dá)水平亦高于配對(duì)正常食管組織，由此我們推測miR-183在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用，其表達(dá)上調(diào)可能是ESCC患者病情發(fā)展迅速、預(yù)后不良的影響因子之一。

綜上所述，miR-183/182/96基因簇高表達(dá)于食管鱗癌組織，miR-183在食管鱗癌的演變過程中發(fā)揮重要作用。

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(收稿日期：2015-11-08)

中圖分類號(hào)：R735.1；R571

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1002-266X(2016)13-0064-02

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.13.025

通信作者：施瑞華(E-mail：ruihuashi@126.com)

基金項(xiàng)目：蘇州市科技計(jì)劃項(xiàng)目(H0303)。