妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中VEGF與MMP-9表達水平與子癇前期病情的相關性

趙　虎,張　凌,蔡一玲,賴　繁

(四川省成都市婦女兒童中心醫院 婦產科,四川 成都,610091)

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妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中VEGF與MMP-9表達水平與子癇前期病情的相關性

趙虎,張凌,蔡一玲,賴繁

(四川省成都市婦女兒童中心醫院 婦產科,四川 成都,610091)

摘要:目的探討血管內皮生長因子(VEGF)與基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)在妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中的表達及其與子癇前期發病的相關性。方法選取晚孕期正常孕婦53例(對照組)、輕度子癇前期患者61例(觀察組Ⅰ)和重度子癇前期患者45例(觀察組Ⅱ),比較3組VEGF、MMP-9的表達水平。結果對照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦的胎盤組織中VEGF陽性表達率分別為86.79%、68.85%、40.00%,MMP-9陽性表達率分別為79.25%、67.21%、37.78%,差異均有統計學意義(P<0.05)。結論正常妊娠孕婦和子癇前期患者胎盤組織中均有VEGF及MMP-9表達，但是子癇前期患者VEGF及MMP-9表達水平均顯著下降。子癇前期病情嚴重程度與VEGF及MMP-9表達水平有相關性。

關鍵詞:子癇前期; 血管內皮生長因子; 基質金屬蛋白酶-9; 妊娠期高血壓疾病

妊娠期高血壓屬于妊娠期的一種特有疾病，其病因及發病機制尚不明確，常發生于妊娠20周以后，在分娩后迅速消失，其發病率為7～12%[1]。患者臨床癥狀主要為尿蛋白、水腫、血液濃縮以及高血壓等，甚至還有可能會發展成為子癇前期(PE)，導致孕產婦以及圍生兒出現死亡情況[2]。血管內皮生長因子(VEGF)和基質金屬蛋白酶9(MMP-9)均對滋養細胞侵入具有重要的影響，是其侵入過程中的重要介導因素[3-4]。本文檢測正常晚期妊娠婦女和子癇前期患者血清中VEGF及MMP-9表達水平，探討其與子癇前期病情的相關性，現報告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料

選取本院2011年1月—2014年1月婦產科住院分娩的孕婦159例，年齡21～40歲，平均(30.6±3.7)歲，孕周35～42周，平均(38.0±2.5)周。其中正常妊娠孕婦53例作為對照組，年齡22～40歲，平均(31.2±3.6)歲，孕周35～41周，平均(37.4±2.7)周；輕度子癇前期患者61例作為觀察組Ⅰ，年齡21～38歲，平均(30.1±3.8)歲，孕周36～42周，平均(38.2±2.6)周；重度子癇前期患者45例作為觀察組Ⅱ,年齡23～40歲，平均(30.3±3.9)歲，孕周37～41周，平均(38.3±2.4)周。3組孕婦年齡、孕前體質量指數(BMI)、孕周、產次及基礎疾病等方面的差異均無統計學意義(P>0.05),具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1試劑與設備:兔抗人MMP-9多克隆抗體(美國SANTA CRUZ公司),濃縮型鼠抗人VEGF單克隆抗體,SP-9000、DAB顯色劑(北京中杉生物工程有限公司)。

1.2.2標本采集:所有孕產婦在分娩結束后，立即在胎盤中央(臍帶附著部的對側母體面)避開大血管和鈣化點取2 cm×2 cm×2 cm胎盤組織，經產婦知情同意，生理鹽水漂洗后置于福爾馬林溶液中固定，常規石蠟包埋后切取4 μm切片行免疫組化分析。

1.2.3免疫組織化學SP法檢測胎盤組織中VEGF和MMP-9的表達:以濃縮型鼠抗人VEGF單克隆抗體和兔抗人MMP-9多克隆抗體作為一抗，分別進行陰性對照。切片脫蠟入水，組織抗原微波修復后按照SP-9000免疫組織化學試劑盒說明書進行操作。經過DAB顯色后顯微鏡下觀察，細胞漿和/或細胞膜內呈現黃色或棕黃色顆粒為陽性細胞。記錄并統計陽性標本數目和陽性表達率。每次實驗均應設陰性和陽性對照。

1.3統計學處理

本研究所得數據全部應用SPSS 21.0統計學軟件進行統計學處理，計數資料實施χ2檢驗及百分比表示,P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

VEGF在對照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦的胎盤組織中均有表達。對照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦VEGF陽性表達率分別為86.79%、68.85%和40.00%,差異有統計學意義(P<0.05)。基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)在對照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦的胎盤組織中均有表達。對照組、觀察組Ⅰ和觀察組Ⅱ孕婦MMP-9陽性表達率分別為79.25%、67.21%和37.78%,差異有統計學意義(P<0.05)。

3討論

在子癇前期發病中，內皮細胞損傷是重要因素。在患者正常妊娠過程中，VEGF會對內皮細胞增生、分化、浸潤以及遷移產生一定的促進作用，影響患者的血管系統生長和修復效果[5]。研究[6]發現，來源于胎盤的抑制血管生成分子sFlt-1一旦出現上升，也會對VEGF及VEGFR-2二者的結合產生抑制作用，降低VEGF生物活性。持續低水平VEGF能夠有效延長內皮細胞功能及存活時間，但是子癇前期患者的臨床sFlt-l增加則會導致VEGF濃度降低，從而無法達到維持血管生成的閾值，引發患者內皮細胞損傷，出現妊娠期高血壓疾病。

妊娠成功的主要影響因素就是絨毛外滋養層細胞正常浸潤子宮內膜，侵潤的正常表現是在對子宮內膜基底膜和基質成分選擇性降解。基質金屬蛋白酶(MMP)是滋養細胞層在浸潤、降解過程中分泌的一類與水解底物結合而發揮降解細胞外基質的蛋白水解酶。MMP-9是滋養細胞分泌的最有效的蛋白水解酶，其分泌量與血管重鑄和滋養細胞侵襲能力密切相關。大量研究[7-9]表明，滋養細胞浸潤子宮內膜能力下降可能與子癇前期的病情相關。本研究結果發現，子癇前期孕產婦和正常妊娠者相比,MMP-9表達水平明顯偏低，并且其MMP-9表達水平隨患者病情的不斷進展而降低。

目前國內外關于VEGF和MMP-9與子癇前期病情嚴重程度關系的報道不多。多數研究只初步證實 VEGF和MMP-9在妊娠高血壓疾病患者胎盤組織中表達下降，但其機制尚不清楚。Sandrim等[10-13]通過采用免疫組織化學法對正常妊娠及子癇前期患者的VEGF和MMP-9實施檢測發現，兩項指標在子癇前期患者胎盤中的表達水平明顯偏低，分析其原因可能和患者滋養細胞浸潤不足有一定相關性，以致患者發生胎盤的淺著床。曹征等[14-16]通過Western Bloting技術、RT-PCR及免疫組織化學法對不同孕產婦胎盤組織中的VEGF和MMP-9表達水平進行檢測，結果顯示子癇前期患者的陽性表達率明顯偏低，分析其原因可能和子癇前期病情有關。研究表明[17-20]采用Western Bloting技術對非妊高征、妊高征孕婦孕期及正常未孕育齡婦女尿中VEGF和MMP-9表達水平進行檢測，結果顯示只有妊娠患者尿液中才能夠成功檢測到VEGF和MMP-9水平，同時尿中VEGF和MMP-9的檢出率是妊高征患者較非妊高征患者低，提示VEGF和MMP-9低表達可能與妊高征相關。

綜上所述,VEGF和MMP-9表達水平對妊娠高血壓疾病發病及進展具有一定關系，且與子癇前期病情嚴重程度具有一定的關系。

參考文獻

[1]常雅麗,李曉紅,李萍,等.妊娠期高血壓疾病患者胎盤組織中VEGF、MMP-9的表達及意義[J].中國婦幼保健,2010,25(23):3265-3267.

[2]Veron D,Bertuccio C A,Marlier A,et al.Podocyte vascular endothelial growth factor (Vegf 164) overexpression causes severe nodular glomerulosclerosis in a mouse model of type 1 diabetes[J].Diabetologia,2011,54(5):1227-1241.

[3]陳利瓊,朱雪潔,朱雪瓊,等.水通道蛋白1和血管內皮生長因子在子癇前期胎盤中的表達與意義[J].實用醫學雜志,2012,28(4):578-580.

[4]Grundmann M,Haidar M,Placzko S,et al.Vitamin D improves the angiogenic properties of endothelial progenitor cells[J].American Journal of Physiology-Cell Physiology,2012,303(9):C954-C962.

[5]吳桂梅,曹艷敏.VEGF 及其受體 sFlt-1在子癇前期患者血清中的變化及意義[J].中國婦幼健康研究,2014,(3):443-444,445.

[6]McGuane J T,Danielson L A,Debrah J E,et al.Angiogenic growth factors are new and essential players in the sustained relaxin vasodilatory pathway in rodents and humans[J].Hypertension,2011,57(6):1151-1160.

[7]顏建英,曾小燕,劉青閩,等.子癇前期孕婦血清、胎盤組織MMP-9及NGAL表達變化及其意義的研究[J].實用婦產科雜志,2011,27(6):464-467.

[8]Shuman Moss L A,Jensen-Taubman S,Stetler-Stevenson W G.Matrix metalloproteinases:changing roles in tumor progression and metastasis[J].The American journal of pathology,2012,181(6):1895-1899.

[9]Singh J,Ahmed A,Girardi G.Role of complement component C1q in the onset of preeclampsia in mice[J].Hypertension,2011,58(4):716-724.

[10]Luizon M R,Sandrim V C,Palei A C T,et al.Epistasis among eNOS,MMP-9 and VEGF maternal genotypes in hypertensive disorders of pregnancy[J].Hypertension Research,2012,35(9):917-921.

[11]單菲,曹征,槐中美,等.子癇前期患者血清脂聯素水平和胎盤MMP-9表達情況及其關系[J].海南醫學院學報,2013,19(12):1644-1646.

[12]Valdes G,Corthorn J.Review:the angiogenic and vasodilatory utero-placental network[J].Placenta,2011,32:S170-S175.

[13]陸勝,季雄娟.血清胱抑素C聯合尿微量白蛋白檢測在妊娠期高血壓疾病早期腎損害診斷中的價值[J].實用臨床醫藥雜志,2014,18(16):188-190.

[14]姚金翠,林德熙.胎盤組織中胰島素樣生長因子Ⅱ(IGF-2)的表達水平與妊娠期高血壓疾病的相關性研究[J].四川醫學,2013,34(05):713-715.

[15]王益群.妊娠期高血壓疾病相關影響因素及對妊娠結局影響的研究[J].中華全科醫學,2015,13(04):77-78.

[16]任雁林,李曼,曹慧蘭,等.孕產婦妊娠期高血壓疾病的發病、轉歸與季節氣候的相關性分析[J].第三軍醫大學學報,2014,36(3):304-306.

[17]程劍,王進全.不同鎮痛方式對妊娠高血壓疾病患者術后免疫及炎性功能狀態的影響[J].實用臨床醫藥雜志,2016(05):131-133.

[18]孫瀅瀅,劉志新,蘇亞楠.臨床干預治療對妊娠期高血壓疾病患者的血壓和妊娠結局的影響[J].中國婦幼保健,2015,30(11):1675-1677.

[19]陳穎青,何超明.妊娠期高血壓疾病與孕產婦發生腦血管疾病的相關性分析[J].中國婦幼保健,2014,29(26):4225-4227.

[20]李長紅,張國艷,馬福穎,等.妊娠高血壓腎損害血清血管性血友病因子及C反應蛋白檢測及意義[J].黑龍江醫藥科學,2015(6):37-38.

收稿日期:2015-12-06

基金項目:四川省衛生廳資助基金(sc20127648)

中圖分類號:R 714.24

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)15-063-03

DOI:10.7619/jcmp.201615018

Relationship between VEGF and MMP-9 expression level and preeclampsia condition in the placenta tissue of pregnant patients with hypertension

ZHAO Hu,ZHANG Ling,CAI Yiling,LAI Fan

(Department of Obstetrics and Gynecology,Maternal and Children Central Hospital of Chengdu,Chengdu,Sichuan,610091)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore the relationship between expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and Matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) and preeclampsia condition in the placenta tissue of pregnant patients with hypertensive disorder.MethodsA total of 53 normal pregnant women in late pregnancy(control group),61 cases with mild preeclampsia(observation group Ⅰ) and 45 cases with severe preeclampsia (observation groupⅡ) in our hospital were selected as research objects,VEGF and MMP-9 expression levels of three groups were detected.ResultsVEGF positive expression rate in the placenta tissue of the control group,observation group Ⅰ and observation group Ⅱ was 86.79%,68.85% and 40.00%,respectively.MMP-9 positive expression rate in the placenta tissue of pregnant women in the control group,observation group Ⅰ and observation group Ⅱ was 79.25%,67.21% and 37.78%,respectively.The results above revealed that the differences were statistically significant.ConclusionVEGF and MMP-9 both express in placenta tissue of normal pregnant women and the patients with preeclampsia,but the VEGF and MMP - 9 expression levels drop in the patients with preeclampsia.It suggests that there is a correlation between the disease severity of preeclampsia and the expression of the two factors.

KEYWORDS:preeclampsia; vascular endothelial growth factor; matrix metalloproteinases-9; gestational hypertension