胃癌及癌前組織中端粒酶活性檢測的臨床探討

林志明?楊旭初

【摘要】 目的 探究胃癌及癌前組織中端粒酶活性檢測的臨床意義。方法 采用端粒重復序列擴增法（TRAP法）對就診的胃癌者、行潰瘍性手術者和行胃鏡檢查者共計178例進行端粒酶活性檢測， 疾病包含腸上皮化生、萎縮性胃炎、早期胃癌、中晚期胃癌。結果 根據患者病情分為胃炎組、腸上皮化生組、胃癌組， 另取正常胃黏膜為空白對照組。端粒酶陽性檢出率胃炎組和空白對照組相比， 差異具有統計學意義（P<0.05）。其余兩組與空白對照組相比， 差異具有統計學意義（P<0.01）。胃癌組與胃炎組、腸上皮化生組相比， 差異具有統計學意義（P<0.05）。患者的性別、腫瘤位置、大小、浸潤深度、是否存在淋巴結轉移、分化程度、臨床分期和胃癌端粒酶表達水平關聯性不大。結論 端粒酶不但能在胃癌組織中可以檢測到， 在癌前病變也有表達。

【關鍵詞】 基因表達調控；酶學；胃癌

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.08.024

和正常細胞相比， 腫瘤細胞有著永生性的特點， 該生物學特征在癌細胞的發生發展中非常重要。如果端粒酶被激活， 則腫瘤細胞就會獲得永生性生物學特征， 進而令患者病情惡化[1]。相關研究證明， 絕大部分癌細胞的端粒酶活性為高表達， 對端粒酶進行檢測， 有著十分重要的臨床意義。結合實際情況， 本文使用TRAP法對胃癌和癌前組織內端粒酶活性進行全面觀察， 目的在于探究端粒酶在胃癌發生與發展中的相關變化和意義， 現報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選擇2013年5月～2014年5月來河南省腫瘤醫院就診的胃癌， 潰瘍性手術和行胃鏡檢查者共計178例為研究對象， 其中男92例， 女86例。從疾病類型上來看， 腸上皮化生23例， 萎縮性胃炎62例， 早期胃癌16例， 中晚期胃癌77例。年齡31.5～72.3歲， 平均年齡（62.3±3.7）歲。

1. 2 方法 在獲取患者組織之后， 在第一時間收集， 放在經過二乙基焦炭酸酯處理過的試管中， 并保存在-80℃環境下。

1. 2. 1 組織制備 取樣本75 mg放置在試管中， 同時使用200 μl的冰緩沖液洗滌， 之后將組織剪碎處理， 于其中添加冷裂解液200 μl， 5 mmol/L的β-巰基乙醇， 濃度為10%的甘油和0.1 mmol/L的蛋白酶抑制劑（AEBSF）， 將上述物質均勻混合后， 放在冰上孵育30 min， 收集上清物質， 后使用紫外分光光度計對核酸與蛋白質的含量進行測定， 置于-80℃環境下保存。

1. 2. 2 端粒酶檢測 本實驗使用TRAP法為基礎， 進行改良， 實施端粒酶檢測工作， 具體如下：依照標準核酸定量， 選取1 μg的物質， 添加去離子水和反應液直到8.5 μl， 放在常溫下反應30 min， 目的在于完成端粒酶介導作用下TS延伸反應， 后加入CX因物1.5 μl， 攪拌均勻后在90℃環境下作用1.5 min， 目的是為了消滅端粒酶活性， 后使用PCR循環設備， 進行增擴處理， 參數設置為：93℃40 s， 48℃40 s， 72℃1 min， 后利用72℃繼續反應， 時間控制在10 min之內， 每次均使用端粒酶陽性為陽性對照， 使用經過RNA酶消化過的組織為陰性對照。選擇1 μg 的提取物， 利用裂解液， 依照1：10和1：100的比例稀釋， 重復上述步驟， 選擇10 μl的PCR產物放在濃度為10%的非變性聚丙烯凝膠中實施電泳， 在干燥后使用X線平片放射到顯影24～48 h。

1. 3 統計學方法 采用SPSS20.0統計學軟件進行統計分析。計數資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2. 1 不同胃黏膜病變組織端粒酶陽性檢出率 本實驗依照患者患病情況， 分成三組， 每個組的端粒酶陽性檢出率如下：萎縮性胃炎24.19%（15/62）（胃炎組）， 腸上皮化生39.13%（9/23）（腸上皮化生組）， 胃癌92.47%（86/93）（胃癌組）， 另取正常胃黏膜為空白對照組， 檢出率為0。胃炎組和空白對照組相比， 差異具有統計學意義（P<0.05）。其余兩組與空白對照組相比， 差異具有統計學意義（P<0.01）。胃癌組與胃炎組、腸上皮化生組相比， 差異具有統計學意義（P<0.05）。

2. 2 端粒酶表達和臨床病理參數之間的關聯性 結合患者的性別、腫瘤位置、大小、浸潤深度、是否存在淋巴結轉移以及分化程度和臨床分期情況， 對胃癌患者進行全面研究， 結果證明， 患者的性別、腫瘤位置、大小、浸潤深度、是否存在淋巴結轉移、分化程度、臨床分期和胃癌端粒酶表達水平關聯性不大。

3 討論

端粒酶的活化程度與癌細胞的一些生物學行為有著密切的關聯性， 有實驗證明[2]， 早期胃癌患者的端粒酶檢出率明顯比晚期胃癌者高， 且存在淋巴結轉移的患者檢出該物質的幾率比無淋巴結轉移者高。對患者進行隨訪發現[3]， 端粒酶呈現為陽性的胃癌患者術后存活率明顯比陰性患者低， 這在一定程度上證明， 對端粒酶實施活性檢測， 不但對臨床診斷有很大的幫助， 且對于患者疾病預后同樣存在重要的現實意義。

對臨床病理參數和端粒酶表達之間的關系進行研究同樣能夠獲知患者的性別、腫瘤位置、大小、浸潤深度、是否存在淋巴結轉移以及分化程度、臨床分期和胃癌端粒酶表達水平關聯性不大。

本實驗在萎縮性胃炎和腸上皮化生組織內也檢測出端粒酶活性， 這在一定程度上證明， 端粒酶在癌前病變或相關疾病中存在表達現象， 上述端粒酶活化過的細胞可能就是癌前細胞的一種， 因此對端粒酶陽性患者來講， 實施相關檢測， 能夠盡早判斷出其是否存在胃癌， 其臨床意義需要進一步通過隨訪來證明。

綜上所述， 端粒酶不但在腫瘤組織內可以表達， 且在早期病變時就有了表達跡象， 證明端粒酶對于腫瘤的發生發展有著必然性作用， 對于胃癌的早期診治有著極其重要的現實意義。因為癌癥分期和不同癌基因激活/抑制有著密切聯系， 而端粒酶活化在一定程度上代表了癌細胞永生化發展， 所以說對于已經活化的端粒酶基因實施有針對性的治療， 有著良好的臨床前景。

參考文獻

[1] 陳海偉， 楊靜茹. 端粒和端粒酶與癌癥發生和治療的關系研究進展. 赤峰學院學報（自然科學版）， 2014， 30（19）：51-54.

[2] 王大虎.端粒酶和PinX1基因在食管癌中的表達及生物學意義. 河北醫科大學， 2011.

[3] 張丹. miR-1182下調hTERT的分子機制及其對胃癌細胞增殖和轉移的影響.第三軍醫大學， 2014.

[收稿日期：2015-11-11]