3種乙型肝炎表面抗原ELISA診斷試劑的比較和評價(jià)

石建新

(深圳市福田區(qū)慢性病防治院，廣東深圳 518048)

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·臨床研究·

3種乙型肝炎表面抗原ELISA診斷試劑的比較和評價(jià)

石建新

(深圳市福田區(qū)慢性病防治院，廣東深圳 518048)

摘要:目的比較3種乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELlSA)檢測試劑盒的性能指標(biāo)。方法收集該院門診患者血清樣本312例，同時(shí)使用3種ELISA表面抗原試劑盒檢測HBsAg，并對所有初檢陽性樣本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。結(jié)果312例血清樣本中，檢測結(jié)果完全一致共計(jì)299例(占95.8%)，北京萬泰、珠海麗珠、上海榮盛這3種試劑盒的特異度分別為98.7%、98.3%、97.4%，靈敏度分別為100.0%、100.0%、98.7%，漏診率分別為0、0、1.3%，誤診率分別為1.3%、1.7%、2.6%，診斷準(zhǔn)確度分別為99.0%、98.7%、97.8%。結(jié)論3種ELISA試劑盒診斷性能均達(dá)到了臨床對檢測HBsAg的要求，診斷準(zhǔn)確度以北京萬泰最高。3種試劑盒都有假陽性出現(xiàn)，且假陽性樣本都呈弱反應(yīng)性(吸光度小于1.0)，因此對ELISA初檢結(jié)果陽性特別是弱反應(yīng)性的樣本需要再次用靈敏度與特異度更高的時(shí)間分辨熒光免疫分析(TRFIA)技術(shù)或HBV DNA等技術(shù)復(fù)檢以減少假陽性，有條件的實(shí)驗(yàn)室可采用確認(rèn)試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)。

關(guān)鍵詞:乙肝表面抗原；試劑；性能

乙型肝炎是我國主要的傳染病之一，乙型肝炎病毒 (HBV)感染可引起急慢性肝炎、肝硬化、肝癌等病變。目前全球約有3．5億HBV攜帶者，約15%～20% 的患者死于HBV感染引起的相關(guān)疾病，其中三分之一在中國[1-2]。乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)作為HBV感染的第一個(gè)血清標(biāo)志物[3]，具有重要的臨床檢測價(jià)值，HBsAg的準(zhǔn)確檢測對診斷HBV感染極為重要。目前我國大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELlSA)來檢測HBsAg，但不同廠家由于包被物、標(biāo)記材料及方法學(xué)等方面的差異，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)同一份標(biāo)本用不同廠家的試劑盒檢測，結(jié)果的陰陽性存在差異，為此，研究者選擇了市場上常見的3種ELISA試劑盒進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來源收集本院門診患者血清標(biāo)本312例，所有標(biāo)本均空腹采集靜脈血，3 000 r/min離心10 min 后，及時(shí)分離血清，置-20 ℃以下凍存。

1.2儀器與試劑檢測用酶標(biāo)儀為美國寶特ELX-800，洗板機(jī)為美國伯樂全自動(dòng)洗板機(jī)，3種表面抗原檢測試劑盒均為國內(nèi)市場上常見的品牌，分別為北京萬泰、珠海麗珠、上海榮盛，確認(rèn)試劑為珠海麗珠試劑有限公司提供的中和確認(rèn)試劑。

1.3檢測方法同時(shí)采用3種 ELISA試劑盒檢測收集到的血清標(biāo)本HBsAg，并對所有初檢陽性樣本進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，檢測過程中設(shè)陰、陽對照、空白對照和陽性質(zhì)控，操作與結(jié)果判斷嚴(yán)格按試劑盒說明進(jìn)行。

2結(jié)果

312例血清樣本中，3種試劑盒檢測結(jié)果完全一致共計(jì)299例，一致率為95.8%，其中77例陽性，222例陰性，檢測結(jié)果不一致13例(占4.2%)，對3種試劑檢測結(jié)果不一致和初檢陽性的樣本再進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，13例不一致樣本僅有1例確認(rèn)試驗(yàn)為陽性，其余12例確認(rèn)結(jié)果均為陰性，77例陽性結(jié)果確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果均為陽性。萬泰、麗珠、榮盛這3種試劑盒檢測結(jié)果出現(xiàn)假陽性的例數(shù)分別為3、4、6例，榮盛出現(xiàn)了1例假陰性。以確認(rèn)試驗(yàn)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算3種試劑盒性能指標(biāo)，見表1， 其中特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)；靈敏度=真陽性/(真陽性+假陰性)；漏診率=假陰性/(假陰性+真陽性)；誤診率=假陽性/(假陽性+真陰性)；診斷準(zhǔn)確率=(真陽性+真陰性 )/(真陽性+真陰性+假陽性+假陰性)。

表1　　3種HBsAg檢測試劑盒性能指標(biāo)(%)

3討論

目前乙型肝炎診斷主要還是靠血清標(biāo)記物的檢出，盡管已經(jīng)有不少新技術(shù)應(yīng)用于臨床，但受制于收費(fèi)高或儀器貴等原因，我國大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室仍采用ELISA來做HBV檢測。國產(chǎn)檢測 HBsAg的ELISA試劑盒品牌較多，由于不同生產(chǎn)廠家采用的包被物、標(biāo)記材料等差別，試劑盒的性能也有差別。本研究選擇市場上常見的萬泰、麗珠、榮盛這3種品牌的試劑進(jìn)行評價(jià)，研究發(fā)現(xiàn)，3種試劑盒的特異度、靈敏度、誤診率、漏診率和診斷準(zhǔn)確度等性能指標(biāo)均能達(dá)到臨床檢測 HBsAg的要求，可以滿足臨床需要。但3種試劑盒的各種性能指標(biāo)仍然有一定的差別，靈敏度方面3種試劑盒均較高，其中萬泰和麗珠靈敏度達(dá)到了100.0%，而榮盛盡管靈敏度相對較低，但是也達(dá)到了98.7%，診斷準(zhǔn)確度從高到低依次是萬泰、麗珠、榮盛，萬泰試劑盒在本研究中診斷準(zhǔn)確度最高，達(dá)到99.0%，萬泰試劑因?yàn)椴淮嬖诼┰\現(xiàn)象，靈敏度和特異度上具有更好的優(yōu)越性，可以作為初篩方法的首選。

研究還發(fā)現(xiàn)，萬泰、麗珠、榮盛這3種試劑盒檢測結(jié)果均有假陽性，榮盛出現(xiàn)了1例假陰性，這說明ELISA試劑還存在假陽性和假陰性情況，這和傅立強(qiáng)等[4]、姚家奎等[5]學(xué)者的報(bào)道一致，并且3種試劑盒檢測所出現(xiàn)的假陽性樣本均為弱反應(yīng)性樣本(吸光度小于1.0)，因此，對于ELISA法檢測 HBsAg陽性特別是較低水平的弱反應(yīng)性標(biāo)本有必要再次用靈敏度與特異度更高的時(shí)間分辨熒光免疫分析技術(shù)[6]或HBV DNA等技術(shù)復(fù)檢以減少假陽性，有條件的實(shí)驗(yàn)室可采用確認(rèn)試驗(yàn)對結(jié)果進(jìn)一步確認(rèn)，以免出現(xiàn)誤診。

綜上所述，由于一些HBV低水平攜帶者的低抗原量及檢測方法學(xué)所限等原因易造成HBsAg的漏檢和假陽性，如何根據(jù)檢測方法各自的優(yōu)勢及臨床需要來選擇經(jīng)濟(jì)適用、結(jié)果可靠的方法，尤其需引起臨床醫(yī)生和檢驗(yàn)工作者的重視。

參考文獻(xiàn)

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[6]王家杰，何慶明，劉佳文，等．乙型肝炎病毒標(biāo)志物定量檢測方法的評價(jià)[J]．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36(1)：123-124.

(收稿日期：2015-10-18)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.056

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0554-02