探討冷藏期間實驗室反復使用HIV質控血清對其穩定性的影響

謝　明

(廣西醫科大學第三附屬醫院檢驗科,廣西南寧 530031)

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·論著·

探討冷藏期間實驗室反復使用HIV質控血清對其穩定性的影響

謝明

(廣西醫科大學第三附屬醫院檢驗科,廣西南寧 530031)

摘要:目的基于冷凍質控血清復溶后在冷藏期間多次反復使用，對人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體質控血清穩定性的影響進行探討及尋找應對措施。方法將10支HIV質控血清從-20 ℃冰柜取出，室溫平衡30 min使其完全融化，隨機排列到病例樣本之中，按常規樣本進行加樣檢測,加樣完畢后及時保存至2～8 ℃冰箱；次日起，上述質控品從2～8 ℃冰箱取出室溫平衡30 min后，隨機排列到病患樣本之中，按常規樣本進行加樣檢測，加樣完畢后及時保存至2～8 ℃冰箱，重復以上活動至第7天；采用單因素重復測量資料的方差分析進行統計分析，同時，把同一天的10支質控品檢測值取平均值作為一個“檢測點”與日常質控圖進行比較，觀察變化情況。結果單因素重復測量資料的方差分析,說明在不同測量天數上差異有統計學意義(F=48.515,P<0.01),結合質控圖發現,從第4天開始質控值開始出現“告警”狀態，且呈漂移式的下降至失控狀態。結論HIV質控血清凍溶后置于2～8 ℃冰箱冷藏，期間反復多次使用，3 d后穩定性受到影響，質控圖出現漂移、甚至失控的變化。

關鍵詞:酶聯免疫吸附試驗；質控血清；穩定性；人類免疫缺陷病毒；抗體

人類免疫缺陷病毒(HIV)主要經血液以及性傳播途徑傳播,其抗體檢測分為篩查試驗(包括初篩和復檢)和確證試驗。篩查方法包含酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、化學發光或免疫熒光試驗、快速檢測(RT)及其他檢測試驗。ELISA檢測HIV抗體具有特異度強、靈敏度高、操作方便等優點，是篩查常用方法，但易受到多種因素的影響，造成假陽性或假陰性，因此室內質控對提高ELISA檢測抗-HIV的準確度起著關鍵的作用，每一次實驗必須使用室內質控品，以便監控實驗的重復性，提高篩查實驗的可靠性[1-3]。全國艾滋病檢測技術規范(2009修訂版)中規定，弱陽性質控以該試劑盒臨界值(cut-off)的2～3倍為宜，最常用的質控圖是Levey-Jennings質控圖，該圖使用累計技術或趨勢分析技術的圖形提供系統偏移和漂移的狀況。本文對冷藏期間反復使用對質控血清穩定性的影響進行研究，為質控樣品的正確保存、使用以及質控數據分析提供一些數據支持，現報道如下。

1材料與方法

1.1材料病例樣本來源于每天門診送檢的標本，弱陽性HIV質控品10支。

1.2儀器與試劑Rayto酶標分析儀(RT-2100C)、手工移液器、水浴箱溫育、洗板機洗板、振蕩儀、某國產人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒(酶聯免疫法)、室內質控血清、去離子水、量筒、微量加樣器配套吸頭、一次性手套等。

1.3方法

1.3.1實驗前質量控制(1)檢測試劑使用前必須經過質量確認，保證符合預期使用要求；(2)質控品使用前必須經過質量檢查，管間或瓶間變異必須小于監測系統預期的變異(CV<20%)，弱陽性質控以該試劑盒臨界值(cut-off)的2～3倍為宜，并且質控品應穩定、無菌，且不含有影響試劑反應的防腐劑；(3)檢測儀器設備按使用操作規程規定進行校準、維護：保證檢測時儀器設備狀態良好，符合實驗要求；(4)人員經過專業培訓，具有醫學檢驗專業知識和技能，具備檢驗技術人員資格。

1.3.2樣品檢測將10支HIV質控血清從-20 ℃冰柜取出，室溫平衡30 min使其完全融化，隨機排列到病例樣本之中，按常規樣本進行加樣檢測,加樣完畢后及時保存至2～8 ℃冰箱，次日起，上述質控品從2～8 ℃冰箱取出室溫平衡30 min后，隨機排列到病患樣本之中，按常規樣本進行加樣檢測，加樣完畢后及時保存至2～8 ℃冰箱，重復以上活動至第7天；采用單因素重復測量資料的方差分析進行統計分析，同時，把同一天的10支質控品檢測值取平均值作為一個“檢測點”與日常質控圖進行比較，觀察變化情況。

1.4統計學處理運用MedCalc 11.4.2.0質控圖繪制及分析；運用SPSS18.0進行單因素重復測量資料的方差分析進行統計分析，當Mauchly檢驗P>0.05時，認為協方差球形性質滿足，不需要校準模式，否則需要Geenhouse-Geisser或Huynh-Feldt調整系數，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.2不同測量天數上的差異質控品在不同時間的檢測值通過單因素重復測量資料的方差分析:球形檢驗P=0.042<0.05,Geenhouse-Geisser校正后F=48.515,P<0.01,Huynh-Feldt校正后F=48.515,P<0.01,說明在不同測量天數上差異有統計學意義。

表1　　觀察對象質控品在不同時間的檢測值S/CO比較

3討論

臨床實驗室，通常在控制圖上畫出單個控制測定值，并與已確定“控制限”進行比較，來判斷分析是“在控”還是“失控”。為質控目的而制備的標本稱為質控物或質控品，其本身的性能指標、正確使用與保存對于室內質控至關重要[4-6]。抗體質控血清不變化、穩定是因為在制備過程添加了防腐劑，好的質控品在-20 ℃或在規定的保存條件下，至少穩定1～2年，凍融后置于2～8 ℃冰箱冷藏也可以穩定1周，但是“規定的保存條件”的前提條件應該是保存期間不受到額外因素的干擾，有實驗發現，連續凍融7次，OD值下降20%左右，連續凍融15 次，下降26.1%[8]，按管間或瓶間變異必須小于監測系統預期的變異(CV<20%)的要求，此質控品已經是不符合使用的要求；或是結合Levey-Jennings 質控圖進行分析，將是出現嚴重的失控狀態。因此，反復凍融、保存條件、運輸環境等因素對ELISA質控血清穩定性的影響，歷來受到關注[7-9],但是，凍融后置于2～8 ℃冰箱冷藏，期間反復使用對質控血清穩定性的影響的觀察或研究并不多見。

本文通過實驗發現，冷藏的“規定的保存條件”的前提條件同樣應該是保存期間不受到額外因素的干擾。質控品凍溶后至2～8 ℃冰箱冷藏并反復使用，前3 d的穩定性上能滿足，其波動性較小，均為“在控”狀態，但是第4天開始就出現“告警”，至第5天質控品檢測值S/CO平均下降22%[(2.394-1.861)/2.394×100%]，見表1，呈漂移式的態急劇下降導致“失控”。筆者認為，盡管說明書表明2～8 ℃冰箱冷藏穩定一周，但在臨床實際工作中，室內質控是一個連續性的工作，每次實驗室都必須按要求從2～8 ℃冰箱取出室溫平衡30 min左右，如此反復平衡，必然導致保存溫度的不穩定性；其次在每次加樣過程中都會增加加樣尖攜帶的細菌污染質控品的機會。

質控品的穩定性好可以減少浪費是顯而易見的，假如某批實驗明明是在控的，但卻是因為冷藏期間反復多次使用后導致質控品的不穩定性而導致了實驗的“失控”，按要求，該批實驗屬于 “無效”，必須重新實驗，假設實驗人員還是認為該值質控品尚在保存的有效期限內，沒有意識到質控本身其實已經失效，那么可以想象到重新實驗還是難于獲得“在控”狀態。李金明[10]研究員指出,室內質控(IQC)的目的是確保臨床測定過程及結果在偏差和精密度方面達到預定的標準，IQC主要包括3個方面，即測定前的質量控制、統計學質量控制、質量控制的評價。其中測定前的質量控制也包含三方面的內容：(1)實驗室的環境、設施和設備；(2)理想的測定試劑和方法；(3)人員培訓。因此就要求臨床實驗室必須制定一個詳細的實驗室室內質量控制控規程，除了明確質控品質量檢查和確認的要求外，對質控品的使用和保存也要非常詳細的規定，比如室內質控品在使用完畢后,應即時放回2～8 ℃冰箱冷藏，至于冷藏期間到底是要求3 d內或4 d內使用，建議實驗室應自行評估后決定。同時，本文的觀察結果也提示,具有自動化霜功能的冰箱或低溫冰柜對質控品的穩定性是否影響，有待進一步研究。

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Discussed the influence of the stability that laboratory repeated use the HIV quality control serum during the cold storage

XieMing

(DepartmentofClinicalLaboratory，theThirdAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning,Guangxi530031,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of repeated use on the stability of HIV quality control serum during cold storage,and put forward measures to deal with.MethodsTen HIV serum from -20 degrees celsius freezer room temperature balance out,30 minutes to make it completely melted,randomly arranged in the patient sample,added sample testing according to the normal sample,after the end of time to save 2 to 8 degrees celsius refrigerator.The next day,the above quality control products from 2 to 8 degrees celsius refrigerator,after 30 minutes at room temperature,randomly arranged in the patient sample,add sample testing according to the normal sample,after the end of time to save 2 to 8 degrees celsius refrigerator,repeat the above activities to seventh days.Using repeated measure，at the same time,took the average 10 quality control of product values on the same day as a "checkpoint" compared with daily quality control chart,observe changes.ResultsIt suggested that in different measurement on the number of days the difference was statistically significant(F=48.515,P<0.01),combined with the quality control chart found,which was starting from the fourth day quality value "warning" status,began to appear and the drift of fell out of control.ConclusionHIV quality-control serum at 2 to 8 degrees celsius refrigerator,used repeatedly during 3 days late stability is affected,the change of quality control diagram appear drift,even is out of control.

Key words:enzyme-linked immunosorbent assay;quality control serum;stability;human immunodeficiency virus;antibody

(收稿日期：2015-10-08)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.028

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)04-0499-03

作者簡介：謝明，女，主治醫師，主要從事免疫檢驗研究。